毛冬青總皂苷對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究

李洪亮+賀方興+程齊來

摘要：為研究毛冬青（Ilex pubescens Hook et Arn.）總皂苷對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，并初步探討其保護(hù)作用機(jī)制，將試驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對(duì)照組、毛冬青總皂苷高、中、低劑量組及陽性藥物對(duì)照組，運(yùn)用大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞，制作腦缺血再灌注損傷模型，缺血10 min后，毛冬青總皂苷給藥組及陽性藥物組分別于舌下靜脈給予高、中、低劑量的毛冬青總皂苷及陽性藥物（香丹注射液），假手術(shù)組、模型組給予等體積的生理鹽水。缺血60 min后再灌注，24 h后，每組取8只大鼠斷頭取腦，TTC染色，測(cè)定腦梗死體積;取血離心后，取血清，比色法測(cè)血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性及丙二醛（MDA）的含量;每組取2只大鼠運(yùn)用病理組織形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)，觀察毛冬青總皂苷對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦組織細(xì)胞損傷的影響。結(jié)果表明，毛冬青總皂苷不同劑量組與模型對(duì)照組相比，其腦梗死面積減小，病理變化較輕;血清SOD的活性顯著升高;毛冬青總皂苷高劑量組與模型對(duì)照組相比較，其MDA含量顯著降低。說明毛冬青總皂苷對(duì)腦缺血再灌注損傷具有一定的保護(hù)作用，其保護(hù)機(jī)制與毛冬青總皂苷抗氧化作用及增強(qiáng)氧自由基的清除有關(guān)。

關(guān)鍵詞：毛冬青（Ilex pubescens Hook et Arn.）總皂苷;腦缺血再灌注損傷;保護(hù)作用

中圖分類號(hào)：R285.5 ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? ?文章編號(hào)：0439-8114（2014）21-5200-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2014.21.039

Protective Effects of Total Saponins from Ilex pubescens on Ischemia

Reperfusion Injury of Rats and Its Mechanism

LI Hong-lianga，HE Fang-xingb，CHENG Qi-laia

（a.College of Pharmacy;b. Bascial medical college， Gannan medical College， Ganzhou 341000， Jiangxi， China）

Abstract： To study the protective effect of total saponins from Ilex pubescens Hook et Arn on cerebral ischemia reperfusion injury and the potentially mechanism， the rats were randomly divided into sham operation group， model group， saponins of total saponins from Ilex pubescens Hook （high， middle， low） dose group and positive medicine control group. Same volume solvent or total saponins from Mao Dongqing was given in high， middle and low dosage， or positive medicine such as was given Xiangdan was injected sublingually 10min later of operation. The rats cerebral ischemia reperfusion model was made by middle cerebral artery embolization. ?After ischemia for 60 mins and reperfusion for 24 hours， 8 rats were taken from every group and removed brain by decapitation， then dyed by TTC and measured the volume of cerebral infarction， the activity of SOD， the content of GSH-Px and MDA in serum by colorimetry. 2 rats were taken from each group for histopathological examination. The effects of total saponins of Mao Dongqing on brain tissue injury caused by cerebral ischemia reperfusion injury were observed. The results showed that the volumes of cerebral infarction in Mao Dongqin treatment group reduced. Pathological changes were much less. The activity of SOD increased compared with model control group. The content of MDA decreased in the treatment group of high dosage. It is indicated that the total saponins from Mao Dongqing had certain protective effect on cerebral ischemia reperfusion. The mechanism might be related with anti-oxygenation and scavenging strengthen on oxygen free radicals.

Key words：total saponins from Ilex pubescens Hook et Arn （Mao Dongqing）;cerebral ischemia reperfusion injury;Protective effect

毛冬青（Ilex pubescens Hook et Arn.）系冬青科（Aquifoliaceae）冬青屬多年生常綠灌木，盛產(chǎn)于廣東、廣西、福建、湖南、江西等地。毛冬青具有活血通脈、消腫止痛、清熱解毒功效，臨床上常用于冠心病、心絞痛和脈管炎等的治療。冬青屬全世界有400余種，中國(guó)約150種[1]。毛冬青的主要化學(xué)成分為毛冬青總皂苷和黃酮苷，毛冬青根主要成分為三萜皂苷類，主要有毛冬青皂苷甲、毛冬青皂苷B1、毛冬青皂苷B、毛冬青酸以及救必應(yīng)酸等[2]。大量研究表明，毛冬青總皂苷對(duì)心血管系統(tǒng)具有良好的保護(hù)作用，其能夠通過直接和間接作用發(fā)揮對(duì)心腦血管的保護(hù)作用，降低心腦血管疾病的發(fā)病率。贛南醫(yī)學(xué)院腦血管重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室最近研究表明，毛冬青總皂苷具有良好的抗多因素誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性心律失常療效，其中對(duì)心肌缺血再灌注損傷誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性心律失常療效十分顯著。本試驗(yàn)研究了毛冬青總皂苷對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，并初步探討了其保護(hù)機(jī)制，為毛冬青總皂苷的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1 ?材料與方法

1.1 ?試劑及藥物

毛冬青總皂苷由贛南醫(yī)學(xué)院腦血管重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，純度92%，用注射用水配成所需的濃度;超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所;其他試劑均為分析純。

1.2 ?試驗(yàn)動(dòng)物

雄性SD大鼠60只，體重（260+20） g，由江西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：JZDWNo：2012-0182，許可證號(hào)：SCXK（贛）2010-0001。

1.3 ?方法

1.3.1 ?試驗(yàn)動(dòng)物分組與大鼠腦缺血再灌注損傷模型的制備[3] ? 雄性SD大鼠60只隨機(jī)均分成6組，即假手術(shù)組、腦缺血再灌注損傷模型對(duì)照組、毛冬青總皂苷高劑量（20 mg/kg）組、毛冬青總皂苷中劑量（10 mg/kg）組、毛冬青總皂苷低劑量（5 mg/kg）組、陽性藥物（香丹注射液）對(duì)照組。大鼠用10%水合氯醛溶液（350 mg/kg）麻醉，參照Longa等[3]的方法制備大腦中動(dòng)脈阻斷模型，將一尼龍線（長(zhǎng)4 cm，直徑0.2 mm）經(jīng)頸總動(dòng)脈主干切口緩慢向頸內(nèi)動(dòng)脈入顱方向推進(jìn)，以頸總動(dòng)脈分叉處為標(biāo)記，推進(jìn)18～20 mm感到輕微阻力時(shí)，即達(dá)到較細(xì)大腦前動(dòng)脈，阻斷大腦中動(dòng)脈的所有血液供應(yīng)，60 min后，拔出尼龍線并扎緊動(dòng)脈殘端，縫合皮下組織和皮膚，完成腦缺血再灌注損傷模型。假手術(shù)組大鼠只暴露和分離出頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈，不閉塞大腦中動(dòng)脈。術(shù)中嚴(yán)格控制室溫在23～25 ℃。手術(shù)結(jié)束后藥物治療組分別從舌下靜脈注射不同劑量的毛冬青總皂苷及陽性藥物（香丹注射液），假手術(shù)組和模型組給予同體積的生理鹽水。

1.3.2 ?神經(jīng)功能缺損評(píng)分 ?采用Zea Longa評(píng)分方法，各組SD大鼠按“1.3.1”的方法處理后，使動(dòng)脈血恢復(fù)血流供應(yīng)后再灌注不同藥物，24 h后，采用單盲法進(jìn)行評(píng)分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下：0分：無神經(jīng)系統(tǒng)功能缺失癥狀，活動(dòng)正常者;1分：不能完全伸展對(duì)側(cè)前肢者;2分：出現(xiàn)左側(cè)Homer征，爬行時(shí)出現(xiàn)向右轉(zhuǎn)圈者;3分：行走時(shí)身體向右側(cè)偏癱傾倒者;4分：不能自行行走者，意識(shí)喪失者。

1.3.3 ?毛冬青總皂苷對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦梗死范圍的影響 ?各組SD大鼠按“1.3.1”的方法處理后，使動(dòng)脈血恢復(fù)血流供應(yīng)后再灌注不同藥物，24 h后，用上述方法麻醉，斷頭處死大鼠。取腦，將前腦沿冠狀面切成厚度基本相同的5片，腦片置于5 mL 2%TTC（2，3，5-氯化三苯基四氮唑，Triphenyl tetrazoliu chloride，TTC）染色溶液中，37 ℃避光孵育30 min。經(jīng)染色后非缺血區(qū)呈玫瑰紅色，腦梗死區(qū)呈灰白色，按下列公式計(jì)算梗死率。梗死率=梗死區(qū)面積/總面積×100%。

1.3.4 ?血清生化指標(biāo)測(cè)定 ?各組SD大鼠按“1.3.1”的方法處理后，使動(dòng)脈血恢復(fù)血流供應(yīng)后再灌注不同藥物，24 h后，所有大鼠麻醉后斷頭取血，4 ℃、3 000 r/min離心10 min，取血清，-80 ℃保存。嚴(yán)格按試劑盒操作測(cè)定血清SOD、GSH-Px活性及MDA含量。

1.4 ?統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)均以SPSS14.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，神經(jīng)學(xué)評(píng)分進(jìn)行秩和檢驗(yàn)，腦梗死面積比進(jìn)行t檢驗(yàn)，血清SOD、GSH-Px活性、MDA含量均進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?大鼠腦缺血再灌注損傷神經(jīng)學(xué)評(píng)分

圖1結(jié)果顯示，與模型對(duì)照組比較，毛冬青總皂苷中、高劑量組大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分均顯著（P<0.05或P<0.01）降低，說明毛冬青總皂苷可有效改善腦缺血對(duì)大鼠神經(jīng)功能的損傷狀況。毛冬青總皂苷不同劑量組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分與陽性藥物對(duì)照組相比較差異均不顯著（P>0.05）。說明毛冬青總皂苷與香丹注射液相比，其改善腦缺血對(duì)大鼠神經(jīng)功能損傷的療效并沒有明顯差異。

2.2 ?毛冬青總皂苷對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦梗死范圍的影響

圖2、圖3結(jié)果顯示，與模型對(duì)照組比較，毛冬青總皂苷中、高劑量組大鼠的腦梗死率均顯著（P<0.05或P<0.01）降低，說明毛冬青總皂苷可有效改善腦缺血引起的局灶性腦梗死。

2.3 ?毛冬青總皂苷對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠血清中SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影響

表1結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比較，毛冬青總皂苷不同劑量組、陽性藥物對(duì)照組及模型對(duì)照組大鼠血清SOD、GSH-Px活性均顯著（P<0.05或P<0.01）降低，說明腦缺血再灌注損傷模型建立成功，該方法可引起動(dòng)物血清SOD、GSH-Px活性降低。與模型對(duì)照組相比較，毛冬青總皂苷不同劑量組及陽性藥物對(duì)照組大鼠血清SOD活性顯著（P<0.05）增加，說明毛冬青總皂苷和香丹注射液能提高腦缺血再灌注損傷后大鼠血清SOD活性。與模型對(duì)照組相比較，毛冬青總皂苷高劑量組可顯著降低大鼠血清MDA含量（P<0.05），其他劑量組與模型對(duì)照組相比則無明顯差異。

2.4 ?毛冬青總皂苷對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦組織細(xì)胞損傷的影響

由圖4可知，腦缺血再灌注損傷模型組切片神經(jīng)原、膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞間隙增寬，神經(jīng)纖維網(wǎng)呈空泡樣變;神經(jīng)原胞漿及胞膜形態(tài)不規(guī)則，邊界不清，胞核濃縮，部分細(xì)胞呈固縮狀（圖4E）。假手術(shù)組神經(jīng)原、膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)完整，無間質(zhì)水腫;神經(jīng)原胞漿豐富、均勻，胞核呈圓形或橢圓形，核仁清晰（圖4F）。毛冬青總皂苷低劑量組出現(xiàn)小血管周圍間隙增寬，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（圖4A）。毛冬青總皂苷中、高劑量組和陽性藥物對(duì)照組神經(jīng)原、膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)相對(duì)正常，結(jié)構(gòu)相對(duì)完整，病理變化輕（圖4B、圖4C、圖4D）。

3 ?討論

近年來，國(guó)內(nèi)外對(duì)毛冬青、毛冬青有效成分及相關(guān)衍生物（如毛冬青甲素）的藥理及臨床研究主要集中在心腦血管及抗炎作用等方面[4]。毛冬青酸具有抑制動(dòng)、靜脈血栓形成的作用[5]。毛冬青甲素管內(nèi)給藥對(duì)花生四烯酸（AA）誘導(dǎo)兔血小板聚集和MDA生成的影響試驗(yàn)結(jié)果表明，毛冬青甲素在抑制AA誘導(dǎo)血小板聚集的同時(shí)，對(duì)AA誘導(dǎo)血小板生成MDA也有抑制作用，且兩種抑制作用有相關(guān)性，表明毛冬青甲素抗血小板作用可能與其抑制過氧化脂質(zhì)有關(guān)[6]。毛冬青甲素體外給藥試驗(yàn)?zāi)芤种艫DP、膠原誘導(dǎo)的人、兔血小板和5-羥色胺釋放，劑量與效應(yīng)相關(guān)，給大鼠體內(nèi)給藥，也能明顯抑制血小板聚集。毛冬青甲素治療缺血性腦血管病取得了較好的療效[7，8]。贛南醫(yī)學(xué)院腦血管重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室研究證明毛冬青總皂苷能降低機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)，本試驗(yàn)結(jié)果中毛冬青總皂苷可明顯增加腦缺血再灌注損傷大鼠血清中SOD的活性，毛冬青總皂苷高劑量組MDA的含量明顯降低，這也證明了毛冬青總皂苷具有良好的抗氧化作用。腦梗死范圍的大小，常用來衡量腦缺血再灌注損傷的程度。本試驗(yàn)結(jié)果表明，不同劑量的毛冬青總皂苷均能減小模型大鼠腦梗死范圍，說明毛冬青總皂苷對(duì)腦缺血再灌注損傷導(dǎo)致的腦梗死有一定的抑制作用。

炎性細(xì)胞因子在腦缺血再灌注損傷中起著重要作用，炎性細(xì)胞因子的過度表達(dá)加重腦缺血缺氧損傷。炎性細(xì)胞因子在缺血組織的聚集是加重腦缺血缺氧的重要因素。它們調(diào)節(jié)細(xì)胞表面黏附分子的數(shù)量和功能，造成白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，阻斷微循環(huán)，影響缺血半暗帶區(qū)血供，并使血漿成分聚集于管壁，導(dǎo)致管壁增厚、狹窄和腦梗死[9]。從病理組織形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果可以看出，毛冬青總皂苷低劑量組大鼠出現(xiàn)小血管周圍間隙增寬，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，毛冬青總皂苷中劑量組、高劑量組和陽性藥物對(duì)照組大鼠神經(jīng)原、膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)相對(duì)正常，結(jié)構(gòu)相對(duì)完整，病理變化輕，這說明毛冬青總皂苷能夠抑制炎性細(xì)胞的產(chǎn)生從而減輕腦缺血再灌注導(dǎo)致的腦組織損傷。因此毛冬青總皂苷對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷具有一定的保護(hù)作用，但毛冬青總皂苷的具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步的研究。

參考文獻(xiàn)：

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2.3 ?毛冬青總皂苷對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠血清中SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影響

表1結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比較，毛冬青總皂苷不同劑量組、陽性藥物對(duì)照組及模型對(duì)照組大鼠血清SOD、GSH-Px活性均顯著（P<0.05或P<0.01）降低，說明腦缺血再灌注損傷模型建立成功，該方法可引起動(dòng)物血清SOD、GSH-Px活性降低。與模型對(duì)照組相比較，毛冬青總皂苷不同劑量組及陽性藥物對(duì)照組大鼠血清SOD活性顯著（P<0.05）增加，說明毛冬青總皂苷和香丹注射液能提高腦缺血再灌注損傷后大鼠血清SOD活性。與模型對(duì)照組相比較，毛冬青總皂苷高劑量組可顯著降低大鼠血清MDA含量（P<0.05），其他劑量組與模型對(duì)照組相比則無明顯差異。

2.4 ?毛冬青總皂苷對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦組織細(xì)胞損傷的影響

由圖4可知，腦缺血再灌注損傷模型組切片神經(jīng)原、膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞間隙增寬，神經(jīng)纖維網(wǎng)呈空泡樣變;神經(jīng)原胞漿及胞膜形態(tài)不規(guī)則，邊界不清，胞核濃縮，部分細(xì)胞呈固縮狀（圖4E）。假手術(shù)組神經(jīng)原、膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)完整，無間質(zhì)水腫;神經(jīng)原胞漿豐富、均勻，胞核呈圓形或橢圓形，核仁清晰（圖4F）。毛冬青總皂苷低劑量組出現(xiàn)小血管周圍間隙增寬，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（圖4A）。毛冬青總皂苷中、高劑量組和陽性藥物對(duì)照組神經(jīng)原、膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)相對(duì)正常，結(jié)構(gòu)相對(duì)完整，病理變化輕（圖4B、圖4C、圖4D）。

3 ?討論

近年來，國(guó)內(nèi)外對(duì)毛冬青、毛冬青有效成分及相關(guān)衍生物（如毛冬青甲素）的藥理及臨床研究主要集中在心腦血管及抗炎作用等方面[4]。毛冬青酸具有抑制動(dòng)、靜脈血栓形成的作用[5]。毛冬青甲素管內(nèi)給藥對(duì)花生四烯酸（AA）誘導(dǎo)兔血小板聚集和MDA生成的影響試驗(yàn)結(jié)果表明，毛冬青甲素在抑制AA誘導(dǎo)血小板聚集的同時(shí)，對(duì)AA誘導(dǎo)血小板生成MDA也有抑制作用，且兩種抑制作用有相關(guān)性，表明毛冬青甲素抗血小板作用可能與其抑制過氧化脂質(zhì)有關(guān)[6]。毛冬青甲素體外給藥試驗(yàn)?zāi)芤种艫DP、膠原誘導(dǎo)的人、兔血小板和5-羥色胺釋放，劑量與效應(yīng)相關(guān)，給大鼠體內(nèi)給藥，也能明顯抑制血小板聚集。毛冬青甲素治療缺血性腦血管病取得了較好的療效[7，8]。贛南醫(yī)學(xué)院腦血管重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室研究證明毛冬青總皂苷能降低機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)，本試驗(yàn)結(jié)果中毛冬青總皂苷可明顯增加腦缺血再灌注損傷大鼠血清中SOD的活性，毛冬青總皂苷高劑量組MDA的含量明顯降低，這也證明了毛冬青總皂苷具有良好的抗氧化作用。腦梗死范圍的大小，常用來衡量腦缺血再灌注損傷的程度。本試驗(yàn)結(jié)果表明，不同劑量的毛冬青總皂苷均能減小模型大鼠腦梗死范圍，說明毛冬青總皂苷對(duì)腦缺血再灌注損傷導(dǎo)致的腦梗死有一定的抑制作用。

炎性細(xì)胞因子在腦缺血再灌注損傷中起著重要作用，炎性細(xì)胞因子的過度表達(dá)加重腦缺血缺氧損傷。炎性細(xì)胞因子在缺血組織的聚集是加重腦缺血缺氧的重要因素。它們調(diào)節(jié)細(xì)胞表面黏附分子的數(shù)量和功能，造成白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，阻斷微循環(huán)，影響缺血半暗帶區(qū)血供，并使血漿成分聚集于管壁，導(dǎo)致管壁增厚、狹窄和腦梗死[9]。從病理組織形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果可以看出，毛冬青總皂苷低劑量組大鼠出現(xiàn)小血管周圍間隙增寬，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，毛冬青總皂苷中劑量組、高劑量組和陽性藥物對(duì)照組大鼠神經(jīng)原、膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)相對(duì)正常，結(jié)構(gòu)相對(duì)完整，病理變化輕，這說明毛冬青總皂苷能夠抑制炎性細(xì)胞的產(chǎn)生從而減輕腦缺血再灌注導(dǎo)致的腦組織損傷。因此毛冬青總皂苷對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷具有一定的保護(hù)作用，但毛冬青總皂苷的具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步的研究。

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2.3 ?毛冬青總皂苷對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠血清中SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影響

表1結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比較，毛冬青總皂苷不同劑量組、陽性藥物對(duì)照組及模型對(duì)照組大鼠血清SOD、GSH-Px活性均顯著（P<0.05或P<0.01）降低，說明腦缺血再灌注損傷模型建立成功，該方法可引起動(dòng)物血清SOD、GSH-Px活性降低。與模型對(duì)照組相比較，毛冬青總皂苷不同劑量組及陽性藥物對(duì)照組大鼠血清SOD活性顯著（P<0.05）增加，說明毛冬青總皂苷和香丹注射液能提高腦缺血再灌注損傷后大鼠血清SOD活性。與模型對(duì)照組相比較，毛冬青總皂苷高劑量組可顯著降低大鼠血清MDA含量（P<0.05），其他劑量組與模型對(duì)照組相比則無明顯差異。

2.4 ?毛冬青總皂苷對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦組織細(xì)胞損傷的影響

由圖4可知，腦缺血再灌注損傷模型組切片神經(jīng)原、膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞間隙增寬，神經(jīng)纖維網(wǎng)呈空泡樣變;神經(jīng)原胞漿及胞膜形態(tài)不規(guī)則，邊界不清，胞核濃縮，部分細(xì)胞呈固縮狀（圖4E）。假手術(shù)組神經(jīng)原、膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)完整，無間質(zhì)水腫;神經(jīng)原胞漿豐富、均勻，胞核呈圓形或橢圓形，核仁清晰（圖4F）。毛冬青總皂苷低劑量組出現(xiàn)小血管周圍間隙增寬，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（圖4A）。毛冬青總皂苷中、高劑量組和陽性藥物對(duì)照組神經(jīng)原、膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)相對(duì)正常，結(jié)構(gòu)相對(duì)完整，病理變化輕（圖4B、圖4C、圖4D）。

3 ?討論

近年來，國(guó)內(nèi)外對(duì)毛冬青、毛冬青有效成分及相關(guān)衍生物（如毛冬青甲素）的藥理及臨床研究主要集中在心腦血管及抗炎作用等方面[4]。毛冬青酸具有抑制動(dòng)、靜脈血栓形成的作用[5]。毛冬青甲素管內(nèi)給藥對(duì)花生四烯酸（AA）誘導(dǎo)兔血小板聚集和MDA生成的影響試驗(yàn)結(jié)果表明，毛冬青甲素在抑制AA誘導(dǎo)血小板聚集的同時(shí)，對(duì)AA誘導(dǎo)血小板生成MDA也有抑制作用，且兩種抑制作用有相關(guān)性，表明毛冬青甲素抗血小板作用可能與其抑制過氧化脂質(zhì)有關(guān)[6]。毛冬青甲素體外給藥試驗(yàn)?zāi)芤种艫DP、膠原誘導(dǎo)的人、兔血小板和5-羥色胺釋放，劑量與效應(yīng)相關(guān)，給大鼠體內(nèi)給藥，也能明顯抑制血小板聚集。毛冬青甲素治療缺血性腦血管病取得了較好的療效[7，8]。贛南醫(yī)學(xué)院腦血管重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室研究證明毛冬青總皂苷能降低機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)，本試驗(yàn)結(jié)果中毛冬青總皂苷可明顯增加腦缺血再灌注損傷大鼠血清中SOD的活性，毛冬青總皂苷高劑量組MDA的含量明顯降低，這也證明了毛冬青總皂苷具有良好的抗氧化作用。腦梗死范圍的大小，常用來衡量腦缺血再灌注損傷的程度。本試驗(yàn)結(jié)果表明，不同劑量的毛冬青總皂苷均能減小模型大鼠腦梗死范圍，說明毛冬青總皂苷對(duì)腦缺血再灌注損傷導(dǎo)致的腦梗死有一定的抑制作用。

炎性細(xì)胞因子在腦缺血再灌注損傷中起著重要作用，炎性細(xì)胞因子的過度表達(dá)加重腦缺血缺氧損傷。炎性細(xì)胞因子在缺血組織的聚集是加重腦缺血缺氧的重要因素。它們調(diào)節(jié)細(xì)胞表面黏附分子的數(shù)量和功能，造成白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，阻斷微循環(huán)，影響缺血半暗帶區(qū)血供，并使血漿成分聚集于管壁，導(dǎo)致管壁增厚、狹窄和腦梗死[9]。從病理組織形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果可以看出，毛冬青總皂苷低劑量組大鼠出現(xiàn)小血管周圍間隙增寬，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，毛冬青總皂苷中劑量組、高劑量組和陽性藥物對(duì)照組大鼠神經(jīng)原、膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)相對(duì)正常，結(jié)構(gòu)相對(duì)完整，病理變化輕，這說明毛冬青總皂苷能夠抑制炎性細(xì)胞的產(chǎn)生從而減輕腦缺血再灌注導(dǎo)致的腦組織損傷。因此毛冬青總皂苷對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷具有一定的保護(hù)作用，但毛冬青總皂苷的具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步的研究。

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