普洱茶抗氧化制劑毒理學(xué)研究與安全性評價(jià)

吳婧，孫世利，徐平，王岳飛*

（1.浙江大學(xué)茶學(xué)系，浙江杭州 310058；2.廣東省飲用植物研究所，廣東省茶樹資源創(chuàng)新利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州 510640）

普洱茶原產(chǎn)于我國云南西雙版納，采用云南大葉種制成的曬青毛茶為原料，經(jīng)渥堆后發(fā)酵和陳化工藝加工而成，是我國最具特色的茶產(chǎn)品之一。獨(dú)特的加工工藝促成了普洱茶特有的風(fēng)味和出色的生物活性。研究表明，普洱茶具有抗氧化、降血脂、預(yù)防糖尿病腎病等功能[1-4]，對人體健康具有很好的促進(jìn)作用。

茶葉深加工尤其是終端健康產(chǎn)品的開發(fā)對于更好的發(fā)揮茶葉的健康功能至關(guān)重要，同時(shí)也是進(jìn)一步提升茶產(chǎn)業(yè)效益，加快產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)型升級的一個(gè)突破口。目前，盡管普洱茶速溶茶、浸膏等新型終端產(chǎn)品已經(jīng)研制成功，并且逐步被消費(fèi)者接納，然而到目前為止，市場還鮮見具有特殊功能的普洱茶類保健食品。因此，本文以普洱茶水提取物為主要原料，配以維生素C 和維生素E，通過混料、制粒和壓片等工藝研制了具有抗氧化功能的普洱茶抗氧化制劑。當(dāng)前，食品安全問題尤為關(guān)注，保健食品的安全性是其功能開發(fā)的前提和基礎(chǔ)。為此，按照《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》，通過小鼠精子畸形試驗(yàn)、小鼠骨髓微核試驗(yàn)、Ames 試驗(yàn)和30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)等毒理學(xué)試驗(yàn)，對普洱茶抗氧化制劑安全性進(jìn)行評價(jià)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 樣品及處理

普洱茶抗氧化片供試樣品為產(chǎn)品粉末，褐色，內(nèi)含物的主要功能成分是普洱茶提取物。人體推薦攝入量為 1.6 g/(人·d)， 相當(dāng)于 0.027 g/(kg·d)(人體質(zhì)量以60 kg 計(jì))。Ames 試驗(yàn)樣品為廠家提供的無菌包裝樣品。實(shí)驗(yàn)時(shí)普洱茶抗氧化制劑以蒸餾水為溶媒配制成不同濃度溶液。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和檢測條件

急性毒性試驗(yàn)及遺傳性試驗(yàn)采用清潔級ICR小鼠和SD 大鼠，由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號為SCXK(浙)2008-0033。實(shí)驗(yàn)飼料由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)GB 14924.1-2001。檢測環(huán)境條件，溫度范圍20℃～24℃，相對濕度范圍50%～70%。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)前在動(dòng)物房環(huán)境中適應(yīng)3 d，染毒前，禁食過夜，不限制喝水。

1.2 急性毒性試驗(yàn)

選健康、成年（3個(gè)月）的SD 大鼠20 只（體質(zhì)量180 g～220 g），雌雄各半。采用最大耐受劑量法，設(shè)20.0 g/kg 體重一個(gè)劑量組。采用經(jīng)口灌胃給受試物方式。稱取樣品50.0 g 加蒸餾水至100 mL 配成0.5 g/mL（可灌胃最大質(zhì)量濃度），按20 mL/kg 體重二次灌胃給予，間隔4 h。染毒后，觀察大鼠的一般狀況、中毒癥狀和死亡情況，觀察期限兩周。

選健康、成年（3個(gè)月）的ICR 小鼠20 只（體質(zhì)量18 g～22 g），雌雄各半。采用最大耐受劑量法，設(shè)20.0 g/kg 體重一個(gè)劑量組，采用經(jīng)口灌胃給受試物方式。稱取樣品50.0 g 加蒸餾水至100 mL 配成0.5 g/mL（可灌胃最大質(zhì)量濃度），按20 mL/kg 體重二次灌胃給予，間隔4 h。染毒后，觀察大鼠的一般狀況、中毒癥狀和死亡情況，觀察期限兩周。

1.3 遺傳毒性試驗(yàn)

1.3.1 Ames 試驗(yàn)

試驗(yàn)菌株選用的組氨酸營養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門氏菌 TA97、TA98、TA100、TA102標(biāo)準(zhǔn)菌株和多氯聯(lián)苯（PCB）誘導(dǎo)的大鼠肝勻漿（簡稱S9）由上海市疾病預(yù)防控制中心毒理科提供。經(jīng)生物學(xué)檢定合格后，采用平板滲入法進(jìn)行試驗(yàn)。用4 株菌株的非代謝活化系統(tǒng)進(jìn)行預(yù)試，結(jié)果在劑量為5000 μg/皿劑量時(shí)出現(xiàn)毒性作用，而1000 μg/皿劑量時(shí)未出現(xiàn)增菌或抑菌現(xiàn)象。稱取無菌樣品0.2 g 加滅菌蒸餾水至20 mL，即配制成1000 μg/皿。以此為最高劑量，分別做5倍稀釋，用滅菌蒸餾水配制成相當(dāng)于 200 μg/皿、40 μg/皿、8 μg/皿各劑量。同時(shí)設(shè)空白對照組、溶劑（蒸餾水）對照組和陽性對照組，每種菌株每個(gè)測試濃度設(shè)3個(gè)平行。用S9 作為體外代謝活化系統(tǒng)，在加S9和不加S9條件下進(jìn)行試驗(yàn)，直接計(jì)數(shù)培養(yǎng)基上各菌株的回變菌落數(shù)。同條件下重復(fù)測試一次。

1.3.2 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)

用ICR 小鼠，體質(zhì)量25 g～30 g 的小鼠50只，雌雄各半。按每kg 體質(zhì)量計(jì)算給受量樣品，設(shè)2.5 g/kg、5.0 g/kg 和10.0 g/kg 體重三個(gè)劑量組，用蒸餾水配制。另設(shè)陰性對照（蒸餾水）和陽性對照組（環(huán)磷酰胺60 mg/kg 體重），每組10 只小鼠，雌雄各半。5.0 g、10.0 g 和20.0 g 加蒸餾水至40 mL配成 0.125 g/mL、0.25 g/mL、0.50 g/mL， 按 20 mL/kg 體重灌胃，間隔24 h 給一次樣品。對照組處理相同。末次給樣品后6 h 處死動(dòng)物，取其胸骨骨髓制片鏡檢，甲醇固定，Giemsa 染色，鏡檢時(shí)每只動(dòng)物計(jì)數(shù)1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞（PCE)，計(jì)算微核千分率。

1.3.3 小鼠精子畸形試驗(yàn)

選ICR 中健康、成年、體質(zhì)量25 g～30 g 的雄性小鼠35 只。按每kg 體重計(jì)算給受量樣品，設(shè)樣品 2.5 g/kg、5.0 g/kg 和 10.0 g/kg 體重三個(gè)劑量組，用蒸餾水配制。另設(shè)陰性對照（蒸餾水）和陽性對照（絲裂霉素C 2.0 mg/kg 體重）。每組7 只雄性小鼠。三個(gè)劑量組分別稱取樣品5.0 g、10.0 g 和20.0 g 加蒸餾水至40 mL 配成0.125 g/mL、0.25 g/mL、0.50 g/mL，按20 mL/kg 體重灌胃，連續(xù)5 d。對照組處理相同。在首次給樣品的第35 d，頸椎脫臼處死小鼠，隨機(jī)選5 只小鼠取二側(cè)附睪，放入盛有適量的生理鹽水的平皿中，用眼科剪將附睪剪碎，四層擦鏡紙吸濾，制成吸濾液直接涂片，自然干燥，甲醇固定，用1%伊紅染色。高倍鏡下檢查精子形態(tài)，每只小鼠檢查完整精子1000條，記錄畸變精子類型和數(shù)目，計(jì)算精子畸形率（%）。

1.4 30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)

選健康、成熟、體質(zhì)量60 g～80 g 的SD 大鼠。設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)陰性對照組，低、中、高三個(gè)劑量組分別為 0.67 g/kg、1.33 g/kg、2.67 g/kg 體重，分別相當(dāng)于人推薦量的25倍、50倍和100倍（人推薦量為 1.6 g/（人·d）(人體質(zhì)量以 60 kg 計(jì))。實(shí)驗(yàn)各劑量組按體重10%折算分別將樣品粉末均勻拌入基礎(chǔ)飼料，以飼料喂養(yǎng)方式給予。低、中、高三劑量組拌入方法：分別取134 g、266 g、534 g樣品粉末加基礎(chǔ)飼料至20 kg，充分拌勻，三劑量組樣品粉末分別占飼料的0.67%、1.33%、2.67%。實(shí)驗(yàn)將SD 大鼠80 只，隨機(jī)分成4組，每組20只，雌雄各半，大鼠單籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食、飲水。大鼠連續(xù)觀察30 d，每周記錄體重和進(jìn)食量，并計(jì)算食物利用率，實(shí)驗(yàn)期末尾靜脈取血進(jìn)行血液學(xué)檢查，斷頭取血進(jìn)行血生化檢查。對每只大鼠進(jìn)行臟器大體觀察，取肝、腎、脾、睪丸 （卵巢）稱重并計(jì)算臟體比，同時(shí)對肝、腎、脾、睪丸、卵巢進(jìn)行病理組織學(xué)檢查 （石蠟切片、H-E 染色，光鏡檢查）。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理

對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)作單因素方差分析 （SAS 統(tǒng)計(jì)軟件），進(jìn)行各多組間的比較。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)

試驗(yàn)期間，各組大鼠、小鼠飲食和活動(dòng)正常，生長發(fā)育良好，均未見出現(xiàn)中毒癥狀和死亡情況（表1）。該樣品大鼠雌、雄性急性經(jīng)口最大耐受劑量均大于20.0 g/kg 體重。根據(jù)LD50 劑量分級標(biāo)準(zhǔn)，該樣品屬于無毒級。

表1 普洱茶抗氧化制劑對大鼠、小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果(±S)Table 1 Results of acute toxicity test of the preparation in rats and mice

表1 普洱茶抗氧化制劑對大鼠、小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果(±S)Table 1 Results of acute toxicity test of the preparation in rats and mice

Sex 劑量（g/kg）Dosage 動(dòng)物數(shù)（只）Animal number 始重（g）Beginning weight 終重（g）Last weight 死亡動(dòng)物數(shù)（只）Death number 死亡率（%）Death ratio大鼠 雌性 20.0 10 191.56±6.5274.4 ±9.7 0 0雄性 20.010 198.9±8.2332.3±14.80 0小鼠 雌性 20.0 10 18.7±0.629.6 ±1.4 0 0雄性 20.010 19.2±0.634.3±1.80 0性別

2.2 遺傳毒性試驗(yàn)

2.2.1 Ames 試驗(yàn)

試驗(yàn)結(jié)果可見，不同劑量樣品不論加S9還是不加S9，回變菌落數(shù)均未超過空白對照組、溶劑對照組（H2O)回變菌落數(shù)的兩倍，且各劑量組間無明顯的劑量-反應(yīng)關(guān)系（表2）。該樣品Ames 試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

表2 普洱茶抗氧化制劑Ames 試驗(yàn)結(jié)果(±S，n=3)Table 2 Ames test results of the antioxidant preparations of Puerh tea

表2 普洱茶抗氧化制劑Ames 試驗(yàn)結(jié)果(±S，n=3)Table 2 Ames test results of the antioxidant preparations of Puerh tea

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2.2.2 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)

各劑量組和對照組小鼠微核率見表3，各劑量組微核率和陰性對照組比較，差異無顯著性（P＞0.05），而陽性對照組環(huán)磷酰胺組與陰性對照組差異極顯著，表現(xiàn)了強(qiáng)烈的致突變性。結(jié)果表明，在2.5～10.0 g/kg 范圍內(nèi)，普洱茶抗氧化制劑對兩性小鼠骨髓細(xì)胞微核產(chǎn)生沒有明顯的影響。

表3 普洱茶抗氧化制劑對小鼠骨髓細(xì)胞微核率的影響(±S）Table 3 Effects of the preparation on marrow micronuclcus test in mice

表3 普洱茶抗氧化制劑對小鼠骨髓細(xì)胞微核率的影響(±S）Table 3 Effects of the preparation on marrow micronuclcus test in mice

注：與陰性對照組比較，**P＜0.01。 Note:Comparison with negative control,**P＜0.01.

Groups 劑量（g/kg）Dosage 鼠數(shù)（只）Mice number 受檢PCE 數(shù)（只）Sperm amount 含微核PCE 數(shù)(只)Micronucleus PEC number組別微核細(xì)胞率（‰）Micronuleus rate P PCE/RBC陰性對照(H2O)0.05 50006 1.2±0.8 / 1.30±0.28雌性2.55 50009 1.8±0.40.1531.23±0.115.05 50008 1.6±1.10.2561.40±0.2910.05 50008 1.6±1.10.2561.30±0.17陽性對照（環(huán)磷酰胺）0.065 500092 18.4±3.58** ＜0.0010.99±0.27實(shí)驗(yàn)組雄性2.55 50007 1.4±0.90.5501.30±0.295.05 50008 1.6±0.50.4011.32±0.2710.05 50007 1.4±1.30.5501.38±0.36陽性對照（環(huán)磷酰胺）0.065 5000101 20.2±6.02** ＜0.0011.14±0.10陰性對照(H2O)0.05 50007 1.4±1.1 / 1.35±0.33實(shí)驗(yàn)組

2.2.3 小鼠精子畸形試驗(yàn)

各劑量組和對照小鼠精子畸形率見表4，各劑量組精子畸形率和陰性對照組比較，經(jīng)秩和檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)，差異無顯著性（P＞0.05）。而陽性對照組絲裂霉素C組與受試物以及陰性對照組差異極顯著，表現(xiàn)了強(qiáng)烈的精子致畸性。結(jié)果表明，在2.5～10.0 g/kg 范圍內(nèi)，普洱茶抗氧化制劑的小鼠精子畸形試驗(yàn)為陰性。

表4 普洱茶抗氧化制劑對小鼠精子畸形率的影響(±S)Table 4 Effects of the preparation on sperm shape abnormality test in mice

表4 普洱茶抗氧化制劑對小鼠精子畸形率的影響(±S)Table 4 Effects of the preparation on sperm shape abnormality test in mice

注：與陰性對照組比較，**P＜0.01。 Note:Comparison with negative control,**P＜0.01.

組別(g/kg)Groups劑量(g/kg)Dosage鼠數(shù)（只）Mice number受檢精子數(shù)（個(gè)）Sperm amount畸形精子數(shù)（個(gè)）Abnormality number 小計(jì)No hook 胖頭Fat 香蕉Banana shape無鉤 雙頭/雙尾Twin head/twin tail折疊Fold 無定型Amorphous（個(gè)）Number畸形率（%）Abnormality rate陰性對照（H2O）0.05 500050 29 00 55116 2.32±0.23實(shí)驗(yàn)組2.55 500053 16 00 63123 2.46±0.175.05 500042 73 20 68122 2.44±0.4310.05 500062 27 30 68142 2.84±0.56陽性對照（絲裂霉素C）0.0025 5000134 106 28 112272 5.44±1.14**

2.3 大鼠30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)

不同劑量組普洱茶抗氧化制劑喂食大鼠30 d后，均未見異常癥狀和體征，也無死亡病例。各劑量組體重（表5），周進(jìn)食量（表6），食物總利用率和周食物利用率（表7），血紅蛋白、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（表8）、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞（表9）和陰性對照組比較差異均無顯著性（P＞0.05)。 對大鼠血生化指標(biāo)(表10 和表11）檢查結(jié)果表明，除雄性大鼠血清甘油三酯原始數(shù)據(jù)不符合方差齊的要求（P＜0.05），數(shù)據(jù)經(jīng)轉(zhuǎn)換仍不符合要求改用秩和檢驗(yàn)，各劑量組和陰性對照組比較差異無顯著性外（P＞0.05），其余原始數(shù)據(jù)符合方差齊的要求（P＞0.05)，各劑量組大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐、總膽固醇、甘油三酯、血清血糖、總蛋白、白蛋白、球蛋白、白/球比和陰性對照組比較差異均無顯著性 （P＞0.05)。

2.4 病理組織學(xué)檢查

普洱茶抗氧化制劑喂食大鼠30 d后，各劑量組的臟器中肝、脾、腎、睪丸（卵巢）及臟體比，包括肝/體、脾/體、腎/體、睪丸（卵巢）/體比（表12）和陰性對照組比較，差異均無顯著性（P＞0.05)。對大鼠的肝、腎、脾、胃腸、睪丸（卵巢）進(jìn)行解剖，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肝：肝臟被膜完整，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝板排列不紊亂，胞核形狀規(guī)則，匯管區(qū)小膽管、血管、淋巴管可見，枯否氏細(xì)胞無殊；腎：被膜完整，皮質(zhì)區(qū)與髓質(zhì)區(qū)分層清晰，無纖維組織增生，腎小球未見充盈、萎縮、壞死等改變，腎盂黏膜完整，無化生等異常改變；脾：脾組織未見異常，紅髓與白髓可見，白髓內(nèi)可見動(dòng)脈鞘，紅髓內(nèi)可見散在的淋巴細(xì)胞與紅細(xì)胞，紅、白髓比例基本正常；胃和腸（小腸、十二指腸）：粘膜上皮細(xì)胞形態(tài)未見異常，固有層，粘膜下層，肌層和漿層未見炎細(xì)胞浸潤，胃腺，腸腺均無萎縮，增生性改變；睪丸：睪丸曲細(xì)精管不萎縮，各級生精細(xì)胞排列不紊亂，間質(zhì)未見異常改變；卵巢：可見各級生長卵泡、間質(zhì)未見異常。檢查結(jié)果表明，普洱茶抗氧化制劑對大鼠沒有明顯毒性。

表5 普洱茶抗氧化制劑對大鼠體重的影響(±S）Table 5 Effect of the preparation on body weight

表5 普洱茶抗氧化制劑對大鼠體重的影響(±S）Table 5 Effect of the preparation on body weight

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表6 普洱茶抗氧化制劑對大鼠周進(jìn)食量的影響(±S）Table 6 Effect of the preparation on week intake

表6 普洱茶抗氧化制劑對大鼠周進(jìn)食量的影響(±S）Table 6 Effect of the preparation on week intake

性別Sex組別Groups 劑量（g/kg）Dosage 鼠數(shù)（只）AmountFirst week 第2周Second week 第3周Third week 第4 周Fourth week周進(jìn)食量（g）Food intake amount per week第1周陰性對照組 0.0010 118.2±5.5121.2±7.8156.0±10.4229.5±11.1雌 實(shí)驗(yàn)組0.6710 121.2±6.6129.1±10.8160.8±11.0219.3±10.81.3310 123.6±5.4128.9±10.9165.6±10.5225.7±15.32.6710 124.7±4.6128.0±8.8164.0±11.2225.9±11.9陰性對照組 0.0010 132.7±6.4153.4±8.0222.7±12.4258.1±13.2雄 實(shí)驗(yàn)組0.6710 133.7±7.9150.9±9.9220.0±17.4254.0±16.31.3310 131.0±6.7151.2±8.3219.5±12.9254.6±13.82.6710 132.6±6.6154.2±11.6224.5±13.3258.8±11.3

表7 普洱茶抗氧化制劑對大鼠總食物利用率及周食物利用率的影響(±S）Table 7 Effects of the preparation on overall and week food utilization

表7 普洱茶抗氧化制劑對大鼠總食物利用率及周食物利用率的影響(±S）Table 7 Effects of the preparation on overall and week food utilization

性別S e x組別G r o u p s 劑量（g/k g）D o s a g e鼠數(shù)（只）A m o u n t體重增加（g）I n c r e a s e w e i g h t總進(jìn)食量（g）F o o d i n t a k e a m o u n t總食物利用率（%）F o o d u t i l i z a t i o n r a t i o F i r s t w e e k 第2周S e c o n d w e e k 第3周T h i r d w e e k 第4周F o u r t h w e e k周食物利用率（%）F o o d u t i l i z a t i o n r a t i o p e r w e e k第1周陰性對照組 0.00 10 14 4.4±13.36 24.9±28.12 3.1±1.94 8.7±6.93 0.0±8.71 7.8±3.39.6±2.2雌實(shí)驗(yàn)組0.67 10 14 8.0±15.76 30.3±29.32 3.4±1.94 8.3±10.62 9.5±12.61 9.4±5.98.6±1.91.33 10 15 5.3±13.46 43.8±39.32 4.2±2.04 8.2±8.03 1.4±7.11 8.9±4.01 0.6±3.02.67 10 15 4.4±13.86 42.6±34.72 4.0±1.84 8.5±9.83 0.1±12.51 9.4±3.01 0.4±2.5陰性對照組 0.00 10 25 4.9±17.97 66.9±39.93 3.3±1.94 0.1±4.54 0.9±8.43 0.5±3.42 7.6±2.5雄實(shí)驗(yàn)組0.67 10 24 8.9±20.77 58.7±47.73 2.8±2.34 1.6±10.73 8.4±7.63 0.3±6.62 6.8±2.61.33 10 24 7.3±20.97 56.3±41.73 2.7±1.73 9.2±6.13 9.9±8.72 9.8±6.22 7.5±3.72.67 10 25 4.5±15.27 70.0±40.93 3.1±1.44 1.6±8.14 1.8±8.63 0.3±4.22 5.7±3.3

表8 普洱茶抗氧化制劑對大鼠HB、RBC、WBC 的影響(±S）Table 8 Effects of the preparation on HB,RBC and WBC in rats

表8 普洱茶抗氧化制劑對大鼠HB、RBC、WBC 的影響(±S）Table 8 Effects of the preparation on HB,RBC and WBC in rats

性別Sex組別Groups 劑量（g/kg）Dosage 鼠數(shù)（只）Amount 血紅蛋白（g/L)Hemoglobin 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（×1012/L）Red blood cell count 白細(xì)胞計(jì)數(shù)（×109/L）White blood cell count陰性對照組 0.0010 158.4±13.28.0±0.718.4±3.9雌 實(shí)驗(yàn)組0.6710 164.1±8.08.2±0.315.6±3.71.3310 158.6±10.27.9±0.515.2±3.32.6710 154.41±5.07.7±0.814.7±3.3陰性對照組 0.0010 149.3±11.27.6±0.520.5±3.9 Male雄實(shí)驗(yàn)組0.6710 155.4±11.67.6±0.717.9±4.21.3310 147.7±11.77.3±0.615.9±4.12.6710 157.4±13.07.6±0.719.8±3.8

表9 普洱茶抗氧化制劑對大鼠WBC 的影響(±S）Table 9 Effects of the preparation on WBC in rats

表9 普洱茶抗氧化制劑對大鼠WBC 的影響(±S）Table 9 Effects of the preparation on WBC in rats

性別Sex組別Groups 劑量（g/kg）Dosage 鼠數(shù)（只）Amount 淋巴細(xì)胞（%）Lymphocyte 單核細(xì)胞（%）Mononuclear cells 粒細(xì)胞（%）Granulocyte陰性對照組 0.0010 68.7±6.81.3±0.230.0±6.8雌 實(shí)驗(yàn)組0.6710 72.6±6.01.2±0.226.2±5.91.3310 72.5±5.61.2±0.326.3±5.82.6710 70.5±4.71.1±0.428.4±4.9陰性對照組 0.0010 69.2±6.21.4±0.229.4±6.2雄實(shí)驗(yàn)組0.6710 69.21±0.81.3±0.329.5±10.81.3310 70.3±9.81.3±0.328.4±9.62.6710 68.1±5.91.2±0.230.6±5.9

表10 普洱茶抗氧化制劑對大鼠血生化的影響(±S）Table 10 Effects of the preparation on blood components biochemical components in serum of rats

表10 普洱茶抗氧化制劑對大鼠血生化的影響(±S）Table 10 Effects of the preparation on blood components biochemical components in serum of rats

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表11 普洱茶抗氧化制劑對大鼠血生化的影響(±S）Table 11 Effects of the preparation on blood components biochemical components in serum of rats

表11 普洱茶抗氧化制劑對大鼠血生化的影響(±S）Table 11 Effects of the preparation on blood components biochemical components in serum of rats

性別Sex組別Groups 劑量（g/kg）Dosage 鼠數(shù)（只）Amount 血糖（mmol/L）Blood glucose 總蛋白（g/L）Total protein 白蛋白（g/L）Albumin 球蛋白（g/L）Globulin 白/球Albumin/globulin陰性對照組 0.0010 7.0±0.866.6±1.934.4±1.232.2±1.11.07±0.05雌 實(shí)驗(yàn)組0.6710 7.4±0.867.9±2.135.3±0.832.6±1.51.08±0.041.3310 7.7±0.569.0±2.435.3±0.633.6±2.01.06±0.062.6710 7.8±0.869.0±2.435.2±1.533.81.41.04±0.05陰性對照組 0.0010 7.1±0.866.5±1.733.7±0.732.7±1.31.03±0.04雄 實(shí)驗(yàn)組0.6710 6.9±0.765.5±2.033.3±0.932.2±1.41.04±0.041.3310 7.1±0.965.9±2.233.6±0.832.3±1.71.04±0.062.6710 7.4±0.765.7±2.933.0±1.232.7±2.01.01±0.05

表12 普洱茶抗氧化制劑對大鼠臟器重和臟體比的影響(±S）Table 12 Effect of the preparation on organic weight and organic weight/body weight of rats

表12 普洱茶抗氧化制劑對大鼠臟器重和臟體比的影響(±S）Table 12 Effect of the preparation on organic weight and organic weight/body weight of rats

性別Sex組別Groups 劑量(g/kg)Dosage鼠數(shù)(只）Amount肝重(g）Liver weight肝/體(%)Liver/boby脾重(g)Sleen weight脾 /體(%)Sleep/boby腎重(g)Kidney weight腎/體Kidney/boby睪丸(卵巢)重(g)Testis(ovary)weight睪丸(卵巢)/體(%)Testis(ovary)/boby陰性對照組 0.0010 7.05±0.663.34±0.510.53±0.070.25±0.051.88±0.200.89±0.110.14±0.020.06±0.01雌 實(shí)驗(yàn)組0.6710 7.39±0.553.42±0.120.55±0.090.26±0.041.88±0.230.88±0.070.14±0.030.06±0.011.3310 7.62±0.743.41±0.260.54±0.080.24±0.031.93±0.170.86±0.060.14±0.030.06±0.012.6710 7.71±0.383.47±0.320.61±0.160.27±0.051.99±0.190.89±0.060.13±0.020.06±0.01陰性對照組 0.0010 10.71±1.533.29±0.400.82±0.100.25±0.032.80±0.300.86±0.113.09±0.210.95±0.08雄 實(shí)驗(yàn)組0.6710 10.40±0.813.25±0.220.86±0.130.27±0.032.68±0.180.84±0.053.09±0.200.97±0.071.3310 10.35±0.903.23±0.310.86±0.170.27±0.062.73±0.290.85±0.073.02±0.200.95±0.062.6710 10.53±1.023.23±0.230.74±0.060.23±0.022.87±0.250.88±0.083.12±0.230.96±0.07

3 討論

普洱茶抗氧化制劑是以普洱茶為主要原料研發(fā)的具有抗氧化功能的保健食品，其主要原料為普洱茶提取物（水提?。⒕S生素C 和維生素E。普洱茶不同于其他茶類，在經(jīng)過渥堆等工藝加工后，其多酚類物質(zhì)發(fā)生了質(zhì)的變化，兒茶素類通過聚/縮合反應(yīng)，形了二聚體、三聚體和多聚體多酚類物質(zhì)，比如茶黃素、茶紅素、茶褐素等，并且部分與多糖和蛋白通過絡(luò)合作用形成共軛產(chǎn)物，不僅提高了抗氧化性，同時(shí)也增加了穩(wěn)定性。同時(shí)已有較多研究證明，茶多酚與維生素C/E 之間存在協(xié)同作用，能協(xié)同抑制脂質(zhì)過氧化，減弱過多自由基對DNA 的損傷[5-7]。普洱茶是人們?nèi)粘ｏ嬈?，原料來源安全，水提是一種最為安全的提取方法，同于濃縮了日常飲茶的劑量，促使其抗氧化功效更好地發(fā)揮。然而，普洱茶抗氧化制劑作為功能食品其安全性必須經(jīng)過嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)來論證。

通過第一、二階段急性毒性試驗(yàn)、遺傳毒性試驗(yàn)和30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)對普洱茶抗氧化制劑進(jìn)行了毒理學(xué)評價(jià)。大、小鼠急性毒性試驗(yàn)可以確定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對受試物的毒性反應(yīng)、中毒劑量（致死劑量），只有當(dāng)動(dòng)物未出現(xiàn)死亡的劑量大于或等于10.0 g/kg（涵蓋人體推薦劑量的100倍）時(shí)才可進(jìn)行下階段毒理學(xué)試驗(yàn)[5]，本次試驗(yàn)普洱茶抗氧化制劑對雌雄大小鼠經(jīng)口LD50均大于20.0 g/kg，表明普洱茶抗氧化制劑安全性很高，可以進(jìn)入下一階段的毒理學(xué)試驗(yàn)[8,9]。第二階段進(jìn)行了遺傳毒性試驗(yàn)和30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)，遺傳毒性試驗(yàn)選用了反映基因突變的Ames 試驗(yàn)、反映染色體損害的小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)，反映生殖細(xì)胞突變的小鼠精子畸形試驗(yàn)，以期從多方面探討普洱茶抗氧化制劑的致突變性[10]。試驗(yàn)結(jié)果表明，Ames 試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)的結(jié)果均為陰性，表明普洱茶抗氧化制劑在此試驗(yàn)條件下對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物未見明顯遺傳毒性。30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)室通過喂飼不同劑量的受試物30 d，觀察其對動(dòng)物引起有害效應(yīng)劑量、毒作用性質(zhì)和靶器官，估計(jì)亞慢性攝入的危害性，并可初步估計(jì)其最大無毒作用劑量[11]。在30 d 喂養(yǎng)中普洱茶抗氧化制劑對雌雄大鼠體重、總食物利用率、臟體比、血常規(guī)以及血液生化指標(biāo)均無明顯影響，肝、腎、脾、胃、十二指腸、睪丸和卵巢均未見病理組織學(xué)改變。從毒理學(xué)的角度看，作為保健食品，普洱茶抗氧化制劑對動(dòng)物和人是安全的。

綜上所述，普洱茶抗氧化制劑在本實(shí)驗(yàn)研究劑量范圍內(nèi)，無毒、無遺傳毒性、長期食用對人體不產(chǎn)生有害作用，可作為保健食品進(jìn)行下一步的保健功效研究。

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