飼料中安定的殘留分析技術(shù)研究

陳建新

（石家莊曙光制藥有限公司，河北 石家莊 050030）

飼料中安定的殘留分析技術(shù)研究

陳建新

（石家莊曙光制藥有限公司，河北 石家莊 050030）

本文主要對安定做了簡要介紹，指出將其應(yīng)用到飼料中所存在的危害，然后從所使用的設(shè)備及溶液和實驗要點及方法兩個方面對分析技術(shù)做出了詳細介紹，為有效地測定安定的殘留打下基礎(chǔ)。

飼料；安定殘留；分析技術(shù)

1 分析技術(shù)所使用的設(shè)備及溶液

分析飼料中安定的殘留一般采用液質(zhì)聯(lián)用法，這種方法具有靈敏度高、回收率高、穩(wěn)定性好等特點。因此，液質(zhì)聯(lián)用法分析技術(shù)經(jīng)常被人們應(yīng)用分析飼料中安定的殘留。

1.1儀器。液質(zhì)聯(lián)用分析技術(shù)所采用的儀器是液質(zhì)聯(lián)用儀，包括配有電噴霧電離源的ZQ4000質(zhì)譜檢測器、Waters 2695液相色譜儀、每分鐘四千轉(zhuǎn)的離心機、電子分析天平、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、旋渦混合儀等器械。

1.2 藥品和試劑。檢測飼料中安定的殘留要用到很多的藥品和試劑，其中包括由Sigma公司生產(chǎn)的、純度大于百分之九十九的安定標(biāo)準(zhǔn)品，MERCK公司生產(chǎn)的色譜純甲醇和乙腈，重蒸餾的水。除此之外，其他試劑采用的均是分析純。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置。首先，要準(zhǔn)確地稱取一定量的安定標(biāo)準(zhǔn)品，然后加入適量的甲醇將其配成標(biāo)準(zhǔn)貯備液，之后再向標(biāo)準(zhǔn)貯備液中加入相應(yīng)量的甲醇，將其稀釋成相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液留做備用。

2 實驗要點及方法

2.1 色譜條件。檢測飼料中所含的安定殘留時，需要嚴格地控制色譜條件。首先，色譜柱需要達到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)。其次，柱溫應(yīng)維持在三十度，乙腈和甲酸的使用量和配比要進行嚴格的控制。最后，對流速和進樣量進行控制。流速應(yīng)控制為0.2毫升每分鐘，進樣量則應(yīng)為十微升。只有這樣進行嚴格的控制，才有可能使色譜條件達到所需要的標(biāo)準(zhǔn)。色譜條件的確定是非常復(fù)雜、繁瑣的，最為重要的環(huán)節(jié)就是流動相。流動相作為色譜分離中極為重要的一個環(huán)節(jié)，直接關(guān)系到飼料中安定的殘留分析的檢出限和靈敏度，對能否將樣品的組分一一洗脫分離起著決定性的作用。在過去常用的有關(guān)安定的液相檢測方法中，大多采用緩沖鹽溶液作為流動相。雖然把緩沖鹽溶液作為流動相可以優(yōu)化安定的色譜峰型，但是也存在著很多不利因素。比如：使用緩沖鹽溶液會對色譜柱造成損害，尤其是在質(zhì)譜檢測器中，鹽類物質(zhì)特別是無機鹽類物質(zhì)，非常容易對儀器造成污染。而現(xiàn)行的檢測方法就很好地避免了這一問題。根據(jù)飼料中安定的化學(xué)性質(zhì)和一些流動相的pH條件，進行參考、對比，最后選擇了甲酸和乙腈作為現(xiàn)行分析技術(shù)的流動相，從而避免了無機鹽類的使用，為碎片離子的形成創(chuàng)造了非常有利的條件。

2.2 質(zhì)譜條件。與色譜條件相似的是，質(zhì)譜條件也需要進行嚴格的控制和把關(guān)。電離方式應(yīng)采用電噴霧離子源的方式進行電離；離子源的溫度應(yīng)該達到140攝氏度；脫溶劑溫度則要達到280度；氣體速度設(shè)定為300升每小時。除此之外還要對各種電壓進行調(diào)節(jié)，錐孔電壓為45伏，毛細管電壓為3 500伏，萃取錐孔電壓為5伏，RF六級桿透鏡電壓為0.5伏，離子能量為1V。這些條件雖然復(fù)雜、繁瑣，但是要想準(zhǔn)確無誤地分析飼料中安定的殘留就必須對其進行嚴格的控制。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。眾所周知，儀器所測量出來的結(jié)果不一定是十分精確的，總存在著或多或少的誤差。要想使所測結(jié)果更為標(biāo)準(zhǔn)，那么就有必要繪制標(biāo)準(zhǔn)的曲線，根據(jù)曲線的走勢情況進行相應(yīng)的判定。首先將配制好的標(biāo)準(zhǔn)工作液按照濃度的大小進行排序。然后，按照濃度由小到大的順序依次進樣。再根據(jù)上述的色譜條件和質(zhì)譜條件進行分析，將所得結(jié)果繪制成標(biāo)準(zhǔn)的曲線，從而得出所選離子的保留時間和峰面積。除此之外，在選定各濃度的安定標(biāo)準(zhǔn)液時要在色譜條件下測定，這樣才有可能得到標(biāo)準(zhǔn)的曲線和回歸方程，才有利于進行下一步操作。

2.4 樣品預(yù)處理。對飼料中安定的殘留進行分析時，不能直接拿飼料進行分析，需要取少量的飼料作為樣品，然后對其進行預(yù)處理。首先，取20克的飼料作為樣品，將其倒入20毫升的水內(nèi)進行溶解，加入碳酸鈉溶液進行調(diào)節(jié)，直到將pH調(diào)成10為止。然后，加入兩克氯化鈉和20毫升的正己烷與二氯甲烷，進行兩分鐘的漩渦混合，再以4 000轉(zhuǎn)每分鐘的離心速度進行離心，時間大約為10分鐘。最后，吸取上層的有機相，將其存放于梨形瓶內(nèi)。把剩下的液體重復(fù)操作再提取一次，將兩次所得的有機相進行合并，放在50攝氏度的水浴上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)直至干燥。之后，取2毫升的甲醇將剩余的殘余物進行溶解，取1毫升將其倒在制定的過濾膜上進行過濾，供LC/MS技術(shù)分析時使用。所制樣品中安定的提取方法有很多種，常見的方法包括固相微萃取、固相萃取以及液液萃取等。值得一提的是，此處提取溶液選擇的是液液萃取。萃取時考察了二氯甲烷和正己烷的干擾情況和不同配比提取率，以體積比為7:3的比例進行提取。這樣的操作不僅提取率高，還有助于水相和有機相實現(xiàn)很好的分離。

2.5 樣品回收率及精密度測定。取兩克的空白飼料，定量加入安定標(biāo)準(zhǔn)品，制成三個不同濃度的液體，然后按照樣品預(yù)處理的方法對其進行處理，最后進行檢測。

綜上，安定是一種國家控制的精神藥品，具有鎮(zhèn)靜、抗焦慮、催眠等藥理活性。在飼養(yǎng)和運輸過程中使用含有安定的飼料，可以降低動物維持的需要，減少失重和死亡率。因此，某些不法商販?zhǔn)芾娴尿?qū)使經(jīng)常會在飼料中添加，使其在牲畜體內(nèi)殘留，從而導(dǎo)致牲畜產(chǎn)品不安全，所以我國命令禁止在飼料中添加、使用安定。

[1]賈瑜，張德紅，馮才茂.安定殘留危害及其檢測技術(shù)研究進展[J].農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全，2012，（2）.

S816

A

1671-0037（2014）07-94-1

陳建新（1974.5-），女，本科，研究方向：生物制劑及菌體蛋白飼料研發(fā)。