百令膠囊對大鼠急性腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院 （十堰 442000） 宋艷麗 郭俐宏 朱克剛

急性腎損傷（Acute kidney injury，AKI）是一組臨床綜合征，是指突發(fā)（1～7d內(nèi)）和持續(xù)（＞24h）的腎功能突然下降，血清肌酐（Cr）至少上升0．5mg／dl，表現(xiàn)為氮質(zhì)血癥、水電解質(zhì)和酸堿平衡以及全身各系統(tǒng)癥狀，可伴有少尿（＜400ml／24h或17ml／h）或無尿（＜100ml／24h）病死率達(dá)30%～60%［1］。急性腎損傷的發(fā)生過程中腎臟缺血-再灌注在發(fā)病機(jī)制中占重要地位，百令膠囊常用于其輔助性治療并有一定的療效。本組通過大鼠急性腎缺血再灌注損傷的動物模型研究百令膠囊治療機(jī)制，為臨床用藥提供理論依據(jù)。

材料與方法

1 實(shí)驗(yàn)動物 選擇健康SD大鼠30只，體重200～250g，雌雄兼用，SPF級，湖北省實(shí)驗(yàn)動物研究中心提供，合格證：SCXK（鄂）2010～2013。

2 藥品試劑及儀器 MDA測試盒由南京生物醫(yī)學(xué)工程研究所提供；日立7150型全自動生化分析儀由日本日立精密儀器株式會社提供 ；水合氯醛由青島沙子口化工廠提供（批號：970108）；百令膠囊由杭州中美華東制藥有限公司提供（國藥準(zhǔn)字Z10910036）。

3 大鼠急性腎缺血再灌注損傷動物模型制備將大鼠隨機(jī)分為3組：①假手術(shù)組；②模型組；③百令膠囊組；10% 水合氯醛（28mg／100g）經(jīng)腹腔注射麻醉，仰臥位固定，腹正中切口，分離腹主動脈上雙側(cè)腎動脈分支，夾閉雙側(cè)腎動、靜脈45min后再灌注45min，反復(fù)3次即可［2］。再灌后逐層縫合腹膜，腹壁肌肉和皮膚。術(shù)后模型組按（1ml／100g）0．95%生理鹽水灌胃；假手術(shù)組只灌等量0．95%生理鹽水但不夾閉造模；百令膠囊組按（0．2g／100g）灌胃，以上各組連續(xù)灌胃14d（1次／d），3組再灌注后24h及第14天心臟直接取血送檢。

4 檢測指標(biāo)和方法 第14天心臟取血按文獻(xiàn)［3］方法測定血清 MDA、SOD含量，采用日立7150型全自動生化分析儀測定血清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）。

結(jié) 果

1 大鼠一般情況變化 假手術(shù)組大鼠體毛有光澤，反應(yīng)敏捷，飲食正常，無死亡。百令膠囊組大鼠比假手術(shù)組稍差，部分鼠體毛光澤，反應(yīng)一般，飲食正常，1例死亡。模型組大鼠體毛無光澤，豎毛，反應(yīng)遲鈍，蜷縮少動，飲食量少，模型組死亡5例。

2 血清MDA含量及SOD活性 見表1。模型組血清MDA含量14d后明顯高于假手術(shù)組（P＜0．05），提示模型組腎損傷嚴(yán)重。百令膠囊組14d后血清MDA含量釋放明顯少于模型組（P＜0．05），SOD明顯高于模型組（P＜0．05）。提示百令膠囊能明顯抑制MDA的產(chǎn)生，并具有清除氧自由基抑制脂質(zhì)過氧化等作用。

3 大鼠血清肌酐和尿素氮水平 見表2。模型組血清肌酐含量14d后明顯高于假手術(shù)組（P＜0．05），提示模型組腎損傷嚴(yán)重。百令膠囊組14d后血清肌酐含量明顯少于模型組（P＜0．05）；尿素氮降低并接近正常水平，與模型組比較有顯著性差異（P＜0．05），提示百令膠囊能明顯降低血清肌酐及尿素氮。

表1 兩組病例血清MDA及SOD含量（±s，n＝10）

表1 兩組病例血清MDA及SOD含量（±s，n＝10）

注：▲與假手術(shù)組比較，P＜0．05；＃與模型組組比較，P＜0．05

MDA（nmol／ml）SOD（U／ml）組 別治療前 治療14d后 治療前 治療14d后±6．51模型組 147．22±11．31 188．57±17．12▲ 68．21±5．33 61．24±4．52百令膠囊組 147．39±12．38 152．27±14．23▲＃ 68．59±5．47 99．32±7．72▲＃假手術(shù)組 148．26±12．37 148．57±12．11 78．21±6．36 75．72

表2 大鼠血清Cr和BUN水平（±s，n＝10）

表2 大鼠血清Cr和BUN水平（±s，n＝10）

注：▲與假手術(shù)組比較，P＜0．05；＃與模型組組比較，P＜0．05

BUN（mmol／L）組 別Cr（μmol／L）治療前 治療14d后 治療前 治療14d后94．21±8．34 93．57±7．13 5．24±0．31 5．74±0．12模型組 95．22±8．57 168．33±17．48▲ 14．96±0．29 20．74±0．78▲百令膠囊組 95．31±8．35 102．24±10．24▲＃ 15．57±0．45 8．01±0．61▲＃假手術(shù)組

討 論

百令膠囊為冬蟲夏草菌經(jīng)發(fā)酵制成蟲草菌粉，具有與天然蟲草基本一致的藥理作用［4］，主要成份有腺苷、蟲草素、蛋白質(zhì)、多種氨基酸、糖及多種維生素、微量元素等。用于支氣管哮喘、慢性支氣管炎、慢性腎功能不全等治療?，F(xiàn)代研究證實(shí)：冬蟲夏草有抗炎、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、抗脂質(zhì)代謝作用，其腺苷可使SOD升高，對清除自由基，降低脂質(zhì)過氧化物，改善腎血流，改善腎功能起著非常重要的作用［5］。

急性腎損傷是由多種病因?qū)е隆⑸婕岸鄬W(xué)科的臨床常見危重病，在醫(yī)院具有較高的發(fā)病率［6］，常見于造影劑、創(chuàng)傷、大手術(shù)、藥物腎毒等。急性腎缺血再灌注損傷過程中產(chǎn)生大量的氧自由基，引起過氧化反應(yīng)，造成細(xì)胞膜基本特征的改變，MAD大量產(chǎn)生，MDA是脂質(zhì)過氧化代謝產(chǎn)物，可間接反映細(xì)胞受氧自由基損傷的程度。而SOD是清除自由基的一種特性酶，保護(hù)細(xì)胞免受損害，可間接反映機(jī)體清除氧自由基的能力。故測定MDA及SOD可以證明抗氧化功能。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示：在腎急性缺血14d后，百令膠囊組MDA含量明顯低于模型組，提示百令膠囊能抑制MDA的產(chǎn)生，而百令膠囊組SOD的明顯增高，說明其具有清除自由基抑制脂質(zhì)過氧化的作用，這與文獻(xiàn)［7］報(bào)道百令膠囊抗氧化作用（即清除對機(jī)體有毒害作用的自由基）相一致。百令膠囊治療14d后血清Cr含量明顯減少，尿素氮降低并接近正常水平，提示百令膠囊能明顯清除血清肌酐及尿素氮。說明百令膠囊對急性腎缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能為清除自由基抑制脂質(zhì)過氧化，抑制橫紋肌溶解，增加腎血流量及腎小球?yàn)V過率，改善微循環(huán)，降低腎小管對肌酐及尿素氮的重吸收進(jìn)而改善腎功能。

總之，本實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)百令膠囊對大鼠急性腎缺血再灌注損傷有一定的保護(hù)作用，下一步我們將采用免疫組化觀察百令膠囊對腎小管再生情況的影響。

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