可見分光光度法測定惠州梅菜中亞硝酸鹽含量的方法

吳云普　梁曉文　潘錦秀　彭少娜　鐘程　曾柏榮

摘 要：通過對國標(biāo)《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》（GB/T 5009.33—2010）第二法進(jìn)行研究和優(yōu)化，建立了惠州梅菜中亞硝酸鹽的檢測方法。研究表明：亞硝酸鹽含量x（μg）與吸光度A在538 nm處具有良好的線性關(guān)系，在亞硝酸鹽的量為0～10 μg·（50 mL）-1水溶液中，服從Beer定律， y = 46.708x-0.024，相關(guān)系數(shù)為0.999 9。蛋白質(zhì)沉淀劑的使用量對惠州梅菜中亞硝酸鹽含量測定有一定影響，添加量為2～3.5 mL時，回收率在98.8%～103%之間，回收效率較理想。沉淀劑添加量為2.5 mL時，進(jìn)行方法加標(biāo)回收試驗，平均加標(biāo)回收率在98.8%～98.9%之間，RSD在1.03%～4.70%之間。

關(guān)鍵詞：惠州梅菜；亞硝酸鹽；分光光度法

中圖分類號：S636.9 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2014.12.004

梅菜是惠州市八大特色產(chǎn)品之一，在惠州已有近400年的種植歷史，歷史上作為宮廷食品而被稱為“惠州貢菜”。目前惠州市有近30個鄉(xiāng)鎮(zhèn)種植梅菜，總產(chǎn)量大于75 000 t，年產(chǎn)值已達(dá)2億元。梅菜更成為惠州多個鄉(xiāng)鎮(zhèn)如矮陂鎮(zhèn)的“一鎮(zhèn)一業(yè)”的特色品種?；葜菝凡耸且环N著名的廣東傳統(tǒng)腌制蔬菜食品，蔬菜易富集硝酸鹽，在腌制過程中，由于有害微生物及硝酸還原酶的作用，硝酸鹽會轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽，人攝入后，亞硝酸能和人胃中的含氮化合物（仲胺、叔胺、酰胺及氨基酸）結(jié)合成具致癌性的亞硝基化合物[1]。

目前，食品中亞硝酸鹽的檢測方法主要有分光光度法[2-5]、熒光光度法[6]、動力學(xué)光度法[7]、離子色譜法[8]、高效液相色譜法[9]等。在這幾種方法中，分光光度法因儀器設(shè)備簡單、價廉、操作簡單，而被許多試驗采用。通常以GB/T 5009.33—2010《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》第二法作為參考進(jìn)行測定，利用亞硝酸鹽重氮化后與鹽酸萘乙二胺生成紫紅色偶氮染料，顏色的深淺與亞硝酸含量成正比（符合朗伯比爾定律），可用分光光度計直接進(jìn)行比色測定。本試驗對分光光度法測定惠州梅菜中亞硝酸鹽的含量進(jìn)行了優(yōu)化研究。

1 材料和方法

1.1 原材料

測定用梅菜樣品購自惠州本地市場。

1.2 試驗試劑

200 μg·mL-1亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，5 μg·mL-1亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，106 g·L-1亞鐵氰化鉀溶液，220 g·L-1乙酸鋅溶液，50 g·L-1飽和硼酸溶液，4 g·L-1對氨基苯磺酸溶液，2 g·L-1鹽酸萘乙二胺溶液。

1.3 儀器設(shè)備

紫外/可見分光光度計，上海美譜達(dá)儀器有限公司；TE412-L電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司。

1.4 試驗方法

1.4.1 樣品預(yù)處理 用組織搗碎機(jī)把梅菜制成勻漿備用。

1.4.2 提取凈化 稱取5 g（精確到0.01 g）制成勻漿的試樣，置于50 mL燒杯中，加入12.5 mL飽和硼砂溶液，攪拌均勻，用約250 mL的70 ℃水將試樣吸入500 mL的容量瓶中，放置10 min提取，然后振蕩上述溶液，加入一定量的亞鐵氰化鉀溶液、搖勻，再加入相同量的乙酸鋅溶液，以沉淀蛋白質(zhì)，加水至刻度后搖勻、放置30 min，用濾紙過濾，棄去初濾液30 mL，濾液備用。

1.4.3 亞硝酸鹽的測定 吸取40.0 mL上述濾液于50 mL帶塞比色管中，另吸取0.00，0.08，0.16， 0.24，0.32，0.64，1.0，1.5，2.0 mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于0.0，0.4，0.8，1.2，1.6，3.2，5.0，7.5， 10.0 μg亞硝酸鈉），分別置于50 mL帶塞比色管中。于標(biāo)準(zhǔn)管與試樣管中分別加入2 mL對氨基苯磺酸溶液混勻，靜置3～5 min后各加入1 mL鹽酸萘乙二胺溶液，加水至50 mL刻度線，混勻，靜置15 min。用1 cm比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長538 nm處測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較、定量。同時做試劑空白。

2 結(jié)果與分析

2.1 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線

亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液所測得的吸光度如表1。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)亞硝酸鈉含量及吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從圖1可以看出，亞硝酸鈉含量與吸光度的線性關(guān)系很好，相關(guān)系數(shù)達(dá)到了0.999 9，直線方程為y = 46.708x-0.024，其中x為亞硝酸鹽的量（μg），y為吸光度A。

2.2 樣品測定條件的選擇

GB 5009.33—2010方法中加入蛋白質(zhì)沉淀劑為：5 mL亞鐵氰化鉀溶液和5 mL乙酸鋅溶液。本試驗對蛋白質(zhì)沉淀劑的加入量進(jìn)行優(yōu)化，分別以蛋白質(zhì)沉淀劑的量為0，1，2，2.5，3.5，5 mL進(jìn)行平行及加標(biāo)回收試驗，測定的亞硝酸鹽含量如表2。

由表2可見，加入不同量的蛋白質(zhì)沉淀劑，所測得的亞硝酸鹽的含量不同，樣品中測得值都小于檢出限1 mg·kg-1，添加回收率結(jié)果也不同，添加量為2～3.5 mL時，回收率在98.8%～103%之間，回收效率比較理想。沉淀劑的量增加到5 mL時，回收率反而下降。

2.3 方法加標(biāo)回收試驗

按照1.4.2介紹的試驗方法，蛋白質(zhì)沉淀劑的量為2.5 mL，為進(jìn)一步驗證方法的可靠性，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗，選取3個濃度，分別為1.0、10.0、20.0 mg·kg-1，按相同的方法和條件平行測定10次。由表3可知，3個濃度點(diǎn)的加標(biāo)平均回收率在98.8%～98.9%之間，RSD在1.03%～4.70%之間，這說明方法具有較好的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性。

2.4 惠州梅菜中亞硝酸鹽含量測定

按照1.4.2介紹的試驗方法，蛋白質(zhì)沉淀劑的量為2.5 mL，對惠州梅菜樣品進(jìn)行平行測定3次，取得算術(shù)平均值。以我國國標(biāo)食品中污染物限量中規(guī)定腌制蔬菜中亞硝酸鹽的含量（以NaNO2）不得超過20 mg·kg-1 [10]計，由表4可知，本實驗室所收集的10份惠州梅菜樣品均未超標(biāo)，可以放心食用。

3 結(jié) 論

本試驗通過對國標(biāo)《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》（GB/T 5009.33—2010）第二法進(jìn)行優(yōu)化發(fā)現(xiàn)，加入不同量的蛋白質(zhì)沉淀劑對梅菜中亞硝酸鹽的檢測結(jié)果有一定影響，蛋白質(zhì)沉淀劑添加量為2.5 mL時，回收率在98.8%～98.9%之間，RSD在1.03%～4.70%之間，方法的加標(biāo)回收試驗效果較好。本試驗確立了惠州梅菜中亞硝酸鹽含量的檢測方法，該方法操作簡單、快速、精密度好，樣品處理簡單易行，可在惠州地區(qū)對梅菜中亞硝酸鹽含量測定中推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

[1] 彭衛(wèi)芳，凌志明，王學(xué)濤，等.亞硝酸鹽測定方法的研究進(jìn)展[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2007，17（8）：1535-1536.

[2] 郝桂霞，楊曉斌.潮州醬腌菜中硝酸鹽及亞硝酸鹽含量的測定[J].現(xiàn)代食品科技，2007，23（7）：86-88.

[3] 鄭澤璇，鄭澤紅，陳樹干，等. 深圳市羅湖區(qū)市售鹽腌菜中亞硝酸鹽含量分析[J]. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2006，33（6）：987-988.

[4] 劉廣福，王碩，孫蕊，等. 分光光度法同時測定肉制品中的硝酸鹽和亞硝酸鹽[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（20）：8 706-8 707，8 781.

[5] 周秀清，黃明華. 蛋白質(zhì)沉淀劑用量對亞硝酸鹽含量測定的影響[J]. 鹽業(yè)與化工，2013，42（4）：9-11.

[6] 黃克靖，孫俊永，吳瑩瑩.熒光光度法結(jié)合固相萃取測定亞硝酸鹽[J].信陽師范學(xué)院學(xué)報：自然科學(xué)版，2012 ，25（1）：99-102.

[7] 邢建華，信建豪，張守仁，等.催化動力學(xué)光度法測定肉制品中痕量亞硝酸鹽[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，52 （21）：5311-5313.

[8] 王碩，劉廣福，孫蕊，等.離子色譜法測定肉制品中的硝酸鹽和亞硝酸鹽[J].食品科技，2014，19（2）：302-305.

[9] 張秋菊，崔世勇，姜麗華，等.反相高效液相色譜法同時測定醬腌菜中亞硝酸鹽和硝酸鹽[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志， 2008，18（7）：1304-1305，1323.

[10] 中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 2762—2012 食品中污染物限量[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012.

[11] 中華人民共和國衛(wèi)生部.GB/T 5009.33—2010 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.

3 結(jié) 論

本試驗通過對國標(biāo)《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》（GB/T 5009.33—2010）第二法進(jìn)行優(yōu)化發(fā)現(xiàn)，加入不同量的蛋白質(zhì)沉淀劑對梅菜中亞硝酸鹽的檢測結(jié)果有一定影響，蛋白質(zhì)沉淀劑添加量為2.5 mL時，回收率在98.8%～98.9%之間，RSD在1.03%～4.70%之間，方法的加標(biāo)回收試驗效果較好。本試驗確立了惠州梅菜中亞硝酸鹽含量的檢測方法，該方法操作簡單、快速、精密度好，樣品處理簡單易行，可在惠州地區(qū)對梅菜中亞硝酸鹽含量測定中推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

[1] 彭衛(wèi)芳，凌志明，王學(xué)濤，等.亞硝酸鹽測定方法的研究進(jìn)展[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2007，17（8）：1535-1536.

[2] 郝桂霞，楊曉斌.潮州醬腌菜中硝酸鹽及亞硝酸鹽含量的測定[J].現(xiàn)代食品科技，2007，23（7）：86-88.

[3] 鄭澤璇，鄭澤紅，陳樹干，等. 深圳市羅湖區(qū)市售鹽腌菜中亞硝酸鹽含量分析[J]. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2006，33（6）：987-988.

[4] 劉廣福，王碩，孫蕊，等. 分光光度法同時測定肉制品中的硝酸鹽和亞硝酸鹽[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（20）：8 706-8 707，8 781.

[5] 周秀清，黃明華. 蛋白質(zhì)沉淀劑用量對亞硝酸鹽含量測定的影響[J]. 鹽業(yè)與化工，2013，42（4）：9-11.

[6] 黃克靖，孫俊永，吳瑩瑩.熒光光度法結(jié)合固相萃取測定亞硝酸鹽[J].信陽師范學(xué)院學(xué)報：自然科學(xué)版，2012 ，25（1）：99-102.

[7] 邢建華，信建豪，張守仁，等.催化動力學(xué)光度法測定肉制品中痕量亞硝酸鹽[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，52 （21）：5311-5313.

[8] 王碩，劉廣福，孫蕊，等.離子色譜法測定肉制品中的硝酸鹽和亞硝酸鹽[J].食品科技，2014，19（2）：302-305.

[9] 張秋菊，崔世勇，姜麗華，等.反相高效液相色譜法同時測定醬腌菜中亞硝酸鹽和硝酸鹽[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志， 2008，18（7）：1304-1305，1323.

[10] 中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 2762—2012 食品中污染物限量[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012.

[11] 中華人民共和國衛(wèi)生部.GB/T 5009.33—2010 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.

3 結(jié) 論

本試驗通過對國標(biāo)《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》（GB/T 5009.33—2010）第二法進(jìn)行優(yōu)化發(fā)現(xiàn)，加入不同量的蛋白質(zhì)沉淀劑對梅菜中亞硝酸鹽的檢測結(jié)果有一定影響，蛋白質(zhì)沉淀劑添加量為2.5 mL時，回收率在98.8%～98.9%之間，RSD在1.03%～4.70%之間，方法的加標(biāo)回收試驗效果較好。本試驗確立了惠州梅菜中亞硝酸鹽含量的檢測方法，該方法操作簡單、快速、精密度好，樣品處理簡單易行，可在惠州地區(qū)對梅菜中亞硝酸鹽含量測定中推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

[1] 彭衛(wèi)芳，凌志明，王學(xué)濤，等.亞硝酸鹽測定方法的研究進(jìn)展[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2007，17（8）：1535-1536.

[2] 郝桂霞，楊曉斌.潮州醬腌菜中硝酸鹽及亞硝酸鹽含量的測定[J].現(xiàn)代食品科技，2007，23（7）：86-88.

[3] 鄭澤璇，鄭澤紅，陳樹干，等. 深圳市羅湖區(qū)市售鹽腌菜中亞硝酸鹽含量分析[J]. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2006，33（6）：987-988.

[4] 劉廣福，王碩，孫蕊，等. 分光光度法同時測定肉制品中的硝酸鹽和亞硝酸鹽[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（20）：8 706-8 707，8 781.

[5] 周秀清，黃明華. 蛋白質(zhì)沉淀劑用量對亞硝酸鹽含量測定的影響[J]. 鹽業(yè)與化工，2013，42（4）：9-11.

[6] 黃克靖，孫俊永，吳瑩瑩.熒光光度法結(jié)合固相萃取測定亞硝酸鹽[J].信陽師范學(xué)院學(xué)報：自然科學(xué)版，2012 ，25（1）：99-102.

[7] 邢建華，信建豪，張守仁，等.催化動力學(xué)光度法測定肉制品中痕量亞硝酸鹽[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，52 （21）：5311-5313.

[8] 王碩，劉廣福，孫蕊，等.離子色譜法測定肉制品中的硝酸鹽和亞硝酸鹽[J].食品科技，2014，19（2）：302-305.

[9] 張秋菊，崔世勇，姜麗華，等.反相高效液相色譜法同時測定醬腌菜中亞硝酸鹽和硝酸鹽[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志， 2008，18（7）：1304-1305，1323.

[10] 中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 2762—2012 食品中污染物限量[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012.

[11] 中華人民共和國衛(wèi)生部.GB/T 5009.33—2010 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.