紅細(xì)胞冷凝集對(duì)血細(xì)胞分析檢驗(yàn)的影響及處理方法

孫建偉

遼寧省撫順礦務(wù)局總醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧撫順 113008

血細(xì)胞分析儀是臨床實(shí)驗(yàn)室檢查常用的檢驗(yàn)儀器之一，血細(xì)胞分析結(jié)果的質(zhì)量直接關(guān)系到對(duì)病人的診斷和分析，但在血常規(guī)的日常檢測(cè)中經(jīng)常會(huì)遇到很多影響因素，例如：血小板假性減少癥，紅細(xì)胞凝集(冷凝集)，脂血/溶血，有核紅細(xì)胞，白細(xì)胞增多，瘧疾，采樣、抗凝不當(dāng)?shù)?。因此，在血常?guī)的檢測(cè)過程中做好質(zhì)量控制是至關(guān)重要的。在血細(xì)胞分析中我們發(fā)現(xiàn)有些患者的紅細(xì)胞極容易發(fā)生凝集，使RBC、 HCT 假性降低，MCV、MCH、MCHC 假性升高。造成血常規(guī)的檢驗(yàn)結(jié)果不正常，對(duì)臨床做出錯(cuò)誤的引導(dǎo)。為了及時(shí)發(fā)現(xiàn)和準(zhǔn)確排除紅細(xì)胞冷凝集對(duì)血細(xì)胞分析儀的影響，該實(shí)驗(yàn)選擇了從2013年1月—2014年5月共20例紅細(xì)胞冷凝集的標(biāo)本在3 種不同條件下檢測(cè): ①普通室溫（20℃）；②37 ℃水浴30 min 后立即檢測(cè)；③25 ℃條件下37 ℃水浴30 min 后立即檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 儀器與試劑日本Sysmex 公司生產(chǎn)的XE-5000 全自動(dòng)血液分析儀及配套原裝試劑、日本奧林巴斯光學(xué)株式會(huì)社生產(chǎn)的雙筒顯微鏡。原廠配套正常濃度和高濃度質(zhì)控品。

1.1.2 標(biāo)本 從2013年1月—2014年5月?lián)犴樀V務(wù)局醫(yī)院住院患者血常規(guī)標(biāo)本中，通過鏡檢篩選出20例紅細(xì)胞冷凝集標(biāo)本。所有標(biāo)本均按常規(guī)全血細(xì)胞檢測(cè)，血細(xì)胞分析儀每半年校準(zhǔn)一次。每日測(cè)定正常濃度和高濃度2 個(gè)濃度的質(zhì)控品，結(jié)果均在控。標(biāo)本通過靜脈采血2 mL，加入EDTA-K2 抗凝的真空管內(nèi)，輕輕地顛倒混勻。于采集后4 h 內(nèi)，在XE-5000 全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)完畢。其中男性12 人，女性8 人。其中包括肺炎支原體10例，傳染性單核細(xì)胞增多癥3例，多發(fā)性骨髓瘤2例，肺癌1例，白血病2例，惡性淋巴瘤2例。

1.2 方法

將20例紅細(xì)胞冷凝集的標(biāo)本采用不同的方法處理后，在日本Sysmex 公司生產(chǎn)的XE-5000 全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)。血液分析儀所使用的試劑為原廠配套。顯微鏡為日本奧林巴斯光學(xué)株式會(huì)社生產(chǎn)。瑞士吉姆薩染液由貝索生物技術(shù)公司提供。①普通室溫(20 ℃)； ②37 ℃水浴30 min; ③25 ℃條件下，37 ℃水浴30 min。記錄3 種不同條件下紅細(xì)胞﹑紅細(xì)胞壓積、血紅蛋白﹑紅細(xì)胞各項(xiàng)參數(shù)﹑白細(xì)胞﹑血小板的值。該儀器以半導(dǎo)體激光器流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)合熒光染色技術(shù)檢測(cè)白細(xì)胞，電阻抗法測(cè)定紅細(xì)胞和血小板，比色法測(cè)定血紅蛋白。以上3 種方法檢測(cè)的同時(shí)觀察管壁紅細(xì)胞聚集的情況，檢測(cè)各推兩張血涂片，瑞士吉姆薩染色，雙筒顯微鏡鏡檢。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

使用SPSS17.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t 檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

紅細(xì)胞冷凝集的標(biāo)本在3 種不同的環(huán)境下檢測(cè)時(shí)可發(fā)現(xiàn)：普通室溫時(shí)，紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板均有異常報(bào)警（Agglut 和Turb/Hb）。紅細(xì)胞直方圖可見異常的大紅細(xì)胞峰。管壁上有細(xì)砂粒樣凝集顆粒；血涂片發(fā)現(xiàn)血膜上有許多細(xì)小顆粒，顯微鏡下可見紅細(xì)胞大量聚集在一起。

37 ℃水浴30 min 后，15例標(biāo)本未發(fā)現(xiàn)抗凝管管壁有凝集顆粒，試管壁上的小片狀凝塊消失，紅細(xì)胞分布圖形正常，無報(bào)警信息。鏡檢血涂片，可見紅細(xì)胞均勻分布。其余5例標(biāo)本仍然提示紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板有異常報(bào)警（Agglut 和Turb/Hb）,紅細(xì)胞直方圖異常。

表1 普通室溫（20 ℃）和37 ℃水浴30 min 后及25 ℃條件下，37 ℃水浴30 min 20例測(cè)定結(jié)果（±s）

表1 普通室溫（20 ℃）和37 ℃水浴30 min 后及25 ℃條件下，37 ℃水浴30 min 20例測(cè)定結(jié)果（±s）

普通室溫37 ℃水浴后37 ℃水浴25 ℃室溫測(cè)定組別7.05±0.25 7.12±0.30 7.10±0.29 WBC(×109/L)1.25±0.10 3.85±0.13 3.98±0.15 RBC(×1012/L)124±2.0 122±1.0 123±1.0 HGB(g/L)18.2±0.05 35.2±0.03 37.2±0.06 HCT(%)145.6±2.40 91.4±3.10 93.4±2.50 MCV(fL)99.2±1.60 31.7±1.20 30.9±3.0 MCH(pg)681±15 346±12 330±14 125±10 130±8 128±14 MCHC(g/L) PLT(×109/L)

室溫25 ℃時(shí)，標(biāo)本37 ℃水浴30 min 后，20例標(biāo)本均未出現(xiàn)報(bào)警信息。管壁無凝集顆粒，鏡檢血涂片，可見紅細(xì)胞均勻分布。

從表1 可以看出，①普通室溫(20 ℃)和37 ℃水浴30 min 的結(jié)果比較，WBC、HGB、PLT 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。而紅細(xì)胞、紅細(xì)胞壓積（HCT）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）；②37℃水浴30 min 和25 ℃條件下37 ℃水浴30 min 的結(jié)果比較，WBC、HGB、PLT 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）。而紅細(xì)胞、紅細(xì)胞壓積（HCT）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。

3 討論

冷凝集素是冷反應(yīng)型抗紅細(xì)胞抗體，在受冷后可使紅細(xì)胞出現(xiàn)聚集[1]。在0~4 ℃時(shí)最易和紅細(xì)胞膜抗原結(jié)合,是較強(qiáng)的使紅細(xì)胞凝集的一種自身免疫性抗體, 可存在于正常人的血清中,抗體多數(shù)是IgM 型。低效價(jià)的冷凝集素一般無臨床意義,通常16 ℃以下可使紅細(xì)胞發(fā)生凝集,30 ℃以上不發(fā)生凝集[2]。這種自身凝集反應(yīng)是可逆的，當(dāng)環(huán)境溫度升高后，凝集的紅細(xì)胞可自行解聚[3]。正常人血液中都有一定量的冷凝素抗體，但滴度較低，在1∶16 以下。正常情況下，不會(huì)導(dǎo)致不良反應(yīng)。但當(dāng)機(jī)體處于感染等病理情況時(shí)，機(jī)體的冷凝素的含量增加，可以引起凝集反應(yīng)[4]。很多疾病如多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、淋巴系統(tǒng)增殖性疾病、自身免疫性疾病、某些病毒和支原體感染、癌癥、白血病、妊娠等都可以出現(xiàn)冷凝集反應(yīng)[5]。

該實(shí)驗(yàn)中，20例標(biāo)本在普通室溫 （20 ℃）,37 ℃水浴30 min和25 ℃條件下37 ℃水浴30 min 3 種條件測(cè)定時(shí),WBC﹑PLT﹑HGB 的計(jì)數(shù)結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05）。在研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)標(biāo)本出現(xiàn)冷凝集時(shí)，數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，血細(xì)胞分析儀只對(duì)體積相當(dāng)?shù)募t細(xì)胞或小紅細(xì)胞進(jìn)行了分析，而大紅細(xì)胞團(tuán)塊完全被忽略，這就導(dǎo)致了不合邏輯的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)降低和高M(jìn)CV。而HGB 是紅細(xì)胞溶解后采用比色方法測(cè)定，故冷凝集對(duì)HGB 無影響。對(duì)于由RBC、HGB、HCT 計(jì)算的參數(shù)MCV、MCH、MCHC 則造成假性偏高。很多文獻(xiàn)[6-7]報(bào)道了標(biāo)本發(fā)生冷凝集時(shí)的處理方法，如經(jīng)37 ℃水浴不同時(shí)間后立即進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)行血漿置換，重新采血后立即測(cè)定。37 ℃水浴后在不同的儀器上檢測(cè)。對(duì)試劑和樣本進(jìn)行雙重加溫，這些方法使冷凝集的標(biāo)本得到了很好地處理。在本實(shí)驗(yàn)中，37 ℃水浴30 min 糾正了15例冷凝集標(biāo)本，但仍存在5例標(biāo)本出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象。而在水浴的同時(shí)提高室內(nèi)溫度到25 ℃，對(duì)于5例冷凝集素效價(jià)高﹑紅細(xì)胞聚集程度強(qiáng)的標(biāo)本得到了很好地處理。從表中可以看出，20例標(biāo)本在37 ℃水浴30 min和25 ℃條件下37 ℃水浴30 min 兩種條件檢測(cè)時(shí)，紅細(xì)胞、紅細(xì)胞壓積（HCT）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。這與石恩榮在冷凝集對(duì)血液分析儀檢測(cè)結(jié)果的影響的報(bào)道是一致的。在該實(shí)驗(yàn)中WBC、HGB、PLT 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。由于XE-5000 是以半導(dǎo)體激光器流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)合熒光染色技術(shù)檢測(cè)白細(xì)胞，故對(duì)WBC 沒有影響。冷凝集對(duì)PLT的影響報(bào)道并不一致，該實(shí)驗(yàn)顯示PLT 計(jì)數(shù)未受影響。在冷凝集的標(biāo)本檢測(cè)中，重新采血不但增加了患者的壓力，而且病房標(biāo)本立即檢測(cè)很難做到。進(jìn)行血漿置換可造成血小板和白細(xì)胞的丟失，置換次數(shù)越多丟失現(xiàn)象越嚴(yán)重。這可能與吸棄血漿時(shí)WBC﹑PLT 被一起吸掉有關(guān)。在該實(shí)驗(yàn)中，水浴的同時(shí)升高溫度避免了讓患者重新采血的壓力，避免了血漿置換WBC﹑PLT 的丟失，且操作簡(jiǎn)單，對(duì)冷凝集的處理效果較好。一般的實(shí)驗(yàn)室很容易做到。

綜上所述當(dāng)遇到疑似冷凝集標(biāo)本，如RBC，HGB 比例嚴(yán)重不符時(shí)（正常人HGB 和RBC 的比例為30∶1），首先觀察試管內(nèi)標(biāo)本狀態(tài)，仔細(xì)觀察紅細(xì)胞分布的直方圖和出現(xiàn)的報(bào)警信息，同時(shí)檢測(cè)冷凝素的效價(jià)。當(dāng)標(biāo)本確定為冷凝集后，37 ℃水浴30 min 后，可以利用空調(diào)提高室內(nèi)的溫度到25 ℃以上，此方法可以消除冷凝集素的影響。在日常工作中，尤其是冬天溫度較低的時(shí)候，經(jīng)常會(huì)遇到標(biāo)本發(fā)生冷凝集情況。正確識(shí)別和處理冷凝集標(biāo)本的異常檢測(cè)結(jié)果，對(duì)臨床準(zhǔn)確評(píng)估患者的病情非常重要?？杀苊獍l(fā)出錯(cuò)誤的檢驗(yàn)報(bào)告,影響臨床檢驗(yàn)治療

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