CellaVision DM96自動(dòng)成像系統(tǒng)在白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)中的應(yīng)用

楊 婧，關(guān)會(huì)霞，牛景陽，楊 華，陳渝寧△（沈陽軍區(qū)總醫(yī)院：.感染控制科；.檢驗(yàn)科，沈陽 0840）

近年來，自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的發(fā)展使得短時(shí)間內(nèi)分析數(shù)萬個(gè)細(xì)胞成為可能［1］。由于血液分析儀提供的白細(xì)胞、紅細(xì)胞及血小板的形態(tài)學(xué)資料有限，因此外周血細(xì)胞涂片仍然是臨床診療中必不可少的重要診斷工具［2-3］。近年出現(xiàn)的Nextslide及CellaVision DM96自動(dòng)成像系統(tǒng)均是全自動(dòng)血細(xì)胞形態(tài)鑒定儀器，可以實(shí)現(xiàn)血涂片檢查的自動(dòng)化［4-5］。此類分析儀可以將染色后的血涂片置于高倍鏡下拍攝每個(gè)細(xì)胞的數(shù)碼圖像，通過軟件進(jìn)行細(xì)胞分類和鑒定。除了白細(xì)胞的分類，儀器還提供紅細(xì)胞形態(tài)信息和血小板數(shù)量的粗略估算［6］。為驗(yàn)證CellaVision DM96系統(tǒng)對(duì)外周血涂片中白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的應(yīng)用價(jià)值，作者選擇2011年7月1日至8月31日住院和門診患者的乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝靜脈血，在貝克曼庫爾特LH750血液分析儀檢測(cè)需要復(fù)檢的112例標(biāo)本，同時(shí)用CellaVision DM96系統(tǒng)和顯微鏡法進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2011年7月1日至8月31日住院和門診患者的EDTA-K2抗凝靜脈血，經(jīng)貝克曼庫爾特LH750血液儀分析檢測(cè)需要復(fù)檢的112例標(biāo)本，對(duì)應(yīng)112例患者中男54例，女58例，年齡15～69歲，白細(xì)胞計(jì)數(shù)范圍為（0.52～43.79）×109／L。

1.2 儀器與試劑瑞典CellaVision DM96系統(tǒng)，美國貝克曼庫爾特LH750血液分析儀，日本奧林巴斯電光學(xué)顯微鏡。LH750血液分析儀試劑使用原廠配套試劑，質(zhì)控品由貝克曼庫爾特實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)（蘇州）有限公司提供。染料為瑞氏染料，EDTA-K2真空管為BD公司產(chǎn)品。

1.3 方法

1.3.1 CellaVision DM96系統(tǒng) 嚴(yán)格按LH750血液分析儀操作說明，每天進(jìn)行清洗及高、中、低值質(zhì)控品檢測(cè)，確保其在控后再進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)。標(biāo)本在15～25℃環(huán)境中，用LH750血液分析儀進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)分類中符合復(fù)檢規(guī)則的標(biāo)本進(jìn)行推片、染色，選擇體尾交界處染色良好的區(qū)域，在CellaVision DM96系統(tǒng)油鏡計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，按形態(tài)特征分類，計(jì)數(shù)各類細(xì)胞的百分比。

1.3.2 手工鏡檢法 依據(jù)《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第3版）》執(zhí)行［7］，由兩位具有多年血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)工作經(jīng)驗(yàn)的技師進(jìn)行鏡檢。

1.3.3 復(fù)檢規(guī)則 利用LH750自動(dòng)血細(xì)胞分析儀報(bào)警系統(tǒng)，并參考“國際血液學(xué)41條復(fù)檢規(guī)則”及國內(nèi)文獻(xiàn)［7-8］，制訂本院白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的復(fù)檢規(guī)則：白細(xì)胞小于或等于2×109／L，白細(xì)胞大于或等于20×109／L，無分類結(jié)果或分類結(jié)果不全，中性粒細(xì)胞比例首次大于或等于85%，淋巴細(xì)胞比例大于或等于60%，單核細(xì)胞比例大于或等于16%，嗜酸性粒細(xì)胞比例首次大于或等于15%，嗜堿性粒細(xì)胞比例首次大于或等于5%，細(xì)胞左移報(bào)警，原始細(xì)胞報(bào)警，不典型／異型淋巴細(xì)胞報(bào)警。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理以顯微鏡手工鏡檢法為標(biāo)準(zhǔn)，將CellaVision DM96系統(tǒng)對(duì)各類細(xì)胞直接分類（未校正）與經(jīng)過人工校正后分類（校正）的兩種數(shù)據(jù)采用微軟Office Excel 2007軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1 各類細(xì)胞的相關(guān)性結(jié)果用CellaVision DM96系統(tǒng)進(jìn)行自動(dòng)分類，中性分葉核粒細(xì)胞、中性桿狀核粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、異型淋巴細(xì)胞、早幼粒細(xì)胞、中幼粒細(xì)胞、晚幼粒細(xì)胞及原始細(xì)胞與顯微鏡鏡檢法的未校正及經(jīng)人工校正后相關(guān)系數(shù)見表1和圖1（以中性分葉核粒細(xì)胞為例）。

表1 各類細(xì)胞經(jīng)CellaVision DM96系統(tǒng)分類與手工鏡檢法的相關(guān)系數(shù)

圖1 中性分葉核粒細(xì)胞CellaVision DM96系統(tǒng)與手工鏡下分類計(jì)數(shù)方法的相關(guān)性

2.2 不成熟粒細(xì)胞的相關(guān)性結(jié)果將早幼粒細(xì)胞、中幼粒細(xì)胞和晚幼粒細(xì)胞合在一起稱為不成熟粒細(xì)胞后，用CellaVision DM96系統(tǒng)進(jìn)行自動(dòng)分類，與顯微鏡鏡檢法的相關(guān)系數(shù)為0.30，經(jīng)人工校正后，該相關(guān)系數(shù)為0.91，見圖2。

圖2 不成熟粒細(xì)胞經(jīng)CellaVision DM96系統(tǒng)與手工鏡下分類計(jì)數(shù)方法的相關(guān)性

3 討 論

LH750血液分析儀對(duì)白細(xì)胞分類采用獨(dú)特的VCS（容量、電導(dǎo)、光散射）原理，操作快捷、結(jié)果準(zhǔn)確、精度可靠，因此白細(xì)胞分類結(jié)果可以作為常規(guī)血液檢查的篩選手段［9］。但對(duì)于白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)在儀器法出現(xiàn)異常報(bào)警及達(dá)到復(fù)檢規(guī)則時(shí)，仍需通過血液涂片復(fù)檢進(jìn)行白細(xì)胞形態(tài)的觀察以及分類計(jì)數(shù)［10］。傳統(tǒng)的外周血涂片顯微鏡檢查方法不僅耗費(fèi)時(shí)間，而且無法實(shí)現(xiàn)血涂片檢查的自動(dòng)化。

本研究對(duì)CellaVision DM96自動(dòng)分類結(jié)果及操作者校正后的分類與在顯微鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞進(jìn)行了比較，儀器自動(dòng)分類與手工法相比，只有中性分葉核粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞具有較好的相關(guān)性（相關(guān)系數(shù)分別為0.87和0.79）；而操作者校正后分葉及桿狀核中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞均具有良好的相關(guān)性（相關(guān)系數(shù)均大于或等于0.93），這就意味著CellaVision DM96系統(tǒng)在中性分葉及桿狀核粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的鑒定方面與手工分類有相似的準(zhǔn)確性。嗜堿性粒細(xì)胞相關(guān)性較差，經(jīng)人工校正后相關(guān)系數(shù)為0.78。分析其原因可能與涂片的染色有關(guān)，一旦涂片染色較深，利用儀器分類可能將某些中性分葉核粒細(xì)胞誤判為嗜堿性粒細(xì)胞。對(duì)于單核細(xì)胞，眾所周知，血涂片這種方法會(huì)直接導(dǎo)致其呈現(xiàn)不均一性分布，選擇不同的觀察區(qū)域（CellaVision DM96系統(tǒng)與手工鏡檢法可能會(huì)有不同）及分析的細(xì)胞數(shù)目都可能導(dǎo)致單核細(xì)胞計(jì)數(shù)的差異。因此，經(jīng)過校正后單核細(xì)胞的相關(guān)系數(shù)也僅達(dá)到0.81。

除了上述五類細(xì)胞，對(duì)于異型淋巴細(xì)胞、早幼粒細(xì)胞、中幼粒細(xì)胞、晚幼粒細(xì)胞以及原始細(xì)胞等正常外周血中的少見細(xì)胞，CellaVision DM96系統(tǒng)與手工鏡檢法的相關(guān)系數(shù)較低，經(jīng)人工校正后，相關(guān)系數(shù)可分別達(dá)到0.84、0.87、0.90、0.84和0.91。分析其原因，可能是這幾類細(xì)胞計(jì)數(shù)較少的緣故。另外，對(duì)于不成熟粒細(xì)胞，還可能是由于將某些細(xì)胞計(jì)入了其前或后一階段細(xì)胞所致，例如可能將中幼粒細(xì)胞計(jì)數(shù)為晚幼粒細(xì)胞。當(dāng)將早幼粒細(xì)胞、中幼粒細(xì)胞及晚幼粒細(xì)胞合在一起稱為不成熟粒細(xì)胞后，用CellaVision DM96系統(tǒng)進(jìn)行分類，經(jīng)人工校正后，該相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.91，也從另一方面證實(shí)了這一點(diǎn)。

綜上所述，CellaVision DM96系統(tǒng)作為一種全自動(dòng)血細(xì)胞形態(tài)鑒定儀器，經(jīng)人工校正后外周血中常見的五類細(xì)胞與傳統(tǒng)鏡檢的金標(biāo)準(zhǔn)具有很好的相關(guān)性，能夠給臨床實(shí)驗(yàn)室提供準(zhǔn)確、可靠的白細(xì)胞分類數(shù)據(jù)，實(shí)現(xiàn)血涂片檢查的自動(dòng)化，適于臨床推廣應(yīng)用。

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