溴量法測定白藜蘆醇的研究

袁勝，李夢耀，李揚，張曉松，汶?；?/p>

(1.長安大學 環(huán)境科學與工程學院，陜西 西安 710054;2.長安大學 陜西省地下水與生態(tài)環(huán)境工程研究中心，陜西 西安 710054)

白藜蘆醇屬于多酚化合物，含有芪類結(jié)構(gòu)，白色結(jié)晶，難溶于水，易溶于乙醇等有機溶劑，植物界中，如虎杖、決明、薄蘆等中白藜蘆醇含量較高［1］。近年來人們對白藜蘆醇的研究結(jié)果證實其具有許多重要的生理活性，如抗癌、抗病菌、抗氧化和抗誘變等［2］。測定白藜蘆醇的方法有高效液相色譜法［3］、毛細管電泳法［4］、薄層掃描法［5］、薄層熒光掃描法［6］和化學發(fā)光法［7］等儀器法。本文依據(jù)白藜蘆醇的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)特點，建立了一種采用溴量法測定白藜蘆醇的新方法，操作簡單，測定結(jié)果準確、可靠，適合于天然產(chǎn)物中白藜蘆醇的分析測定。

1 實驗部分

1.1 材料與儀器

白藜蘆醇(含量98%);溴化鉀、溴酸鉀、碘化鉀、硫代硫酸鈉等均為分析純;重鉻酸鉀，優(yōu)級純;水為蒸餾水;新鮮葡萄;葡萄干。

AL204 電子天平;THZ-82 恒溫振蕩器。

1.2 白藜蘆醇儲備液的配制

準確稱取0.466 0 g 白藜蘆醇，用無水乙醇溶解并定容于20 mL 容量瓶中，搖勻，得0.1 mol/L 的白藜蘆醇儲備液。實驗中各濃度白藜蘆醇使用液均由儲備液逐級稀釋而成。

1.3 測定原理

白藜蘆醇，學名為3，4’，5-三羥基-1，2-二苯乙烯(亦稱芪三酚)，有順反兩種異構(gòu)體，白藜蘆醇及其苷的結(jié)構(gòu)如圖1 所示。

圖1 白藜蘆醇及其苷的化學結(jié)構(gòu)Fig.1 The chemical structure of resveratrol and piceid

白藜蘆醇結(jié)構(gòu)中含有碳碳雙鍵和酚羥基，在一定條件下，可與溴分子發(fā)生親電加成和親電取代反應，只要能夠確定與一分子白藜蘆醇起反應的溴分子數(shù)，就可用溴量法測定白藜蘆醇含量。

平行進行空白實驗，確定加入的總溴。用白藜蘆醇標準樣進行實驗，按式(5)計算反應系數(shù)z。

式中 z——與1 分子白藜蘆醇起反應的Br2份子數(shù);

V0——空白消耗Na2S2O3的體積，mL;

V——樣品消耗Na2S2O3的體積，mL;

C——Na2S2O3標準溶液的濃度，mol/L;

cb——白藜蘆醇標準溶液的濃度，mol/L;

Vb——白藜蘆醇標準溶液的體積，mL。

1.4 測定方法

準確移取白藜蘆醇標準(或樣品)溶液10.00 mL于250 mL 碘量瓶中，加入0.1 mol/L 的溴試劑5.00 mL，再微開瓶塞，加入2 mol/L 的鹽酸溶液1.0 mL，立即蓋上塞，用少量水封口，振蕩1 min，于暗處靜置20 min。微開瓶塞，加入10%的碘化鉀溶液10 mL，立即蓋上塞。充分搖勻后放置5 min，加氯仿2 mL，輕輕振蕩，使沉淀溶解，加水50 mL，用一定濃度的Na2S2O3溶液滴定，至顯淡黃色時，加2.00 mL 淀粉指示劑，繼續(xù)滴加至藍色消失，即為終點。記錄消耗Na2S2O3標準溶液的體積為V mL。

平行進行空白實驗，消耗Na2S2O3標準溶液的體積為V0mL。按式(6)計算樣品溶液中白藜蘆醇濃度。

式中 cb——樣品溶液中白藜蘆醇濃度，mg/L;

V0——空白消耗Na2S2O3標液體積，mL;

V——樣品消耗Na2S2O3標液體積，mL;

C——Na2S2O3標準溶液的濃度，mol/L;

M——白藜蘆醇摩爾分子質(zhì)量，228.25 g/mol;

z——與1 分子白藜蘆醇起反應的Br2份子數(shù);

Vx——白藜蘆醇樣品溶液體積，L。

2 結(jié)果與討論

2.1 白藜蘆醇與Br2 的反應系數(shù)

2.1.1 鹽酸用量 加入溴的摩爾分子數(shù)為白藜蘆醇的5 倍，考察2 mol/L 鹽酸用量對反應系數(shù)的影響，結(jié)果見表1。

表1 鹽酸用量對反應系數(shù)的影響Table 1 The impact of HCl amount on reaction coefficient

由表1 可知，鹽酸的用量對反應系數(shù)無顯著影響，但酸量較少時，生成Br2的反應(式(1))不完全。確定加入2 mol/L HCl 的量為1.00 mL。

2.1.2 溴試劑的用量 保持酸度不變，考察溴試劑用量對反應系數(shù)的影響，結(jié)果見表2。

表2 溴試劑用量對反應系數(shù)的影響Table 2 The impact of bromine reagent amount on reaction coefficient

由表2 可知，在保證Br2過量的情況下，溴分子的量對反應無顯著影響。但也不宜過多，通常情況，過量的溴應控制在溴總量的20%左右。

2.2 樣品分析

將市售新鮮的葡萄去除果肉和籽，風干(含水率80%)，粉碎。準確稱取5.2 g 葡萄皮于錐形瓶中，加入體積分數(shù)為60%工業(yè)酒精180 mL，在40 ℃下，恒溫振蕩提取4.0 h。取上清液為測定白藜蘆醇的樣品溶液1。以葡萄干為原料，準確稱取7.2 g 剪碎的葡萄干于錐形瓶中，加入體積分數(shù)為60%工業(yè)酒精180 mL，同樣的方法制備測定白藜蘆醇的樣品溶液2，結(jié)果見表3。

表3 白藜蘆醇樣品含量測定結(jié)果Table 3 The content measurement results of resveratrol sample

由表3 可知，葡萄皮樣品中白藜蘆醇的含量為0. 070 g/L，葡萄干樣品中白藜蘆醇的含量為0.175 g/L。

2.3 精密度和準確度

2.3. 1 精密度 實驗數(shù)據(jù)的精密度分析結(jié)果見表4。

由表4 可知，兩種樣品的10 次測量結(jié)果沒有顯著性的差異，證明數(shù)據(jù)合理可信。

表4 白藜蘆醇樣品精密度分析結(jié)果Table 4 The accuracy analysis results of resveratrol sample

2.3.2 準確度 對兩種樣品進行加標回收實驗，結(jié)果見表5。

表5 白藜蘆醇樣品加標回收率測定結(jié)果Table 5 The add mark recovery rate measurement results of resveratrol sample

由表5 可知，方法的回收率在97% ～98%之間，該方法比較可靠、準確。

3 結(jié)論

(1)通過對白藜蘆醇與溴試劑反應的研究，確定白藜蘆醇與溴分子的反應分子數(shù)值比為1∶4。

(2)溴量法測定白藜蘆醇含量的最佳反應條件為:加入白藜蘆醇分子與溴分子的摩爾比為1∶5，加入2 mol/L HCl 的體積為1 mL。加標回收率97% ～98%，方法具有可行性以及穩(wěn)定性。

［1］ 張凌燕.虎杖中白藜蘆醇分離純化工藝及其含量檢測研究［D］.福州:福建師范大學，2006.

［2］ 潘瑾，黃玉明.化學發(fā)光測定白藜蘆醇［J］.西南師范大學學報，2006(4):90-92.

［3］ Emilia Juan M，Lamuela-Raventos R M，de la Torre-Boronat M C，et al.Determination of trans-resveratrol in plasma by HPLC［J］.Anal Chem，1999，71:747-750.

［4］ Gao Leyi，Chu Qingcui，Ye Jiannong. Determination of trans-resveratrol in wines，herbs and health food by capillary electrophoresis with electrochemical detection［J］.Food Chem，2002，78(2):255-260.

［5］ 趙瑞芝.薄層掃描法測定虎杖中白藜蘆醇含量［J］.中成藥，2005，27(5):605-606.

［6］ 陳敏，舒友琴，何計國，等. 薄層熒光掃描法測定葡萄酒中的白藜蘆醇及其糖苷異構(gòu)體［J］. 分析化學，2005，33(5):635-638.

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