溫度對黑豆萌發(fā)時酸性磷酸酯酶活力的影響研究

高曉麗　高艷菊

摘 要：在不同溫度下培養(yǎng)黑豆，提取不同萌發(fā)時期的酸性磷酸酯酶，利用福林-酚法測定其活力，研究溫度對黑豆萌發(fā)時酸性磷酸酯酶活力的影響。結(jié)果表明，在15～35℃的溫度范圍內(nèi)，黑豆在萌發(fā)時期，酸性磷酸酯酶的活力總體呈現(xiàn)出先上升、達到最大后又略微降低的現(xiàn)象。溫度較高時，黑豆萌發(fā)較快，酸性磷酸酯酶達到最大酶活力所需時間較短；溫度較低時，黑豆萌發(fā)過程中的最大酸性磷酸酯酶活力要低于較高溫度下萌發(fā)的最大酶活力。

關(guān)鍵詞：黑豆；酸性磷酸酯酶；酶活力

中圖分類號 S529 文獻標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）23-23-03

Abstract：To study the effect of temperature on acid phosphatase activity during the period of black soybean germination，black soybeans were cultivated under different temperatures，and acid phosphatase from different periods of germination was extracted，then the acid phosphatase enzyme activity was determined using Folin-phenol method.Research shows that，in the temperature range of 15～35℃，acid phosphatase activity during germination first increases，and then slightly decreases after reaching its maximum.Black soybeans germinate rapidly under higher temperature，and acid phosphatase activity reaches maximum in shorter time.Besides，the maximum activity of acid phosphatase from black soybeans cultivated under lower temperature is less than that of higher temperature.

Key words：Black soybean；Acid phosphatase；Enzyme activity

黑豆是豆類的一種，因其種皮為黑色而得名。黑豆與大豆的主要營養(yǎng)成分相同，但其蛋白質(zhì)及鐵質(zhì)等含量較高；除富含優(yōu)質(zhì)蛋白外，黑豆還含有多種抗氧化成分，尤其是含有異黃酮素、花青素及豐富的維生素[1]，具有補腎強身、養(yǎng)顏抗衰等作用。黑色食品近年來逐漸成為健康飲食的一個重要內(nèi)容，黑豆的生理活性也得到了較為深入的研究[2-4]。

酸性磷酸酯酶廣泛存在于生物界，從低等生物大腸桿菌，酵母到高等動植物組織，體液以及人類肝臟、前列腺等都發(fā)現(xiàn)有酸性磷酸酯酶的存在[5]，它能專一性地水解磷酸單酯鍵[6]。磷酸酶通過催化磷蛋白的水解，在細胞調(diào)節(jié)過程中起著重要的作用[5]。在植物體內(nèi)，酸性磷酸酯酶與物質(zhì)代謝關(guān)系密切，其活性的改變會影響能量代謝，從而影響植物的生長[4]。近年來，關(guān)于大豆酸性磷酸酯酶的研究較多，但測定不同溫度下及不同時期黑豆芽酸性磷酸酯酶活力的報道卻不多見[7]。本實驗通過設(shè)立溫度梯度測定各梯度狀態(tài)下的酸性磷酸酯酶活力，觀察其活性變化，以研究黑豆種子萌發(fā)時活性物質(zhì)的變化。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 黑豆市售，磷酸苯二鈉，F(xiàn)olin-酚試劑，酚，碳酸鈉。

1.2 儀器與設(shè)備 VIS-723N型紫外可見分光光度計（上海美譜達儀器有限公司生產(chǎn)），SSY-H型不銹鋼電熱恒溫水浴鍋（上海華巖儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)），電子天平（JY2002）（北京海納興業(yè)科技有限公司生產(chǎn)），高速離心機（鄭州南北儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)），電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海柏欣儀器設(shè)備廠生產(chǎn)）。

1.3 實驗方法

1.3.1 黑豆的預(yù)處理與培養(yǎng) 黑豆萌發(fā)使用生化培養(yǎng)箱，在設(shè)定溫度分別為15℃、25℃和35℃下恒溫培養(yǎng)。具體操作為：準(zhǔn)備經(jīng)高壓滅菌、墊有2層脫脂棉的瓷盤，在其上噴水，以輕按見流水為度。稱取100g黑豆洗凈，浸泡3h后，置于瓷盤上，放入恒溫培養(yǎng)箱，設(shè)置好溫度進行培養(yǎng)。每天早晚各噴灑2次蒸餾水，以保持豆芽濕潤，每批種子于8：00放置，發(fā)芽后，隔一段時間觀察豆芽長度，并進行采樣分析，按時期選取不同芽長的種子備用。每組處理以50g種子為1個試驗樣。

1.3.2 酸性磷酸酯酶的提取 不同溫度下培養(yǎng)的黑豆豆芽樣品分別取出，掐去根和葉得到芽莖，在碾缽中用碾錘徹底搗碎，釋放出酸性磷酸酯酶。室溫靜置0.5h，在培養(yǎng)皿中用雙層紗布擠濾，得到濾液，將濾液離心除去細胞碎片和植物纖維等雜質(zhì)，得到酸性磷酸酯酶的酶溶液。測定時取原酶液用0.2mol·L-1的pH5.6乙酸鹽緩沖液稀釋10～20倍用[8-10]。

3 結(jié)論與討論

通過測定不同溫度梯度條件下黑豆芽不同萌發(fā)時期酸性磷酸酯酶活力的變化情況，可以得到如下結(jié)論：在15～35℃的溫度范圍內(nèi)，黑豆在萌發(fā)時期，酸性磷酸酯酶的活力總體呈現(xiàn)出先上升、達到最大后又略微降低的現(xiàn)象。溫度較高時，黑豆萌發(fā)較快，酸性磷酸酯酶達到最大酶活力所需時間較短；溫度較低時，黑豆萌發(fā)時的最大酸性磷酸酯酶活力要低于較高溫度下萌發(fā)的最大酶活力。這與酸性磷酸酯酶是水解酶，種子酸性磷酸酯酶活性的大小是種子活力大小的指標(biāo)[5-6]這一理論相吻合。當(dāng)溫度在最適溫度范圍內(nèi)增長時，促進了黑豆種子內(nèi)酸性磷酸酯酶的活性，增強了對磷酸酯的水解力，有利于能量代謝，故萌發(fā)生長快[5-6]。當(dāng)超過該最適溫度范圍時，酶活性降低，磷酸酯類物質(zhì)水解變慢，能量供應(yīng)受影響。

參考文獻

[1]沈瑩，彭菁，陳麗燕.黑豆渣中抗氧化物質(zhì)的提取和抗氧化性能的研究[J].現(xiàn)代食品科技，2008（11）：1118-1120.

[2]張瑞芬，池建偉，丘銀清，等.黑大豆的營養(yǎng)及保健功能研究進展[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006（11）：13-16.

[3]王麗芳.補血抗衰話黑豆[J].山西老年，2003（2）：49.

[4]常汝鎮(zhèn).中國黑豆資源及其營養(yǎng)和藥用價值[J].中國食物與營養(yǎng)，1998（5）：38-39.

[5]楊立紅，孫振興.刺參酸性磷酸酯酶的分離純化及部分性質(zhì)研究[J].食品科學(xué)，2008，29（10）：440-443

[6]蔡武城.生物化學(xué)實驗技術(shù)教程[M].上海：復(fù)旦大學(xué)出版社，1983：183-209.

[7]李志剛，宋書宏，李瑞平.磷脅迫下大豆葉片及根系酸性磷酸酯酶酶譜的研究[J].大豆通報，2008（2）：21-23.

[8]陳鈞輝，李俊，張?zhí)?生物化學(xué)實驗[M].北京：科學(xué)出版社，2008，12：210-212.

[9]胡瓊英，狄洌.生物化學(xué)實驗[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2007，7：48-51.

[10]山東農(nóng)學(xué)院，西北農(nóng)學(xué)院.植物生理學(xué)實驗指導(dǎo)[M].濟南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，1980：101-108.

（責(zé)編：張宏民）endprint

摘 要：在不同溫度下培養(yǎng)黑豆，提取不同萌發(fā)時期的酸性磷酸酯酶，利用福林-酚法測定其活力，研究溫度對黑豆萌發(fā)時酸性磷酸酯酶活力的影響。結(jié)果表明，在15～35℃的溫度范圍內(nèi)，黑豆在萌發(fā)時期，酸性磷酸酯酶的活力總體呈現(xiàn)出先上升、達到最大后又略微降低的現(xiàn)象。溫度較高時，黑豆萌發(fā)較快，酸性磷酸酯酶達到最大酶活力所需時間較短；溫度較低時，黑豆萌發(fā)過程中的最大酸性磷酸酯酶活力要低于較高溫度下萌發(fā)的最大酶活力。

關(guān)鍵詞：黑豆；酸性磷酸酯酶；酶活力

中圖分類號 S529 文獻標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）23-23-03

Abstract：To study the effect of temperature on acid phosphatase activity during the period of black soybean germination，black soybeans were cultivated under different temperatures，and acid phosphatase from different periods of germination was extracted，then the acid phosphatase enzyme activity was determined using Folin-phenol method.Research shows that，in the temperature range of 15～35℃，acid phosphatase activity during germination first increases，and then slightly decreases after reaching its maximum.Black soybeans germinate rapidly under higher temperature，and acid phosphatase activity reaches maximum in shorter time.Besides，the maximum activity of acid phosphatase from black soybeans cultivated under lower temperature is less than that of higher temperature.

Key words：Black soybean；Acid phosphatase；Enzyme activity

黑豆是豆類的一種，因其種皮為黑色而得名。黑豆與大豆的主要營養(yǎng)成分相同，但其蛋白質(zhì)及鐵質(zhì)等含量較高；除富含優(yōu)質(zhì)蛋白外，黑豆還含有多種抗氧化成分，尤其是含有異黃酮素、花青素及豐富的維生素[1]，具有補腎強身、養(yǎng)顏抗衰等作用。黑色食品近年來逐漸成為健康飲食的一個重要內(nèi)容，黑豆的生理活性也得到了較為深入的研究[2-4]。

酸性磷酸酯酶廣泛存在于生物界，從低等生物大腸桿菌，酵母到高等動植物組織，體液以及人類肝臟、前列腺等都發(fā)現(xiàn)有酸性磷酸酯酶的存在[5]，它能專一性地水解磷酸單酯鍵[6]。磷酸酶通過催化磷蛋白的水解，在細胞調(diào)節(jié)過程中起著重要的作用[5]。在植物體內(nèi)，酸性磷酸酯酶與物質(zhì)代謝關(guān)系密切，其活性的改變會影響能量代謝，從而影響植物的生長[4]。近年來，關(guān)于大豆酸性磷酸酯酶的研究較多，但測定不同溫度下及不同時期黑豆芽酸性磷酸酯酶活力的報道卻不多見[7]。本實驗通過設(shè)立溫度梯度測定各梯度狀態(tài)下的酸性磷酸酯酶活力，觀察其活性變化，以研究黑豆種子萌發(fā)時活性物質(zhì)的變化。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 黑豆市售，磷酸苯二鈉，F(xiàn)olin-酚試劑，酚，碳酸鈉。

1.2 儀器與設(shè)備 VIS-723N型紫外可見分光光度計（上海美譜達儀器有限公司生產(chǎn)），SSY-H型不銹鋼電熱恒溫水浴鍋（上海華巖儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)），電子天平（JY2002）（北京海納興業(yè)科技有限公司生產(chǎn)），高速離心機（鄭州南北儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)），電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海柏欣儀器設(shè)備廠生產(chǎn)）。

1.3 實驗方法

1.3.1 黑豆的預(yù)處理與培養(yǎng) 黑豆萌發(fā)使用生化培養(yǎng)箱，在設(shè)定溫度分別為15℃、25℃和35℃下恒溫培養(yǎng)。具體操作為：準(zhǔn)備經(jīng)高壓滅菌、墊有2層脫脂棉的瓷盤，在其上噴水，以輕按見流水為度。稱取100g黑豆洗凈，浸泡3h后，置于瓷盤上，放入恒溫培養(yǎng)箱，設(shè)置好溫度進行培養(yǎng)。每天早晚各噴灑2次蒸餾水，以保持豆芽濕潤，每批種子于8：00放置，發(fā)芽后，隔一段時間觀察豆芽長度，并進行采樣分析，按時期選取不同芽長的種子備用。每組處理以50g種子為1個試驗樣。

1.3.2 酸性磷酸酯酶的提取 不同溫度下培養(yǎng)的黑豆豆芽樣品分別取出，掐去根和葉得到芽莖，在碾缽中用碾錘徹底搗碎，釋放出酸性磷酸酯酶。室溫靜置0.5h，在培養(yǎng)皿中用雙層紗布擠濾，得到濾液，將濾液離心除去細胞碎片和植物纖維等雜質(zhì)，得到酸性磷酸酯酶的酶溶液。測定時取原酶液用0.2mol·L-1的pH5.6乙酸鹽緩沖液稀釋10～20倍用[8-10]。

3 結(jié)論與討論

通過測定不同溫度梯度條件下黑豆芽不同萌發(fā)時期酸性磷酸酯酶活力的變化情況，可以得到如下結(jié)論：在15～35℃的溫度范圍內(nèi)，黑豆在萌發(fā)時期，酸性磷酸酯酶的活力總體呈現(xiàn)出先上升、達到最大后又略微降低的現(xiàn)象。溫度較高時，黑豆萌發(fā)較快，酸性磷酸酯酶達到最大酶活力所需時間較短；溫度較低時，黑豆萌發(fā)時的最大酸性磷酸酯酶活力要低于較高溫度下萌發(fā)的最大酶活力。這與酸性磷酸酯酶是水解酶，種子酸性磷酸酯酶活性的大小是種子活力大小的指標(biāo)[5-6]這一理論相吻合。當(dāng)溫度在最適溫度范圍內(nèi)增長時，促進了黑豆種子內(nèi)酸性磷酸酯酶的活性，增強了對磷酸酯的水解力，有利于能量代謝，故萌發(fā)生長快[5-6]。當(dāng)超過該最適溫度范圍時，酶活性降低，磷酸酯類物質(zhì)水解變慢，能量供應(yīng)受影響。

參考文獻

[1]沈瑩，彭菁，陳麗燕.黑豆渣中抗氧化物質(zhì)的提取和抗氧化性能的研究[J].現(xiàn)代食品科技，2008（11）：1118-1120.

[2]張瑞芬，池建偉，丘銀清，等.黑大豆的營養(yǎng)及保健功能研究進展[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006（11）：13-16.

[3]王麗芳.補血抗衰話黑豆[J].山西老年，2003（2）：49.

[4]常汝鎮(zhèn).中國黑豆資源及其營養(yǎng)和藥用價值[J].中國食物與營養(yǎng)，1998（5）：38-39.

[5]楊立紅，孫振興.刺參酸性磷酸酯酶的分離純化及部分性質(zhì)研究[J].食品科學(xué)，2008，29（10）：440-443

[6]蔡武城.生物化學(xué)實驗技術(shù)教程[M].上海：復(fù)旦大學(xué)出版社，1983：183-209.

[7]李志剛，宋書宏，李瑞平.磷脅迫下大豆葉片及根系酸性磷酸酯酶酶譜的研究[J].大豆通報，2008（2）：21-23.

[8]陳鈞輝，李俊，張?zhí)?生物化學(xué)實驗[M].北京：科學(xué)出版社，2008，12：210-212.

[9]胡瓊英，狄洌.生物化學(xué)實驗[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2007，7：48-51.

[10]山東農(nóng)學(xué)院，西北農(nóng)學(xué)院.植物生理學(xué)實驗指導(dǎo)[M].濟南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，1980：101-108.

（責(zé)編：張宏民）endprint

摘 要：在不同溫度下培養(yǎng)黑豆，提取不同萌發(fā)時期的酸性磷酸酯酶，利用福林-酚法測定其活力，研究溫度對黑豆萌發(fā)時酸性磷酸酯酶活力的影響。結(jié)果表明，在15～35℃的溫度范圍內(nèi)，黑豆在萌發(fā)時期，酸性磷酸酯酶的活力總體呈現(xiàn)出先上升、達到最大后又略微降低的現(xiàn)象。溫度較高時，黑豆萌發(fā)較快，酸性磷酸酯酶達到最大酶活力所需時間較短；溫度較低時，黑豆萌發(fā)過程中的最大酸性磷酸酯酶活力要低于較高溫度下萌發(fā)的最大酶活力。

關(guān)鍵詞：黑豆；酸性磷酸酯酶；酶活力

中圖分類號 S529 文獻標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）23-23-03

Abstract：To study the effect of temperature on acid phosphatase activity during the period of black soybean germination，black soybeans were cultivated under different temperatures，and acid phosphatase from different periods of germination was extracted，then the acid phosphatase enzyme activity was determined using Folin-phenol method.Research shows that，in the temperature range of 15～35℃，acid phosphatase activity during germination first increases，and then slightly decreases after reaching its maximum.Black soybeans germinate rapidly under higher temperature，and acid phosphatase activity reaches maximum in shorter time.Besides，the maximum activity of acid phosphatase from black soybeans cultivated under lower temperature is less than that of higher temperature.

Key words：Black soybean；Acid phosphatase；Enzyme activity

黑豆是豆類的一種，因其種皮為黑色而得名。黑豆與大豆的主要營養(yǎng)成分相同，但其蛋白質(zhì)及鐵質(zhì)等含量較高；除富含優(yōu)質(zhì)蛋白外，黑豆還含有多種抗氧化成分，尤其是含有異黃酮素、花青素及豐富的維生素[1]，具有補腎強身、養(yǎng)顏抗衰等作用。黑色食品近年來逐漸成為健康飲食的一個重要內(nèi)容，黑豆的生理活性也得到了較為深入的研究[2-4]。

酸性磷酸酯酶廣泛存在于生物界，從低等生物大腸桿菌，酵母到高等動植物組織，體液以及人類肝臟、前列腺等都發(fā)現(xiàn)有酸性磷酸酯酶的存在[5]，它能專一性地水解磷酸單酯鍵[6]。磷酸酶通過催化磷蛋白的水解，在細胞調(diào)節(jié)過程中起著重要的作用[5]。在植物體內(nèi)，酸性磷酸酯酶與物質(zhì)代謝關(guān)系密切，其活性的改變會影響能量代謝，從而影響植物的生長[4]。近年來，關(guān)于大豆酸性磷酸酯酶的研究較多，但測定不同溫度下及不同時期黑豆芽酸性磷酸酯酶活力的報道卻不多見[7]。本實驗通過設(shè)立溫度梯度測定各梯度狀態(tài)下的酸性磷酸酯酶活力，觀察其活性變化，以研究黑豆種子萌發(fā)時活性物質(zhì)的變化。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 黑豆市售，磷酸苯二鈉，F(xiàn)olin-酚試劑，酚，碳酸鈉。

1.2 儀器與設(shè)備 VIS-723N型紫外可見分光光度計（上海美譜達儀器有限公司生產(chǎn)），SSY-H型不銹鋼電熱恒溫水浴鍋（上海華巖儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)），電子天平（JY2002）（北京海納興業(yè)科技有限公司生產(chǎn)），高速離心機（鄭州南北儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)），電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海柏欣儀器設(shè)備廠生產(chǎn)）。

1.3 實驗方法

1.3.1 黑豆的預(yù)處理與培養(yǎng) 黑豆萌發(fā)使用生化培養(yǎng)箱，在設(shè)定溫度分別為15℃、25℃和35℃下恒溫培養(yǎng)。具體操作為：準(zhǔn)備經(jīng)高壓滅菌、墊有2層脫脂棉的瓷盤，在其上噴水，以輕按見流水為度。稱取100g黑豆洗凈，浸泡3h后，置于瓷盤上，放入恒溫培養(yǎng)箱，設(shè)置好溫度進行培養(yǎng)。每天早晚各噴灑2次蒸餾水，以保持豆芽濕潤，每批種子于8：00放置，發(fā)芽后，隔一段時間觀察豆芽長度，并進行采樣分析，按時期選取不同芽長的種子備用。每組處理以50g種子為1個試驗樣。

1.3.2 酸性磷酸酯酶的提取 不同溫度下培養(yǎng)的黑豆豆芽樣品分別取出，掐去根和葉得到芽莖，在碾缽中用碾錘徹底搗碎，釋放出酸性磷酸酯酶。室溫靜置0.5h，在培養(yǎng)皿中用雙層紗布擠濾，得到濾液，將濾液離心除去細胞碎片和植物纖維等雜質(zhì)，得到酸性磷酸酯酶的酶溶液。測定時取原酶液用0.2mol·L-1的pH5.6乙酸鹽緩沖液稀釋10～20倍用[8-10]。

3 結(jié)論與討論

通過測定不同溫度梯度條件下黑豆芽不同萌發(fā)時期酸性磷酸酯酶活力的變化情況，可以得到如下結(jié)論：在15～35℃的溫度范圍內(nèi)，黑豆在萌發(fā)時期，酸性磷酸酯酶的活力總體呈現(xiàn)出先上升、達到最大后又略微降低的現(xiàn)象。溫度較高時，黑豆萌發(fā)較快，酸性磷酸酯酶達到最大酶活力所需時間較短；溫度較低時，黑豆萌發(fā)時的最大酸性磷酸酯酶活力要低于較高溫度下萌發(fā)的最大酶活力。這與酸性磷酸酯酶是水解酶，種子酸性磷酸酯酶活性的大小是種子活力大小的指標(biāo)[5-6]這一理論相吻合。當(dāng)溫度在最適溫度范圍內(nèi)增長時，促進了黑豆種子內(nèi)酸性磷酸酯酶的活性，增強了對磷酸酯的水解力，有利于能量代謝，故萌發(fā)生長快[5-6]。當(dāng)超過該最適溫度范圍時，酶活性降低，磷酸酯類物質(zhì)水解變慢，能量供應(yīng)受影響。

參考文獻

[1]沈瑩，彭菁，陳麗燕.黑豆渣中抗氧化物質(zhì)的提取和抗氧化性能的研究[J].現(xiàn)代食品科技，2008（11）：1118-1120.

[2]張瑞芬，池建偉，丘銀清，等.黑大豆的營養(yǎng)及保健功能研究進展[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006（11）：13-16.

[3]王麗芳.補血抗衰話黑豆[J].山西老年，2003（2）：49.

[4]常汝鎮(zhèn).中國黑豆資源及其營養(yǎng)和藥用價值[J].中國食物與營養(yǎng)，1998（5）：38-39.

[5]楊立紅，孫振興.刺參酸性磷酸酯酶的分離純化及部分性質(zhì)研究[J].食品科學(xué)，2008，29（10）：440-443

[6]蔡武城.生物化學(xué)實驗技術(shù)教程[M].上海：復(fù)旦大學(xué)出版社，1983：183-209.

[7]李志剛，宋書宏，李瑞平.磷脅迫下大豆葉片及根系酸性磷酸酯酶酶譜的研究[J].大豆通報，2008（2）：21-23.

[8]陳鈞輝，李俊，張?zhí)?生物化學(xué)實驗[M].北京：科學(xué)出版社，2008，12：210-212.

[9]胡瓊英，狄洌.生物化學(xué)實驗[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2007，7：48-51.

[10]山東農(nóng)學(xué)院，西北農(nóng)學(xué)院.植物生理學(xué)實驗指導(dǎo)[M].濟南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，1980：101-108.

（責(zé)編：張宏民）endprint