• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    應(yīng)用ISSR 技術(shù)鑒定杭白菊對(duì)葉斑病的抗性

    2014-12-23 11:30:06郭慶海李丹霞王康才薛友榮周雪松陳志祥
    關(guān)鍵詞:葉斑病紅心菊花

    郭慶海, 李丹霞, 王康才, 薛友榮, 周雪松, 陳志祥

    (1.江蘇省濱??h植保植檢所,江蘇 濱海224500;2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院,江蘇 南京210095;3.江蘇省濱海縣農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所,江蘇 濱海224500;4.江蘇省射陽縣盛大藥材有限公司,江蘇 鹽城224300)

    杭菊花是中國(guó)傳統(tǒng)的藥食兼用藥用植物,隨著人們生活水平提高,保健意識(shí)加強(qiáng),其市場(chǎng)需求逐年增加,種植面積也隨之?dāng)U大,但在老產(chǎn)區(qū)調(diào)查發(fā)現(xiàn),由于連作,菊花病害尤其是菊花葉斑病等病害成為限制農(nóng)民增產(chǎn)增收的障礙[1]。病害的判斷診治主要靠常規(guī)手段,用分子手段進(jìn)行病害的鑒定分類則較少,張欣[2]應(yīng)用RAPD 技術(shù)區(qū)別芒果抗炭疽病品種,李海生[3]利用ISSR 分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行了植物遺傳多樣性的分析應(yīng)用,高山等以ITS1 和ITS4 為 引 物擴(kuò)增病原菌的ITS 片段,對(duì)葉斑病進(jìn)行分子鑒定[4]。張正光等進(jìn)行ITS 序列分析確定了根腐病的病原菌[5]。ISSR 簡(jiǎn)單序列重復(fù)區(qū)間(Inter-simple sequence repeat,ISSR )是一種基于微衛(wèi)星(Simple sequence repeat,SSR)序列發(fā)展起來的、利用PCR 擴(kuò)增進(jìn)行檢測(cè)的、十分有效的分子標(biāo)記技術(shù),廣泛應(yīng)用于植物遺傳關(guān)系及遺傳多樣性、品種鑒定、系統(tǒng)演化等方面研究。作為一種新型的分子標(biāo)記,ISSR 標(biāo)記結(jié)合了RAPD 和SSR 的優(yōu)點(diǎn),具有模版需要量少,多態(tài)性豐富,無需試劑盒,結(jié)果記錄方便,試驗(yàn)成本低,操作簡(jiǎn)單,實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性較高等優(yōu)點(diǎn),但目前未見利用ISSR 技術(shù)鑒別菊花抗葉斑病品種的相關(guān)報(bào)道。為此,本試驗(yàn)采用ISSR 技術(shù)對(duì)20 個(gè)杭白菊材料(其中10 個(gè)材料為抗病材料)的抗病性育成品種的早期確定、抗病品種的鑒定及抗病機(jī)理等進(jìn)行研究,以期為菊花抗葉斑病品種篩選、品種鑒定提供一種有效的輔助手段。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    20 種材料采自南京農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院實(shí)驗(yàn)基地,均為江蘇省濱??h植保植檢所菊花課題組前期選育,由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材系王康才教授鑒定。品種名、田間抗性見表1。試驗(yàn)材料包括杭白菊的2個(gè)品系新白品系(新白)和紅心品系(其他19 個(gè)品種),其中新×香、紅心11×香菊和紅心11×菊花腦3個(gè)材料為雜交材料。

    1.2 方法

    采用改良的CTAB 法提取菊花基因組DNA[6],1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA 質(zhì)量和濃度,稀釋至50 ng/μl。ISSR-PCR 反應(yīng)體系總體積為20 μl,其中包括200.0 μmol/L dNTP、0.5 μmol/L primer、10×PCR buffer、50 ng DNA template、1.5 U DNA polymerase、無菌水。PCR 擴(kuò)增反應(yīng)在BIO-RAD 公司MJ Mini 48 孔梯度PCR 儀上進(jìn)行。擴(kuò)增程序?yàn)?94 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃變性45 s,45 ~55 ℃復(fù)性1 min,72 ℃延伸1 min 30 s,39 個(gè)循環(huán);72 ℃延伸7 min,4 ℃保存。擴(kuò)增后每管加入6×溴酚藍(lán)1 μl,混勻后取10 μl 擴(kuò)增產(chǎn)物在2.0%瓊脂糖凝膠上電泳,凝膠中含有1% 的4S Green。電泳緩沖液為1×TAE,電壓5 V/cm。在上海培青科技有限公司生產(chǎn)的JS-380 型凝膠成像系統(tǒng)上觀測(cè)并照相。

    表1 試驗(yàn)材料及其田間抗性Table 1 Accessions used in the study and their field resistance

    1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

    根據(jù)PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果,在凝膠的某個(gè)相同遷移位置上有DNA 條帶的記為1,無DNA 條帶的記為0,采用POPGENE32 軟件計(jì)算多態(tài)位點(diǎn)百分率(PPB)、平均有效等位基因數(shù)(Effective number of alleles,Ne)、Nei’s 基因多樣性指數(shù)(Nei’s gene diversity,He)和 Shannon 信 息 多 樣 性 指 數(shù)(Shannon’s information index,I);用DPS 分析軟件的非加權(quán)配對(duì)類平均法(UPGMA)進(jìn)行聚類分析。

    2 結(jié)果

    2.1 DNA 提取、引物篩選及多態(tài)性分析

    提取并純化材料DNA,瓊脂糖凝膠電泳確定DNA。

    利用3 個(gè)表型差異大的材料對(duì)100 條ISSR 引物進(jìn)行篩選,確定23 條帶型清晰、多態(tài)性較好的引物對(duì)20 個(gè)試驗(yàn)材料進(jìn)行多態(tài)性分析。淘汰擴(kuò)增效果差、帶型模糊、對(duì)個(gè)別材料擴(kuò)增不出條帶的引物,最終篩選出10 條引物用于20 份材料的遺傳分析。共擴(kuò)增出168 條清晰可辨譜帶,其中多態(tài)性帶135條;平均多態(tài)位點(diǎn)百分率為80.36%,多態(tài)性較高。擴(kuò)增條帶集中在200 ~2 000 bp(表2)。如表2 所示在綜合比較各引物擴(kuò)增效果后發(fā)現(xiàn)165 號(hào)引物多態(tài)性條帶百分率達(dá)100.00%,故選取165 號(hào)引物作為最理想的引物。圖1 為ISSR 引物165 的擴(kuò)增結(jié)果。

    表2 有效ISSR 引物序列及其多態(tài)性Table 2 Efficient ISSR primer sequences and their polymorphisms

    圖1 ISSR 引物165 對(duì)供試材料的PCR 擴(kuò)增圖譜Fig.1 PCR amplified pattern of Dendranthema morifolium with ISSR 165

    2.2 20 個(gè)菊花品種ISSR 遺產(chǎn)多樣性分析

    平均有效等位基因數(shù)(Ne)和Nei’s 基因多樣性指數(shù)(Nei’s gene diversity,He)是衡量遺傳變異最常用的2 個(gè)遺傳指標(biāo),具有明顯的遺傳學(xué)意義[6]。Shannon 信息指數(shù)方便與同類研究進(jìn)行比較[7]。利用軟件包POPGENE32 對(duì)各位點(diǎn)的Ne、He以及Shannon 信息指數(shù)進(jìn)行計(jì)算,結(jié)果顯示,20 個(gè)品種平均有效等位基因數(shù)為1.549 1,平均Nei’s 基因多樣性 指 數(shù) 為0.312 9,平 均 Shannon 信 息 指 數(shù)為0.458 8。本研究擴(kuò)增的ISSR 片段多態(tài)性較高,說明在進(jìn)化過程中,菊花栽培品種在DNA 分子水平上形成并保持了較高的遺傳變異,還可能與菊花品種存在自交不親和性[8-9]及無性繁殖有關(guān)。

    2.3 菊花對(duì)葉斑病抗性與其ISSR 聚類組的相關(guān)性分析

    由圖2 可以看出,以遺傳距離為0.38 處劃分,20 個(gè)菊花品種聚類為3 個(gè)ISSR 組:第1 組包括大花2 號(hào)、大花4 號(hào)、優(yōu)單4 號(hào)、優(yōu)單6 號(hào)、紅心9 號(hào)、紅心13 號(hào)、紅心19 號(hào)、紅心1 號(hào)、紅心20 號(hào)、單瓣2號(hào),這一組均是高感、中感品種;第2 組包括NJK1、NJK2、NJK3、似貢3 號(hào)、紅心11 號(hào)、新×香、紅心11×香、紅心11×腦、NJK4,具有抗葉斑病的品種都聚在這一類;第3 組只有一個(gè)品種,是新白。

    圖2 20 個(gè)菊花品種ISSR 標(biāo)記的UPGMA 聚類圖Fig.2 Dendrogram of 20 Dendranthema morifolium cultivars based on ISSR markers by UPGMA

    對(duì)20 種菊花材料運(yùn)用POPGENE 軟件進(jìn)行分析,結(jié)果(表3)顯示,在20 種菊花材料中,H最大值為0.498 7,最小值為0.05;I最大值為0.693 1,最小值為0.119 3。這些結(jié)果顯示出試驗(yàn)材料存在著豐富的遺傳變異,推測(cè)與菊花長(zhǎng)期的自然雜交、自然選擇和人工選育造成的復(fù)雜的遺傳背景有關(guān),這說明菊花具有極其豐富品種的分子基礎(chǔ)。在分成2 個(gè)類群的基礎(chǔ)上,比較抗性材料與感病材料可知:抗性材料的Ne、H及I值均高于感病材料,說明抗性材料之間比易感病材料之間基因差異顯著,抗性材料的遺傳多樣性比感病材料高。

    表3 POPGENE 軟件分析結(jié)果Table 3 The results analyzed by POPGENE software

    從ISSR 標(biāo)記聚類結(jié)果來看,聚類結(jié)果與杭菊花對(duì)葉斑病的田間抗性有明顯的相關(guān)性,基本能夠區(qū)分抗性品種和易感品種。

    3 討論

    從ISSR 標(biāo)記聚類結(jié)果來看,聚類結(jié)果與菊花對(duì)葉斑病的田間抗性有明顯的相關(guān)性。所有抗性材料除了新白全部聚為抗葉斑病品種,除此之外,3 個(gè)雜交品種也聚到這一大組中,這個(gè)結(jié)果也說明了雜交技術(shù)在培育抗病新品種中的優(yōu)勢(shì)[10],而所有易感病材料聚為高感、中感品種。新白是另一個(gè)品系的品種,在這里單獨(dú)聚為一類。

    對(duì)易感和具有抗性的2 組試驗(yàn)材料統(tǒng)計(jì)的結(jié)果顯示,抗性材料的平均有效等位基因數(shù)、平均Nei’s基因多樣性指數(shù)及Shannon 信息指數(shù)均高于感病材料,表明抗性材料的遺傳多樣性比感病材料高??赡苁且?yàn)榭剐缘倪z傳多樣性豐富,包括的抗病基因相對(duì)感病組較多,所以具有抗病性,其具體抗病基因位點(diǎn)仍需要繼續(xù)研究。本研究因時(shí)間和條件限制僅應(yīng)用ISSR 技術(shù)對(duì)菊花抗葉斑病進(jìn)行鑒定,是否可以應(yīng)用ISSR 技術(shù)鑒定菊花甚至其他植物的其他病害仍需繼續(xù)研究。

    ISSR 標(biāo)記聚類結(jié)果表明,利用ISSR 技術(shù)可以鑒定菊花是否抗葉斑病,該技術(shù)可以作為早期篩選抗葉斑病品種的輔助手段。

    [1] 陳長(zhǎng)軍,劉德輝,王康才.江蘇省藥用菊花病害普查[R].沈陽:第六屆中國(guó)植物病害化學(xué)防治學(xué)術(shù)研討會(huì),2008.

    [2] 張 欣.應(yīng)用RAPD 技術(shù)區(qū)別芒果抗炭疽病品種的研究[J].中國(guó)生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2005,13(4):20-21.

    [3] 李海生.ISSR 分子標(biāo)記技術(shù)及其在植物遺傳多樣性分析中的應(yīng)用[J].生物學(xué)通報(bào),2004,39(2):19-20.

    [4] 高 山,王孟飛,胡 平,等.基于ITS 序列對(duì)萬壽菊葉斑病病原菌的分子鑒定[J].湖 北 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué),2013,52(9):2074-2076.

    [5] 張正光,郭成寶,王源超,等.非洲菊根腐病病原的鑒定與ITS序列分析[J].植物病理學(xué)報(bào),2005,35(5):392-396.

    [6] 肖 軍,楊立國(guó),楊 濤,等.兩種提取菊花總DNA 方法的比較[J].遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué),2005(1):40-41.

    [7] 繆恒彬,陳發(fā)棣,趙宏波.85 個(gè)大菊品種遺傳關(guān)系的ISSR 分析[J].園藝學(xué)報(bào),2007,34(5):1243-1248.

    [8] 黃建安,李家賢,黃意歡,等.茶樹品種資源遺傳多樣性的AFLP 研究[J].園藝學(xué)報(bào),2006,33(2):317-322.

    [9] DREWLOW L W,ASCHER P D,WIDMER R E.Rapid method of determining pollen incompatibility inChrysanthemum morifoliumRamat.[J].Euphytica,1975,24(1):29-32.

    [10] GRONALD W,ASCHER P D.Effects of high temperature treatments on seed yield and self incompatibility inChrysanthemum[J].Euphytica,1975,24(2):317-322.

    猜你喜歡
    葉斑病紅心菊花
    番茄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SlSTP2在防御細(xì)菌性葉斑病中的功能
    菊花贊
    軍事文摘(2022年8期)2022-05-25 13:28:56
    紅心火龍果不神奇
    “二月蘭葉斑病菌甘藍(lán)鏈格孢生物學(xué)特性觀察實(shí)驗(yàn)”的教學(xué)設(shè)計(jì)
    甘肅教育(2021年10期)2021-11-02 06:14:26
    一顆“紅心”,只為一個(gè)使命
    金橋(2020年9期)2020-10-27 01:59:32
    我真的很擅長(zhǎng)睡覺
    雛菊花
    青年歌聲(2019年2期)2019-02-21 01:17:18
    賞菊花
    紅心巨巖
    大果紫檀葉斑病的病原鑒定
    日日爽夜夜爽网站| 长腿黑丝高跟| 久久久久久久精品吃奶| 夜夜夜夜夜久久久久| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 激情在线观看视频在线高清| 精品久久久久久,| 一个人免费在线观看的高清视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 最近最新中文字幕大全电影3| 99国产精品一区二区三区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 在线免费观看的www视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲男人的天堂狠狠| 中文资源天堂在线| 亚洲全国av大片| 国产精品久久久人人做人人爽| 日本免费a在线| aaaaa片日本免费| 成人欧美大片| 一区二区三区高清视频在线| 天堂动漫精品| 成在线人永久免费视频| 日韩欧美免费精品| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲精品久久国产高清桃花| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲人成电影免费在线| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| aaaaa片日本免费| 成人18禁在线播放| 99久久99久久久精品蜜桃| 国内精品一区二区在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 悠悠久久av| 国产野战对白在线观看| 亚洲国产看品久久| 国产三级中文精品| 久久天堂一区二区三区四区| 五月玫瑰六月丁香| 高清毛片免费观看视频网站| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 婷婷精品国产亚洲av| avwww免费| cao死你这个sao货| 成人亚洲精品av一区二区| 超碰成人久久| 成人三级黄色视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 中文字幕久久专区| 身体一侧抽搐| 长腿黑丝高跟| 操出白浆在线播放| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| ponron亚洲| 国产一区二区在线av高清观看| 麻豆成人午夜福利视频| 窝窝影院91人妻| 国产精品综合久久久久久久免费| 久久久水蜜桃国产精品网| 久久午夜亚洲精品久久| 中文字幕久久专区| 精品电影一区二区在线| 久久久国产精品麻豆| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 看片在线看免费视频| 一区二区三区高清视频在线| videosex国产| 亚洲欧美激情综合另类| 国产午夜精品论理片| 无遮挡黄片免费观看| 午夜亚洲福利在线播放| 色综合欧美亚洲国产小说| 日韩国内少妇激情av| 搡老岳熟女国产| 最近最新中文字幕大全免费视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 激情在线观看视频在线高清| 丰满的人妻完整版| 男人的好看免费观看在线视频 | 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 一进一出抽搐动态| 韩国av一区二区三区四区| 国产三级在线视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 色老头精品视频在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 午夜福利在线观看吧| 亚洲天堂国产精品一区在线| 欧美日韩黄片免| 久久精品影院6| 99精品久久久久人妻精品| 男男h啪啪无遮挡| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲九九香蕉| 精品午夜福利视频在线观看一区| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 这个男人来自地球电影免费观看| 99热这里只有是精品50| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| e午夜精品久久久久久久| 在线观看舔阴道视频| 少妇人妻一区二区三区视频| cao死你这个sao货| 九色国产91popny在线| 亚洲成人久久性| 露出奶头的视频| 最新在线观看一区二区三区| 国产精品国产高清国产av| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产激情欧美一区二区| 国产野战对白在线观看| 亚洲黑人精品在线| 久久热在线av| 亚洲 国产 在线| 黄色视频,在线免费观看| 精品日产1卡2卡| 婷婷精品国产亚洲av| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 91九色精品人成在线观看| www日本黄色视频网| 日本 欧美在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 两个人的视频大全免费| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲电影在线观看av| 欧美一区二区国产精品久久精品 | 亚洲成人久久性| or卡值多少钱| 精品久久久久久成人av| 亚洲熟女毛片儿| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲人成伊人成综合网2020| 日本熟妇午夜| 岛国视频午夜一区免费看| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲专区字幕在线| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 日韩av在线大香蕉| 91老司机精品| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 99国产综合亚洲精品| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲中文字幕日韩| 精品久久久久久久毛片微露脸| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美性长视频在线观看| 草草在线视频免费看| 制服诱惑二区| 国产熟女xx| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 久9热在线精品视频| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 欧美黑人精品巨大| 两性夫妻黄色片| 韩国av一区二区三区四区| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | av免费在线观看网站| 十八禁网站免费在线| 亚洲免费av在线视频| 亚洲色图av天堂| 男女床上黄色一级片免费看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 欧美成人午夜精品| videosex国产| 日本在线视频免费播放| 亚洲精品中文字幕在线视频| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 久久久国产欧美日韩av| 桃红色精品国产亚洲av| 欧美乱码精品一区二区三区| 在线永久观看黄色视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久久国产成人精品二区| 在线a可以看的网站| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲专区国产一区二区| 淫秽高清视频在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 老司机靠b影院| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 午夜久久久久精精品| 欧美+亚洲+日韩+国产| 免费搜索国产男女视频| 国产精品野战在线观看| 国产又色又爽无遮挡免费看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 亚洲精品色激情综合| av片东京热男人的天堂| 国产精品免费视频内射| 亚洲av电影在线进入| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 老司机靠b影院| 国产高清有码在线观看视频 | 国产不卡一卡二| 真人一进一出gif抽搐免费| 国产伦在线观看视频一区| 少妇被粗大的猛进出69影院| 精品无人区乱码1区二区| 欧美激情久久久久久爽电影| 一二三四社区在线视频社区8| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 69av精品久久久久久| 国产99久久九九免费精品| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 日本一二三区视频观看| 天天一区二区日本电影三级| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲国产精品久久男人天堂| 一进一出抽搐gif免费好疼| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 99久久精品热视频| 在线看三级毛片| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 91老司机精品| 欧美黑人精品巨大| av片东京热男人的天堂| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 天堂影院成人在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 精品熟女少妇八av免费久了| 一二三四在线观看免费中文在| 成在线人永久免费视频| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 日韩精品免费视频一区二区三区| 99久久精品国产亚洲精品| 欧美成人午夜精品| 成人午夜高清在线视频| 黑人操中国人逼视频| 免费在线观看完整版高清| 免费看日本二区| 午夜视频精品福利| 国产成人影院久久av| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 十八禁网站免费在线| 99热这里只有精品一区 | 国产一区二区在线观看日韩 | 黄色视频,在线免费观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产真人三级小视频在线观看| 在线观看日韩欧美| 国产亚洲av高清不卡| 18禁美女被吸乳视频| 久久 成人 亚洲| 精品国产美女av久久久久小说| 欧美3d第一页| 999久久久国产精品视频| 精品久久久久久久末码| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 久久久久久久久免费视频了| av在线播放免费不卡| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲电影在线观看av| 69av精品久久久久久| netflix在线观看网站| 五月玫瑰六月丁香| 国产人伦9x9x在线观看| 男女下面进入的视频免费午夜| x7x7x7水蜜桃| 成人av一区二区三区在线看| www.www免费av| 天天一区二区日本电影三级| or卡值多少钱| 国产精品久久电影中文字幕| 婷婷亚洲欧美| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 老汉色av国产亚洲站长工具| 高清毛片免费观看视频网站| 中文字幕久久专区| 免费看a级黄色片| 18禁美女被吸乳视频| 天堂影院成人在线观看| 一区二区三区高清视频在线| 99国产综合亚洲精品| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲,欧美精品.| 12—13女人毛片做爰片一| 香蕉丝袜av| 制服人妻中文乱码| 黄色 视频免费看| 精品国产乱码久久久久久男人| 日本三级黄在线观看| 999久久久国产精品视频| 精品久久久久久久末码| 国产激情偷乱视频一区二区| avwww免费| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 90打野战视频偷拍视频| 一本精品99久久精品77| 成人国产一区最新在线观看| 99久久无色码亚洲精品果冻| 免费在线观看日本一区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 99久久国产精品久久久| 精品福利观看| 亚洲av电影在线进入| www.精华液| 日韩免费av在线播放| а√天堂www在线а√下载| 久久人妻av系列| 国产男靠女视频免费网站| 国产亚洲av嫩草精品影院| 无限看片的www在线观看| 亚洲精品色激情综合| 很黄的视频免费| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 国产主播在线观看一区二区| 欧美乱妇无乱码| 国产成人精品久久二区二区免费| avwww免费| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲专区字幕在线| 亚洲av美国av| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲无线在线观看| 日本三级黄在线观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 大型av网站在线播放| 日韩大尺度精品在线看网址| 精品乱码久久久久久99久播| 男女那种视频在线观看| 美女黄网站色视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 黄片小视频在线播放| 亚洲第一电影网av| 国产精品久久久人人做人人爽| 色av中文字幕| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 人妻久久中文字幕网| 搡老岳熟女国产| 国产单亲对白刺激| 一级a爱片免费观看的视频| 最新在线观看一区二区三区| 在线视频色国产色| 少妇的丰满在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 欧美丝袜亚洲另类 | 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲精品色激情综合| 男女那种视频在线观看| 免费高清视频大片| 国产探花在线观看一区二区| 国产三级黄色录像| 可以在线观看毛片的网站| 老汉色av国产亚洲站长工具| 脱女人内裤的视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 99riav亚洲国产免费| 欧美日本视频| 国产精品av视频在线免费观看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 欧美日韩国产亚洲二区| 88av欧美| 99久久综合精品五月天人人| 日韩欧美 国产精品| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 视频区欧美日本亚洲| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲精品在线观看二区| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 黄片小视频在线播放| 99久久综合精品五月天人人| 搡老岳熟女国产| 99久久综合精品五月天人人| 日韩精品免费视频一区二区三区| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 丰满的人妻完整版| 99热这里只有是精品50| 床上黄色一级片| 黄色毛片三级朝国网站| 淫秽高清视频在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲精华国产精华精| 一级黄色大片毛片| 日本一二三区视频观看| 黄色 视频免费看| av福利片在线| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产精品亚洲av一区麻豆| 成人三级黄色视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 99久久精品热视频| 欧美久久黑人一区二区| 国产一区二区在线av高清观看| 看片在线看免费视频| 淫秽高清视频在线观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 日本 欧美在线| 午夜两性在线视频| 好男人在线观看高清免费视频| 12—13女人毛片做爰片一| 三级毛片av免费| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产成人欧美在线观看| 久久这里只有精品中国| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产伦在线观看视频一区| 日日干狠狠操夜夜爽| 777久久人妻少妇嫩草av网站| av超薄肉色丝袜交足视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产成人aa在线观看| av中文乱码字幕在线| 欧美黄色淫秽网站| 午夜a级毛片| 正在播放国产对白刺激| 天堂动漫精品| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 精品国产亚洲在线| 给我免费播放毛片高清在线观看| 久久久久久九九精品二区国产 | 精华霜和精华液先用哪个| 校园春色视频在线观看| 黄色女人牲交| 免费观看精品视频网站| 久久久精品欧美日韩精品| 超碰成人久久| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲人与动物交配视频| 日本三级黄在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 国产成人欧美在线观看| 免费看a级黄色片| 91国产中文字幕| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲av美国av| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产爱豆传媒在线观看 | 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 免费av毛片视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产免费男女视频| 又大又爽又粗| 日本免费一区二区三区高清不卡| 日本一区二区免费在线视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 少妇的丰满在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 免费在线观看亚洲国产| 色噜噜av男人的天堂激情| 老司机福利观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 一二三四社区在线视频社区8| 中文资源天堂在线| 亚洲精华国产精华精| 国产亚洲av高清不卡| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲真实伦在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产av不卡久久| 香蕉久久夜色| 日韩大码丰满熟妇| 久久久久亚洲av毛片大全| 校园春色视频在线观看| АⅤ资源中文在线天堂| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久九九热精品免费| 日本五十路高清| √禁漫天堂资源中文www| 国产av不卡久久| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 在线观看免费日韩欧美大片| 欧美日本亚洲视频在线播放| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 在线a可以看的网站| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产一区二区在线观看日韩 | 久久午夜亚洲精品久久| 日韩成人在线观看一区二区三区| xxx96com| 91av网站免费观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产区一区二久久| 国产又色又爽无遮挡免费看| 成人一区二区视频在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 岛国在线免费视频观看| 在线观看www视频免费| 99久久精品国产亚洲精品| 久久亚洲精品不卡| 看片在线看免费视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 999久久久精品免费观看国产| 欧美黄色淫秽网站| 免费在线观看完整版高清| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产成人影院久久av| 日本五十路高清| √禁漫天堂资源中文www| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 两性夫妻黄色片| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 午夜精品一区二区三区免费看| 制服丝袜大香蕉在线| 日本黄色视频三级网站网址| 又爽又黄无遮挡网站| 黄片小视频在线播放| 一本综合久久免费| 欧美乱妇无乱码| 一级a爱片免费观看的视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 三级国产精品欧美在线观看 | 欧美激情久久久久久爽电影| 成人av在线播放网站| 一a级毛片在线观看| 丁香六月欧美| 最近最新免费中文字幕在线| 久久精品人妻少妇| 高清在线国产一区| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲精品在线美女| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产精品99久久99久久久不卡| 午夜激情福利司机影院| 国产私拍福利视频在线观看| 特级一级黄色大片| 国产av又大| 亚洲国产看品久久| 精品高清国产在线一区| 这个男人来自地球电影免费观看| 村上凉子中文字幕在线| 一级毛片女人18水好多| 免费搜索国产男女视频| 嫩草影视91久久| 正在播放国产对白刺激| 欧美一区二区国产精品久久精品 | 日日干狠狠操夜夜爽| ponron亚洲| 高清在线国产一区| 91av网站免费观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 亚洲无线在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 91麻豆av在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 小说图片视频综合网站| 又爽又黄无遮挡网站| 床上黄色一级片| 久热爱精品视频在线9| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 岛国在线观看网站| 亚洲人成电影免费在线| 精品国产美女av久久久久小说| 欧美乱色亚洲激情| 久久香蕉激情| 丰满的人妻完整版| 中文资源天堂在线| 99在线视频只有这里精品首页| 久久这里只有精品中国| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 久久久国产成人免费| 色综合亚洲欧美另类图片| 无限看片的www在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 在线永久观看黄色视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 99在线视频只有这里精品首页| 国产av一区二区精品久久| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 免费在线观看黄色视频的| 宅男免费午夜| 久久精品国产综合久久久| 男女视频在线观看网站免费 | 老司机靠b影院| 国产熟女午夜一区二区三区| 男人舔女人的私密视频| 狂野欧美激情性xxxx| 国产av一区二区精品久久| 日日摸夜夜添夜夜添小说|