桂枝甘草湯“辛甘化陽”配伍對低溫環(huán)境大鼠能量代謝的影響*

姚鳳云，王炳志，彭淑紅，王 馨，左錚云

(江西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，江西南昌330004)

配伍是方劑“活的靈魂”，方劑配伍原理探究是方劑研究的核心［1］。辛甘化陽是方劑性味配伍中五味配伍法之一，亦稱辛甘助陽或辛甘扶陽。該配伍理論的淵源要追溯到《內(nèi)經(jīng)》時代，《素問·至真要大論》在闡述藥物性味時指出“辛甘發(fā)散為陽”。金代醫(yī)家成無己在《注解傷寒論》中首先提出“辛甘化陽”的概念。醫(yī)圣張仲景擅用此法，《傷寒論》作為一部以治療狹義傷寒證為主的經(jīng)典著作，辛甘化陽思想貫穿其始末［2］，而其中最具代表性的方劑當(dāng)推桂枝甘草湯。故筆者以桂枝甘草湯為研究對象，從能量代謝角度對“辛甘”配伍“化陽”的原理與內(nèi)涵進(jìn)行探討，為方劑性味配伍原理研究提供新的思路，為繼承和發(fā)揚(yáng)“辛甘化陽”配伍理論，指導(dǎo)臨床合理運(yùn)用桂枝甘草湯“辛甘化陽”配伍治療心陽虛證提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動 物

SFP級 SD雄性大鼠，44～47日齡，體質(zhì)量(200±20)g，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司，許可證號:SCXK(湘)2011－0003。

1.2 藥品、試劑與儀器

桂枝甘草湯由桂枝12 g、甘草6 g組成，藥材購自北京同仁堂(亳州)飲片有限公司，產(chǎn)地分別是廣西、內(nèi)蒙古，批號分別為30110387，301133667。

總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、葡萄糖(GLU)試劑盒，均由中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)，批號分別 121471，125811，123001;胰島素(INS)、胰高血糖素(GC)、三點(diǎn)甲狀腺原氨酸(T3)Elisa試劑盒，均由武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司生產(chǎn)，批號分別為 L131113353、L131029673、L131018386。RXZ智能型人工氣候箱，寧波江南儀器廠產(chǎn)品;Sysmex CHEMIX－180全自動生化分析儀，日本制造;CT14RD型低溫冷凍離心機(jī)，上海天美生化儀器設(shè)備工程有限公司產(chǎn)品;Chromate 4300酶標(biāo)儀，美國Awareness公司產(chǎn)品。

1.3 藥物制備方法

參照《傷寒論》原文桂枝甘草湯煎煮方法并加以改進(jìn)。各組藥材分別加10倍量水，浸泡30 min，煎煮2次，每次40 min，合并2次濾液，濃縮至1∶1液(即1 g生藥/mL藥液)，放置4℃冰箱，備用。

1.4 動物分組

大鼠常溫(23±2)℃飼養(yǎng)1周后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為空白對照組、桂枝甘草湯組、單味桂枝12 g組、單味甘草6 g組4組，每組20只。

1.5 飼養(yǎng)環(huán)境

動物分組后，除給藥時間外，均放置于人工氣候箱飼養(yǎng)。儀器條件設(shè)置:白天6℃、濕度55%，夜晚4℃、濕度66%，晝夜交替光照，24 h為1個循環(huán)。

1.6 給藥方法

各組動物均放置于以上環(huán)境條件飼養(yǎng)，并于每天下午灌胃給予相應(yīng)的藥物，給藥劑量見表1，給藥體積10μL/g，空白對照組給予等體積的純凈水，并記錄每只老鼠日平均攝食量，每3天稱量動物體質(zhì)量1次。

1.7 檢測指標(biāo)

于低溫飼養(yǎng)第15天、30天，每組各處理10只動物。具體方法:于給藥后50 min，氨基甲酸乙酯(1 g/kg)麻醉，仰臥固定，打開腹腔，自腹主動脈采血6～8 mL，室溫靜置30 min，放置于低溫離心機(jī)，4℃、4 000 r/min離心10 min，分離血清檢測 TC、TG、GLU、INS、GC、T3含量。動物處理前禁食但不禁水14 h。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

桂枝甘草湯及其拆方對低溫環(huán)境大鼠血清TC含量、TG含量、GLU水平、INS水平和T3含量的影響，見表1。

各組大鼠血清TC含量隨飼養(yǎng)時間延長呈遞減趨勢，其中桂枝甘草湯組和桂枝12 g組下降幅度尤為明顯，與同組15 d時對比，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)。

給藥15 d時，給藥組大鼠血清TG水平均呈現(xiàn)下降趨勢，其中甘草6 g組與空白對照組對比，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。持續(xù)飼養(yǎng)30 d時，除甘草6 g組外，其他各組大鼠血清TG水平均低于同組15 d水平，其中空白對照組和桂枝甘草湯組較之差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05或 P ＜0.01)。

各組大鼠GLU含量隨飼養(yǎng)時間延長均呈遞增趨勢，各組30 d的GLU含量與同組15 d對比，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。給藥15 d時，桂枝甘草湯組和甘草6 g組大鼠GLU水平較空白對照組均呈現(xiàn)增高趨勢，其中甘草6 g組較之差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。持續(xù)飼養(yǎng)30 d時，各組血糖繼續(xù)增高，桂枝甘草湯組和甘草6 g組的GLU含量均高于空白對照組(P＜0.05)。

給藥15 d時，各給藥組大鼠血清INS含量均高于空白對照組，其中甘草6 g組較之差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。持續(xù)飼養(yǎng)30 d時，各組大鼠血清INS均低于同組15 d水平，其中桂枝甘草湯組INS水平低于30 d時空白對照組，但差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05)。

給藥15 d時，桂枝甘草湯組和桂枝12 g組動物血清GC含量均低于同期空白對照組，其中桂枝12 g組較之差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。隨著飼養(yǎng)時間的延長，除甘草6 g組外，其余各組大鼠血清GC水平均呈現(xiàn)反彈式遞增，其中桂枝甘草湯組、桂枝12 g組與同組15 d組對比，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.01或 P ＜0.05)，桂枝甘草湯組水平接近同期空白對照組。

給藥15 d時，桂枝12 g組血清T3含量顯著高于同期空白對照組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義，(P＜0.05)。給藥30 d時，各組血清T3含量均高于同組15 d水平，其中空白對照組、桂枝甘草湯組和甘草6 g組升高幅度尤為突出，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);各給藥組T3含量又均低于同期空白對照組，其中桂枝甘草湯組較之差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

表1 各組大鼠血清TC、TG、GLU含量對比 n=10，±s

表1 各組大鼠血清TC、TG、GLU含量對比 n=10，±s

注:與同期空白對照組對比，*P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01;與同組15 d對比，#P＜0.05，##P＜0.01。

組 別 給藥劑量/(g·kg－1)TC/(mmol·L －1)TG/(mmol·L －1)GLU/(mmol·L －1)15 d 30 d空白對照組 － 2.566±0.239 2.351±0.426 0.445±0.279 0.240±0.094# 5.061±0.794 6.034±0.741 15 d 30 d 15 d 30 d##桂枝甘草湯組 1.62 2.512 ±0.391 2.241 ±0.261# 0.370 ±0.143 0.239 ±0.08## 5.507 ±0.935 7.031 ±0.532*##桂枝 12 g 組 1.08 2.583 ±0.472 2.134 ±0.238# 0.322 ±0.128 0.218 ±0.141 4.833 ±0.493 6.345 ± 1.08##甘草 6 g 組 0.54 2.436 ±0.312 2.334 ±0.225 0.278 ±0.061* 0.281 ±0.062 5.904 ±1.014* 7.117 ± 1.186*#

續(xù)表各組大鼠血清 INS、GC、T3含量對比 n=10±s

續(xù)表各組大鼠血清 INS、GC、T3含量對比 n=10±s

注:與同期空白對照組對比，*P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01;與同組15 d對比，#P＜0.05，##P＜0.01。

組 別 給藥劑量/(g·kg－1)INS/(ng·L－1)GC/(ng·L－1)T3/(ng·L －1)15 d 30 d空白對照組 － 156.21±52.25 156.7±40.27 22.18±7.14 27.92±6.64 762.23±457.59 1603.79±243.74 15 d 30 d 15 d 30 d##桂枝甘草湯組 1.62 198.22 ±81.38 154.1 ±34.88 18.78 ±9.31 27.78 ±4.75## 686.89 ±249.62 1172.98 ±380.88*##桂枝12 g組 1.08 183.84 ±46.45 160.38 ±40.41 15.65 ±5.37* 22.25 ±8.74# 1336.24 ±770.55* 1473.54 ±243.37甘草6 g組 0.54 203.87 ±29.07* 195.86 ±66.41 24.05 ±8.01 23.79 ±6.78 888.08 ±197.13 1434.23 ±365.79##

3 討論

桂枝甘草湯出自于《傷寒論》，原文第64條:“發(fā)汗過多，其人叉手自冒心，心下悸，欲得按者，桂枝甘草湯主之?！痹摲接晒鹬Α⒏什輧晌端幬锝M成，方中桂枝四兩，辛甘性溫，入心而助陽，為君藥;甘草二兩，甘溫入脾而補(bǔ)中益氣，為臣佐藥。二藥相伍，辛甘和化，共奏溫通心陽之效［3］。臨床常用該方加減治療冠心病、心力衰竭等心血管疾病屬心陽虛證者［4－5］，是張仲景“辛甘化陽”配伍的代表方劑。所謂“辛甘化陽”，是指由辛味藥和甘味藥相合，以化生或資助“陽氣”的一種配伍方法，又稱“辛甘助陽”或“辛甘扶陽”［2，6］。此處的“陽氣”即五臟陰陽精氣理論所指的具有溫煦、推動、興奮等作用的氣，是人體生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)，是影響人體生命健康的關(guān)鍵，是生命的動力和源泉”，正如《素問·生氣通天論》所云:“陽氣者，若天與日，失其所則折壽而不彰?！保?］現(xiàn)代醫(yī)學(xué)則提出“能量”是生命的動力，線粒體作為能量轉(zhuǎn)換的主要場所，能為人體提供95%以上的能量，被譽(yù)為“生命動力工廠”，是人體生命活力的重要體現(xiàn)者［8］。故筆者將中醫(yī)“陽氣”與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)“能量”聯(lián)系起來，從能量代謝角度探討桂枝甘草湯“辛甘化陽”配伍的原理與內(nèi)涵。INS是由胰島β細(xì)胞受內(nèi)源性或外源性物質(zhì)如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一種蛋白質(zhì)激素，具有調(diào)節(jié)代謝過程的功能，是機(jī)體內(nèi)唯一降低血糖的激素，也是唯一同時促進(jìn)糖原、脂肪、蛋白質(zhì)合成的激素。GC是一種由胰島α－細(xì)胞分泌的激素，與INS的作用相反，是一種促進(jìn)分解代謝的激素，能促進(jìn)糖原分解和糖異生作用，使血糖明顯升高，也可促進(jìn)胰島素和胰島生長抑素的分泌［9］。T3是由甲狀腺濾泡細(xì)胞合成及分泌的激素，是甲狀腺激素中最主要的活性物質(zhì)，具有控制甲狀腺激素代謝的重要作用，而甲狀腺激素能調(diào)節(jié)線粒體能量代謝，加速糖和脂肪代謝，特別是促進(jìn)許多組織糖、脂肪及蛋白質(zhì)的分解氧化過程，使機(jī)體的耗氧量和產(chǎn)熱量增加［10－11］。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:溫度對大鼠血清TC、TG、GLU、INS、T3、GC等指標(biāo)的代謝有一定的影響，在4～6℃低溫環(huán)境下，隨飼養(yǎng)時間的延長，TC、TG水平呈下降趨勢，而GLU、T3、GC水平則呈增高態(tài)勢。桂枝甘草湯對以上指標(biāo)的代謝在同等溫度條件有一定的干預(yù)作用，隨著給藥時間的延長，可降低大鼠血清TC、TG、INS、T3水平，其中對 T3的影響最為顯著;可增高GLU、GC含量，并且其作用是通過桂枝、甘草配伍共同實(shí)現(xiàn)的。綜上所述，桂枝甘草湯“辛甘化陽”配伍原理的內(nèi)涵與線粒體能量代謝有關(guān)，其中隨給藥時間延長，對血清T3、GLU、GC含量影響最為顯著。

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