微柱凝膠法測(cè)ABO血型正反定型不符原因及處理

宋立娟 宋立晶 秦 軍

(寧夏回族自治區(qū)銀川市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 寧夏銀川 750001)

在使用微柱凝膠法(MGT)進(jìn)行日常ABO血型鑒定過程中，往往會(huì)碰到一些受抗原減弱、ABO亞型、冷凝集素、個(gè)體疾病等因素影響，導(dǎo)致血型正反鑒定不符和交叉配血困難，一旦血型定型失誤，將會(huì)發(fā)生嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng)，導(dǎo)致急性腎衰竭而危及患者生命，搶救不及時(shí)者可引起患者死亡。因此，在臨床上做好疑難血型鑒定至關(guān)重要。本科使用微柱凝膠法對(duì)2000余份血型標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，除技術(shù)和試劑管理因素的干擾以外，發(fā)現(xiàn)了24例正反定型不合的現(xiàn)象，經(jīng)整理后原因分析報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院2012年1月～12月對(duì)住院患者2000份標(biāo)本進(jìn)行ABO血型正、反定型檢測(cè)，其中發(fā)現(xiàn)的24例正反定型不符合的標(biāo)本。

1.2 試劑(上海血液生物醫(yī)藥有限公司);ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞(本科室制備);血型血清學(xué)卡式離心機(jī)(長春博研公司);血型血清學(xué)試管離心機(jī)(公司);孵育箱和離心機(jī)(達(dá)亞美公司)恒溫水浴箱(天津泰斯特公司)。

1.3 方法 正反定型、配血試驗(yàn)、抗體鑒定等檢測(cè)參照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》［1］和《臨床輸血診療技術(shù)》［2］。所有血型檢測(cè)標(biāo)本均按如下步驟進(jìn)行血型鑒定:第一次均采用微柱凝膠法進(jìn)行正反定型鑒定，如果沒有問題，發(fā)出血型報(bào)告;如果出現(xiàn)正反定型不符、對(duì)照孔陽性、凝集減弱等疑難情況，使用10%紅細(xì)胞懸液或增加受檢者血清/血漿量進(jìn)行鹽水凝集試管法檢測(cè)，并結(jié)合顯微鏡觀察凝集結(jié)果;如果還不能得出正確結(jié)論，將標(biāo)本和試劑混合后分別放入37℃水浴箱或4℃冰箱孵育30min，再離心觀察結(jié)果。同時(shí)，為排除自身抗體的影響，可用生理鹽水對(duì)標(biāo)本洗滌3次后再進(jìn)行檢測(cè)。所有疑難血型鑒定出來后，與同型獻(xiàn)血員標(biāo)本進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)，以主次側(cè)無凝集無溶血為準(zhǔn)，可以發(fā)出血型報(bào)告。

2 結(jié)果

應(yīng)用MGT法檢測(cè)患者ABO血型時(shí)，發(fā)現(xiàn)正反定型不一致的標(biāo)本共24例，患者血漿中含有纖維蛋白5例(20.83%);高效價(jià)冷凝集素2例(8.33%);血清蛋白異常增高3例(12.50%);紅細(xì)胞抗原減弱6例(25.00%);抗體缺失或減弱8例(33.34%)，見表1。

表1 MGT法檢測(cè)ABO血型正定型不一致的因素

3 討論

微柱凝膠免疫檢測(cè)(MGIA)即紅細(xì)胞抗原抗體在微柱腔凝膠介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見的凝集反應(yīng)。它是利用分子篩技術(shù)、離心技術(shù)和特異性的免疫反應(yīng)技術(shù)原理，把血型血清學(xué)技術(shù)與凝膠分子篩技術(shù)有機(jī)地結(jié)合起來，具有操作簡單、客觀，準(zhǔn)確度、靈敏度高的特點(diǎn)。雖然微柱凝膠檢測(cè)技術(shù)具有諸多優(yōu)點(diǎn)，但是由于其本質(zhì)是采用單克隆或多克隆抗體與紅細(xì)胞凝集進(jìn)行測(cè)定，抗原、抗體的強(qiáng)弱變化、新生兒抗體未形成、紅細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)改變、血液中不正常血清蛋白、異基因造血干細(xì)胞移植以及高效價(jià)冷凝集素(自身冷抗體)等，都可干擾MGT法測(cè)血型的結(jié)果，引起正反定型不一致，影響血型的正確判定。如果再加上微柱凝膠卡保存不當(dāng)，致使管內(nèi)液體減少，在患者紅細(xì)胞抗原或血清抗體明顯減弱情況下，抗原抗體來不及搭橋，造成假陰性［2］。由于鹽水凝集試管法可自由調(diào)節(jié)紅細(xì)胞濃度、血清/血漿使用量，正好彌補(bǔ)了微柱凝膠法這一技術(shù)的缺陷。微柱凝膠法初次檢測(cè)出現(xiàn)正反定型不一致的情況，加大受檢者紅細(xì)胞濃度或受檢者血清/血漿量，調(diào)整抗原抗體反應(yīng)比例至最適反應(yīng)比例后，結(jié)合鹽水凝集試管法，最終正確鑒定血型，表明血型抗原或抗體只是減弱或降低，并不是完全缺失。除了抗原和抗體減弱嚴(yán)重影響微柱凝膠法對(duì)血型的正確鑒定外，還有一個(gè)重要的因素是高冷凝集素的影響，高效價(jià)冷凝集素是患者體內(nèi)產(chǎn)生了抗自身紅細(xì)胞的嗜異性冷抗體。此抗體為IgM類，在體外4℃或室溫條件下可與自身紅細(xì)胞或ABO系統(tǒng)其他各個(gè)血型的紅細(xì)胞發(fā)生非特異性凝集反應(yīng)，不規(guī)則抗體可呈強(qiáng)陽性，在正反定型和交叉配血中可出現(xiàn)全凝集現(xiàn)象而易誤判血型。對(duì)此可采用37℃水浴箱加生理鹽水洗滌后，微柱凝膠法結(jié)合鹽水凝集試管法，做出正確判斷?？傊?，微柱凝膠法作為一種主流血型檢測(cè)方法，有其自身的優(yōu)點(diǎn)和不可替代性，鹽水凝集試管法作為一種傳統(tǒng)血型檢測(cè)方法，可作為微柱凝膠法的有益補(bǔ)充，兩者取長補(bǔ)短，相互結(jié)合，有助于臨床上更加準(zhǔn)確地鑒定疑難血型。

［1］楊世明，張勇萍，崔 穎.微柱凝膠法檢測(cè)疾病對(duì)ABO血型抗原的影響及血清學(xué)特性分析［J］.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2005，21(6):755

［2］林海芬，謝作聽，王春香.改良微柱凝膠法在鑒定ABO血型抗原明顯減弱者中應(yīng)用［J］.臨床輸血與檢驗(yàn)，2004，6(4):267