HPLC法測(cè)定鹽酸美沙酮口服溶液中鹽酸美沙酮的含量

嚴(yán)明娟 錢硯燕

1.云南省藥物依賴防治研究所；2.昆明振華制藥有限公司，云南昆明650000

鹽酸美沙酮（Methadone hydrochloride）屬于人工合成的二苯甲烷類麻醉性鎮(zhèn)痛藥之一，并且是當(dāng)今許多國(guó)家用于戒毒和維持療法的一種有效藥物[1-2]。在當(dāng)前，國(guó)內(nèi)對(duì)阿片類的成癮者主要采取鹽酸美沙酮口服溶液維持治療的方式。鹽酸美沙酮含量的測(cè)定選擇紫外分光光度法是以國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-514)-2003Z 為依據(jù)；而2010年版《中國(guó)藥典》（(二部）規(guī)定采用HPLC法測(cè)定鹽酸美沙酮口服溶液中鹽酸美沙酮的含量。各取4個(gè)批次比較兩者含量測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)表1，表2。

表1 紫外分光光度法測(cè)鹽酸美沙酮含量

表2 HPLC法測(cè)鹽酸美沙酮含量

試驗(yàn)結(jié)果表明：采用不同的方法測(cè)定，并不過(guò)大影響鹽酸美沙酮口服溶液中鹽酸美沙酮的含量。但HPLC法較紫外分光光度法卻有著簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的優(yōu)勢(shì)突出，比較適合推廣，因此建立了HPLC法測(cè)定鹽酸美沙酮口服溶液中鹽酸美沙酮的含量，該文結(jié)合該我所紫外分光光度法實(shí)踐，對(duì)HPLC法測(cè)定鹽酸美沙酮口服溶液中鹽酸美沙酮的含量進(jìn)行回顧分析。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

①紫外分光光度法儀器：紫外分光光度計(jì)（TU-1800，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；島津電子分析天平BT25S。②HPLC法儀器：島津C-R4A型數(shù)據(jù)處理機(jī)；島津LC-2010A型高效液相色譜儀。

1.2 試藥

由中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所提供鹽酸美沙酮對(duì)照品，符合藥典規(guī)格（含量:100.0%，批號(hào)：171243-200602）。

鹽酸美沙酮口服溶液：經(jīng)云南省藥物依賴防治研究所生產(chǎn)，批號(hào)（紫外分光光度法）：120401、120402、120403、120404、120405、120406、120407、120408、120409、120410；批號(hào)（HPLC法）：130401、130402、130403、130404、130405、130406、130407、130408、130409、130410。

規(guī)格為1 mL∶1 mg。優(yōu)級(jí)純的甲醇和純化水；別的試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 紫外分光光度法測(cè)定方法

測(cè)定以國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-514)-2003Z 為依據(jù)進(jìn)行，在353 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定所取對(duì)照品溶液、樣品溶液的吸光度。

2.2 HPLC法測(cè)定方法

測(cè)定以《中國(guó)藥典》2010年版(二部) 附錄V A 高效液相色譜譜法為依據(jù)進(jìn)行。

色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。Spherisorb C18 色譜柱 （5×200 mm，大連物化所）；流動(dòng)相：無(wú)水甲醇-四氫呋喃-水（24∶16∶60）；流速：0.6 mL/min；柱溫：25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：λ=270 nm；用2 mol/L磷酸或氫氧化鈉溶液作為流動(dòng)相調(diào)節(jié)pH 到6.0；靈敏度：0.02AUFS。定量方法：外標(biāo)峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線法。

含量測(cè)定方法。精密量取鹽酸美沙酮口服溶液10 μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)色譜圖進(jìn)行記錄；按外標(biāo)法計(jì)算峰面積，經(jīng)10次測(cè)定10批樣品，平均含量分別為101.69%，

100.45 %，104.50%，103.00%，99.00%，97.60%，100.20%，98.73%，100.12%，97.92%；并與國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-514)-2003Z 中紫外分光光度法的測(cè)定方法，運(yùn)用相關(guān)儀器進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，同樣測(cè)定了10次，其平均結(jié)果分別相應(yīng)為：99.28%，98.56%，98.83%，99.01%和100.45%，100.99%，99.37%，99.19%，99.10%，98.30%。

線性關(guān)系。把鹽酸美沙酮對(duì)照品25 mg 準(zhǔn)確稱取，溶解是加入甲醇后并對(duì)其進(jìn)行稀釋，按照25 mL 定容，進(jìn)行配置鹽酸美沙酮標(biāo)準(zhǔn)溶液的含量為1 mg/mL。將上述色譜作為分析標(biāo)準(zhǔn)，一一分析進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)溶液1、3、5、7、10、12 μl，并做記錄行色譜圖工作，測(cè)算各次的峰面積。鹽酸美沙酮含量X 為橫坐標(biāo)，峰面積Y 為縱坐標(biāo)，做線性回歸分析，鹽酸美沙酮的濃度在10～100 μg/mL 的范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系，線性方程為Y=2.2×102X+4.5×102，相關(guān)系數(shù)r=0.9998（n=6）。

試驗(yàn)回收率。先取30 mg 空白基質(zhì)，分別按6份精密稱定，再各自放入50 mL 量瓶之中，分別把對(duì)照品適量的鹽酸美沙酮精密加入并稱定，并加入流動(dòng)相溶解讓其含約相當(dāng)于樣品量的80%、100%、120%鹽酸美沙酮的量，測(cè)定以含量測(cè)定法為依據(jù)行，計(jì)算后獲得99.8%的平均回收率，0.85%的RSD。試驗(yàn)沒(méi)有受到空白基質(zhì)及溶劑的干擾，見(jiàn)表3。

表3 回收率試驗(yàn)

精密度試驗(yàn)。分別先取6份連續(xù)進(jìn)樣的鹽酸美沙酮對(duì)照溶液以及樣品溶液，在同一日內(nèi)完成日內(nèi)差試驗(yàn)測(cè)定，平均為0.57%（n=6）；測(cè)定日間差試驗(yàn)在連續(xù)5 d 內(nèi)進(jìn)行，平均為0.66%（n=6）。

重復(fù)性試驗(yàn)。6份溶液樣品做鹽酸美沙酮的連續(xù)測(cè)定，10 μL的進(jìn)樣，0.5%的RSD。

溶的穩(wěn)定性試驗(yàn)。在室溫下取對(duì)照溶液及樣品溶液放置24 h，接著每隔1 h 進(jìn)樣10 μL，測(cè)定其峰面積，得出對(duì)照溶液及樣品品溶液峰面積穩(wěn)定性比較好，1.0%RSD。

3 討論

鹽酸美沙酮作為常用的一種麻醉性鎮(zhèn)痛臨床藥物，當(dāng)前已經(jīng)其為被很多國(guó)家用于有效進(jìn)行戒毒和維持療法的一種藥物。屬于二苯基甲烷類的美沙酮，也屬于阿片受體激動(dòng)劑之一，能在中樞μ 和阿片受體產(chǎn)生激活，同時(shí)也能非競(jìng)爭(zhēng)性拮抗NMDA 受體。對(duì)于人體能夠產(chǎn)生包括鎮(zhèn)痛、縮瞳、呼吸抑制、抗利尿等一系列藥理作用效應(yīng)的美沙酮。所組成的由左旋和右旋異構(gòu)體混合的消旋體基本都是臨床所用的美沙酮。左旋體幾乎成為其鎮(zhèn)痛作用的主要來(lái)源，而阿片受體則主要對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生作用。在美沙酮與μ 受體的兩者之間的親和力極強(qiáng)。

在研究結(jié)果中，筆者還發(fā)現(xiàn)，美沙酮這一受體拮抗劑是屬于非競(jìng)爭(zhēng)性的，通過(guò)拮抗NMDA 受體還可以產(chǎn)生一種鎮(zhèn)痛效果。口服鹽酸美沙酮后能完全吸收，有著比較大的脂溶性，能高度結(jié)合血漿蛋白（85%），也能很好的與α 酸性糖蛋白融合，遍布于體內(nèi)，特別是肝、脾臟、肺和腎等部位。利用度高的生物（90%），與3倍的嗎啡的大體相當(dāng)[3]。血藥濃度峰值由于胃腸道給藥3 h 而達(dá)到，其能能維持2～6 h 的血峰濃度。15 h 的t1/2，經(jīng)過(guò)口服后鎮(zhèn)痛作用能有效發(fā)揮，并能發(fā)揮24～32 h 的抑制戒斷癥狀作用。0.48～0.86 mg/L 為治療的血液質(zhì)量濃度，2 mg/L 為中毒的血液質(zhì)量濃度，致死血液有著>4 mg/L 的質(zhì)量濃度[4-5]。在肝臟進(jìn)行代謝活動(dòng)，其中藥量沒(méi)發(fā)生變化的比服入量要少于0%可以從尿中和大便中排出來(lái)。選用甲醇-水系統(tǒng)作為流動(dòng)相來(lái)進(jìn)行鹽酸美沙酮口服液中鹽酸美沙酮含量的測(cè)定，對(duì)于色譜柱的使用壽命的延長(zhǎng)有利，實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)也可節(jié)約，從pH值在5.0～7.0 穩(wěn)定來(lái)考慮，因而調(diào)節(jié)pH值為6.0。

按國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-514)-2003Z 中紫外分光光度法進(jìn)行鹽酸美沙酮含量的測(cè)定，存在一定的不足。《中國(guó)藥典》2010年版(二部)采用HPLC法測(cè)定鹽酸美沙酮的含量。在該研究中用HPLC法對(duì)鹽酸美沙酮口服溶液中的鹽酸美沙酮的含量進(jìn)行測(cè)定，其結(jié)果證明這一方法建起的HPLC法不僅非常準(zhǔn)確靈敏、操作不復(fù)雜，而且有著很高的回收率，是比較好的質(zhì)量控制鹽酸美沙酮口服液的方法。

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