CD34、VEGF在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義

姚傳山?馬磊?趙旭林?賀利民

【摘要】 目的 探討CD34及血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）中的表達(dá)、關(guān)系及臨床意義。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢32例肺癌組織和25例癌旁組織中VEGF表達(dá)及MVD值， 觀察二者數(shù)值變化與組織學(xué)類型、分化程度和淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果 與瘤旁組織比較， 瘤組織中MVD值及VEGF表達(dá)陽性率高（P<0.05）；VEGF表達(dá)陽性率及MVD值的升高大致與臨床Ⅰ～Ⅳ期的升高呈正相關(guān)；與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者比較， 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者瘤組織中MVD值及VEGF表達(dá)陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與組織類型及分化程度病理特征因素之間的瘤組織的MVD值與VEGF表達(dá)陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 NSCLC組織中CD34和VEGF常常為高表達(dá)，二者具有正相關(guān)性， 與腫瘤的TNM分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 CD34；血管內(nèi)皮生長因子；非小細(xì)胞肺癌；表達(dá)

肺癌是目前常見惡性腫瘤之一， 其病死率居惡性腫瘤首位[1]， 其分為非小細(xì)胞肺癌及小細(xì)胞肺癌， 其中非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer， NSCLC）大約占肺癌類型的80%。諸多研究已經(jīng)證實(shí)血管新生是促進(jìn)腫瘤生長的關(guān)鍵所在， 新生的血管不僅可以提供瘤體豐富的血液供應(yīng)， 而且為腫瘤的血行轉(zhuǎn)移提供了良好的條件[2]。而且新生的血管基底膜呈節(jié)段性分布， 對腫瘤細(xì)胞具有高度親和性。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor， VEGF）及CD34是調(diào)節(jié)腫瘤血管形成的關(guān)鍵因子及血管標(biāo)記物[3-5]， 但二者的關(guān)系目前還不明確。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測NSCLC腫癌組織的VEGF、CD34的表達(dá)， 探討二者的關(guān)系及其臨床意義?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 收集南陽市第一人民醫(yī)院2011年1月～ 2012年6月行手術(shù)切除的非小細(xì)胞肺癌患者32例， 其中男18例， 女14例， 年齡32～78歲， 平均年齡（58.7±6.9）歲， 所有患者術(shù)前均未接受放、化療及生物免疫治療。肺癌的組織學(xué)分類為：鱗癌11例， 腺癌15例， 細(xì)支氣管肺泡癌6例。分化程度為：高分化8例， 中分化10例， 低分化14例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例， 無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13例。TNM分期：Ⅰ期7例， Ⅱ期13例， Ⅲ～Ⅳ期12例。選擇同期25例癌旁組織（距癌組織5 cm以上）作為對照。所有標(biāo)本均用10%中性甲醛溶液固定， 石蠟包埋， 切片厚3 μm。

1. 2 主要試劑 兔抗人VEGF及山羊抗兔Ig-HRP均由美國SANTA CRUZ公司生產(chǎn)， 單克隆抗體即用型CD34與即用型DAB顯色液由北京中山公司生產(chǎn)； CDEF試劑盒為8ESO公司產(chǎn)品。

1. 3 方法

1. 3. 1 免疫組織化學(xué)法檢測VEGF

1. 3. 1. 1 按照免疫組織化學(xué)操作步驟依次進(jìn)行脫蠟、抗原修復(fù)（高壓修復(fù)）、加一抗（濕盒37℃放置1 h或4℃放置24 h）， 加二抗（濕盒37℃放置1 h）、DAB顯色、顯微鏡觀察計(jì)數(shù)、拍片分析。

1. 3. 1. 2 結(jié)果判定 胞漿染成棕黃或棕褐色為陽性細(xì)胞， 陰性細(xì)胞不染色。陽性細(xì)胞表達(dá)結(jié)果判斷參照 Senger方法[6]， 著色細(xì)胞數(shù)<10%為（-）， 11% ～30%為（+），31% ～70%為（++）， >70%為（+++）。

1. 3. 2 CD34免疫組化染色

1. 3. 2. 1 參照文獻(xiàn)介紹的方法， 采用6 M抗原修復(fù)CDEF免疫組織化學(xué)染色方法， 進(jìn)行CD34標(biāo)記。對照染色：每次用已知CD34陽性標(biāo)本切片作為陽性對照， 用PBS代替一抗或生物素標(biāo)記的橋抗 （二抗） 作為陰性對照。

1. 3. 2. 2 結(jié)果判定、微血管計(jì)數(shù) 微血管計(jì)數(shù)方法（MVD計(jì)數(shù)法）參照Weidner校正方法。在低倍鏡下（×100）尋找組織內(nèi)微血管最多的區(qū)域染色， 即所謂的“熱點(diǎn)”， 之后換用高倍鏡（×400）， 在高倍鏡下計(jì)數(shù)小靜脈和毛細(xì)血管的數(shù)目， 排除腫瘤附近的的正常肺實(shí)質(zhì)內(nèi)的微血管以及有平滑肌壁及管腔直徑>8個紅細(xì)胞直徑的血管。所有標(biāo)本由經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)生閱讀3次取平均值。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與瘤旁組織比較， 瘤組織中微血管數(shù)目明顯增多， VEGF表達(dá)陽性率明顯提高（t值、χ2值分別為6.791， 16.116， P<0.05）；與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者比較， 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者瘤組織中MVD值及VEGF表達(dá)陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t值、χ2值分別為3.457， 5.203， P<0.01）；VEGF表達(dá)陽性率及MVD值的升高大致與臨床Ⅰ～Ⅳ期的升高呈正相關(guān)；與組織類型及分化程度病理特征因素之間的瘤組織的MVD值與VEGF表達(dá)陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

3 討論

腫瘤患者的早期診斷和治療是提高5年生存率的關(guān)鍵措施，如何實(shí)現(xiàn)對肺癌早期診斷并準(zhǔn)確估計(jì)其轉(zhuǎn)移能力一直是臨床研究的熱點(diǎn)問題。

研究證實(shí)惡性腫瘤的生長、局部浸潤及轉(zhuǎn)移等與新生血管關(guān)系密切。新生血管是指在某些因素的刺激作用下，由內(nèi)皮細(xì)胞分化而成的一些新生血管，其對于實(shí)體腫瘤的生長、發(fā)展非常重要，是影響腫瘤生物學(xué)行為和轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的重要因素[2， 3]。新生的腫瘤血管不僅是癌細(xì)胞增殖的內(nèi)部條件，也是癌細(xì)胞浸潤和血行轉(zhuǎn)移首要途徑。腫瘤在生長過程中需要新生血管不斷生成才能滿足其擴(kuò)增和營養(yǎng)代謝的需要，當(dāng)腫瘤形成自身的血管系統(tǒng)后，才可以迅速生長，同時(shí)瘤細(xì)胞進(jìn)入血管或淋巴管發(fā)生轉(zhuǎn)移。

VEGF是一種多肽類細(xì)胞因子，與腫瘤血管生成密切相關(guān)。研究顯示VEGF在腫瘤組織內(nèi)， 如肝癌、乳腺癌、肺癌等腫瘤組織內(nèi)分泌增多， 并且與新生血管的生成有關(guān)。主要作用機(jī)制為：①促進(jìn)血管形成的功能：促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖， 并且誘導(dǎo)新生血管生成；②增加血管通透性：VEGF可以迅速增加血管通透性， 作用短暫而強(qiáng)大， 使血漿蛋白包括纖維蛋白外滲， 形成纖維素網(wǎng)絡(luò)， 為毛細(xì)血管延伸生長提供良好基質(zhì)。③增加組織因子的產(chǎn)生：VEGF通過改變內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)來誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)血漿纖溶酶原激活劑及血漿纖溶酶原激活物抑制劑， 有利于血管形成。在眾多誘導(dǎo)血管生成的因子中，VEGF被認(rèn)為是最重要的血管生成因子。VEGF對于淋巴管的新生也有著非常重要的作用， 尤其與淋巴侵犯和不良的預(yù)后結(jié)局有關(guān)。本研究結(jié)果顯示， 瘤組織中VEGF表達(dá)陽性率明顯高于瘤旁組織， 而且瘤組織中VEGF表達(dá)陽性率與TNM分期及有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)， 表明VEGF表達(dá)與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[2， 3， 6]。腫瘤組織的微血管密度（MVD）不僅可定量地反映腫瘤血管生長情況， 還能預(yù)示腫瘤生長、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)趨勢[4， 5]。CD34是血管內(nèi)皮標(biāo)記物之一， 應(yīng)用廣泛， 被認(rèn)為是重復(fù)性好、穩(wěn)定性高、較成熟的血管內(nèi)皮標(biāo)記物， 作為常規(guī)指標(biāo)應(yīng)用于多種惡性腫瘤的免疫組化檢測。程繼榮等[5]研究證實(shí)CD34可作為最敏感肺癌微血管標(biāo)記物之一。本研究還顯示瘤組織中VEGF表達(dá)陽性率與微血管數(shù)目MVD值呈正相關(guān)， 而且與VEGF一樣， 微血管數(shù)目MVD值與TNM分期及有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差有關(guān)， 上述結(jié)果表明VEGF表達(dá)與CD34存在相關(guān)性， VEGF表達(dá)越高， 誘導(dǎo)腫瘤血管生成越多， 血管內(nèi)皮細(xì)胞中CD34表達(dá)也越多， 從而也間接證實(shí)VEGF在腫瘤血管形成中的重要作用。這為臨床腫瘤的抗血管生成治療提供依據(jù)[2]?？寡苌芍委熎浠驹硎峭ㄟ^切斷腫瘤賴以生長和轉(zhuǎn)移的營養(yǎng)來源及遷移通道，間接發(fā)揮治療作用。目前抗血管生成治療已經(jīng)從實(shí)驗(yàn)室走向臨床，為控制腫瘤的發(fā)展、預(yù)防腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)開辟了廣闊的前景。

綜上所述， NSCLC組織中存在CD34和VEGF過度表達(dá)， 二者均與腫瘤TNM分期及有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1] Pollock RE， Doroshow JH， Khayat D. UICC臨床腫瘤學(xué)手冊.孫燕，湯釗猷，譯. 第8版.北京：人民衛(wèi)生出版社， 2008：302.

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[4] 汪國文，王祖義，劉學(xué)剛， 等. CD31與CD34顯示非小細(xì)胞肺癌微血管密度的對比分析.蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2009， 34（3）：185-187.

[5] 程繼榮， 徐虓， 王淑琴. 肺癌組織CD31、CD34及CD105標(biāo)記的微血管密度的臨床意義.中國癌癥雜志， 2010， 20（8）：638-640.

[6] Luo H， Chen Z， Jin H， et al. Cyclooxygenase-2 up-regulates vascular endothelial growth factor via a protein kinase C pathway in non-small cell lung cancer. J Exp Clin Cancer Res， 2011， doi：10.1186/1756-9966-30-6.

[收稿日期：2014-09-12]

VEGF是一種多肽類細(xì)胞因子，與腫瘤血管生成密切相關(guān)。研究顯示VEGF在腫瘤組織內(nèi)， 如肝癌、乳腺癌、肺癌等腫瘤組織內(nèi)分泌增多， 并且與新生血管的生成有關(guān)。主要作用機(jī)制為：①促進(jìn)血管形成的功能：促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖， 并且誘導(dǎo)新生血管生成；②增加血管通透性：VEGF可以迅速增加血管通透性， 作用短暫而強(qiáng)大， 使血漿蛋白包括纖維蛋白外滲， 形成纖維素網(wǎng)絡(luò)， 為毛細(xì)血管延伸生長提供良好基質(zhì)。③增加組織因子的產(chǎn)生：VEGF通過改變內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)來誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)血漿纖溶酶原激活劑及血漿纖溶酶原激活物抑制劑， 有利于血管形成。在眾多誘導(dǎo)血管生成的因子中，VEGF被認(rèn)為是最重要的血管生成因子。VEGF對于淋巴管的新生也有著非常重要的作用， 尤其與淋巴侵犯和不良的預(yù)后結(jié)局有關(guān)。本研究結(jié)果顯示， 瘤組織中VEGF表達(dá)陽性率明顯高于瘤旁組織， 而且瘤組織中VEGF表達(dá)陽性率與TNM分期及有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)， 表明VEGF表達(dá)與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[2， 3， 6]。腫瘤組織的微血管密度（MVD）不僅可定量地反映腫瘤血管生長情況， 還能預(yù)示腫瘤生長、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)趨勢[4， 5]。CD34是血管內(nèi)皮標(biāo)記物之一， 應(yīng)用廣泛， 被認(rèn)為是重復(fù)性好、穩(wěn)定性高、較成熟的血管內(nèi)皮標(biāo)記物， 作為常規(guī)指標(biāo)應(yīng)用于多種惡性腫瘤的免疫組化檢測。程繼榮等[5]研究證實(shí)CD34可作為最敏感肺癌微血管標(biāo)記物之一。本研究還顯示瘤組織中VEGF表達(dá)陽性率與微血管數(shù)目MVD值呈正相關(guān)， 而且與VEGF一樣， 微血管數(shù)目MVD值與TNM分期及有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差有關(guān)， 上述結(jié)果表明VEGF表達(dá)與CD34存在相關(guān)性， VEGF表達(dá)越高， 誘導(dǎo)腫瘤血管生成越多， 血管內(nèi)皮細(xì)胞中CD34表達(dá)也越多， 從而也間接證實(shí)VEGF在腫瘤血管形成中的重要作用。這為臨床腫瘤的抗血管生成治療提供依據(jù)[2]。抗血管生成治療其基本原理是通過切斷腫瘤賴以生長和轉(zhuǎn)移的營養(yǎng)來源及遷移通道，間接發(fā)揮治療作用。目前抗血管生成治療已經(jīng)從實(shí)驗(yàn)室走向臨床，為控制腫瘤的發(fā)展、預(yù)防腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)開辟了廣闊的前景。

綜上所述， NSCLC組織中存在CD34和VEGF過度表達(dá)， 二者均與腫瘤TNM分期及有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1] Pollock RE， Doroshow JH， Khayat D. UICC臨床腫瘤學(xué)手冊.孫燕，湯釗猷，譯. 第8版.北京：人民衛(wèi)生出版社， 2008：302.

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[6] Luo H， Chen Z， Jin H， et al. Cyclooxygenase-2 up-regulates vascular endothelial growth factor via a protein kinase C pathway in non-small cell lung cancer. J Exp Clin Cancer Res， 2011， doi：10.1186/1756-9966-30-6.

[收稿日期：2014-09-12]

VEGF是一種多肽類細(xì)胞因子，與腫瘤血管生成密切相關(guān)。研究顯示VEGF在腫瘤組織內(nèi)， 如肝癌、乳腺癌、肺癌等腫瘤組織內(nèi)分泌增多， 并且與新生血管的生成有關(guān)。主要作用機(jī)制為：①促進(jìn)血管形成的功能：促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖， 并且誘導(dǎo)新生血管生成；②增加血管通透性：VEGF可以迅速增加血管通透性， 作用短暫而強(qiáng)大， 使血漿蛋白包括纖維蛋白外滲， 形成纖維素網(wǎng)絡(luò)， 為毛細(xì)血管延伸生長提供良好基質(zhì)。③增加組織因子的產(chǎn)生：VEGF通過改變內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)來誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)血漿纖溶酶原激活劑及血漿纖溶酶原激活物抑制劑， 有利于血管形成。在眾多誘導(dǎo)血管生成的因子中，VEGF被認(rèn)為是最重要的血管生成因子。VEGF對于淋巴管的新生也有著非常重要的作用， 尤其與淋巴侵犯和不良的預(yù)后結(jié)局有關(guān)。本研究結(jié)果顯示， 瘤組織中VEGF表達(dá)陽性率明顯高于瘤旁組織， 而且瘤組織中VEGF表達(dá)陽性率與TNM分期及有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)， 表明VEGF表達(dá)與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[2， 3， 6]。腫瘤組織的微血管密度（MVD）不僅可定量地反映腫瘤血管生長情況， 還能預(yù)示腫瘤生長、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)趨勢[4， 5]。CD34是血管內(nèi)皮標(biāo)記物之一， 應(yīng)用廣泛， 被認(rèn)為是重復(fù)性好、穩(wěn)定性高、較成熟的血管內(nèi)皮標(biāo)記物， 作為常規(guī)指標(biāo)應(yīng)用于多種惡性腫瘤的免疫組化檢測。程繼榮等[5]研究證實(shí)CD34可作為最敏感肺癌微血管標(biāo)記物之一。本研究還顯示瘤組織中VEGF表達(dá)陽性率與微血管數(shù)目MVD值呈正相關(guān)， 而且與VEGF一樣， 微血管數(shù)目MVD值與TNM分期及有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差有關(guān)， 上述結(jié)果表明VEGF表達(dá)與CD34存在相關(guān)性， VEGF表達(dá)越高， 誘導(dǎo)腫瘤血管生成越多， 血管內(nèi)皮細(xì)胞中CD34表達(dá)也越多， 從而也間接證實(shí)VEGF在腫瘤血管形成中的重要作用。這為臨床腫瘤的抗血管生成治療提供依據(jù)[2]?？寡苌芍委熎浠驹硎峭ㄟ^切斷腫瘤賴以生長和轉(zhuǎn)移的營養(yǎng)來源及遷移通道，間接發(fā)揮治療作用。目前抗血管生成治療已經(jīng)從實(shí)驗(yàn)室走向臨床，為控制腫瘤的發(fā)展、預(yù)防腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)開辟了廣闊的前景。

綜上所述， NSCLC組織中存在CD34和VEGF過度表達(dá)， 二者均與腫瘤TNM分期及有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

參考文獻(xiàn)

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[5] 程繼榮， 徐虓， 王淑琴. 肺癌組織CD31、CD34及CD105標(biāo)記的微血管密度的臨床意義.中國癌癥雜志， 2010， 20（8）：638-640.

[6] Luo H， Chen Z， Jin H， et al. Cyclooxygenase-2 up-regulates vascular endothelial growth factor via a protein kinase C pathway in non-small cell lung cancer. J Exp Clin Cancer Res， 2011， doi：10.1186/1756-9966-30-6.

[收稿日期：2014-09-12]