notch-1、p16在宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義

李 宇 李文娟 宋慧勝 劉 祺

廣東省清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院放療科，廣東清遠(yuǎn) 511500

宮頸癌是婦女最為常見的一種惡性腫瘤，全球每年約有25萬人死于宮頸癌，其發(fā)病率呈上升及年輕化趨勢。宮頸癌的發(fā)病機(jī)制目前尚未被完全闡明，但感染人乳頭瘤病毒（HPV）被廣泛證實(shí)為該病發(fā)生過程中重要的危險(xiǎn)因子[1-2]。研究表明，notch-1受體異常表達(dá)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞過度增殖，繼而促進(jìn)腫瘤的形成；p16基因是重要的抑癌因子，參與了腫瘤細(xì)胞的周期調(diào)節(jié)，其表達(dá)的強(qiáng)弱可間接反映HPV 病毒量。故該文應(yīng)用免疫組化（SP）技術(shù)檢測notch-1、p16 在該院2010年1月—2014年6月收治的56 例宮頸癌及40 例正常宮頸組織中的表達(dá)情況及核異位情況，闡明其活化表達(dá)與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，提高宮頸癌診斷的靈敏度，為腫瘤的防治提供新的方向。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院收治的宮頸癌患者56 例作為研究對象，年齡27～73歲，平均（45.1±9.7 歲）。宮頸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)及分級標(biāo)準(zhǔn)以國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO，2000年）為準(zhǔn)[3]。其中宮頸鱗癌30 例、腺癌26 例，病例分級Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級者分別為13、19、24 例；另取40 例因子宮肌瘤行全子宮切除、且經(jīng)病理證實(shí)無宮頸病變的宮頸組織標(biāo)本作為對照，年齡26～75 歲，平均（44.8±8.2 歲）。兩組對象一般資料的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。兩組的組織標(biāo)本均保存于液氮中，且無放化療或局部治療史。

1.2 方法

標(biāo)本經(jīng)常規(guī)10%福爾馬林固定，脫水后經(jīng)石蠟包埋，切片，厚度為4 μm，并將切片敷貼于載玻片上，按試劑盒說明書進(jìn)行免疫組化操作。注意將兔多克隆notch-1 抗體稀釋至1:80，鼠單克隆p16 抗體稀釋至1:100，并設(shè)置PBS 作為著色對照標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

在光鏡高倍視野下觀察，陽性的判斷可根據(jù)胞核或胞漿中是否呈現(xiàn)粗細(xì)不一棕黃至棕褐色顆粒，核著色時(shí)代表存在核異位或活化表達(dá)。無著色則為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS16.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料用采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

宮頸鱗癌及宮頸腺癌組織中的核異位比率均顯著高于正常宮頸組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；3 種組織中p16 的陽性率分別為75%、83.3%和92.3%，相互比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。具體見表1。

表1 notch-1、p16 在不同類型宮頸組織中陽性表達(dá)情況及分布情況

3 討論

3.1 notch-1 在宮頸癌中表達(dá)及臨床意義

notch 是位于細(xì)胞膜上的一個(gè)單次跨膜的異二聚體受體，參與血細(xì)胞分化、胚胎發(fā)育等重要生理過程。研究發(fā)現(xiàn)，notch 在血液系統(tǒng)腫瘤等多種實(shí)體瘤中存在表達(dá)異常，在腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、發(fā)育及凋亡過程中發(fā)揮重要作用[4-5]：notch 表達(dá)異常，細(xì)胞無法正常分化而過度繁殖，增加了腫瘤發(fā)生率。已有的研究表明，notch-1 受體與宮頸癌細(xì)胞的增殖密切相關(guān)。該研究利用SP技術(shù)發(fā)現(xiàn)，notch-1 核異位在正常宮頸組織中的發(fā)生率僅為5%，而在宮頸腺癌、鱗癌中的發(fā)生率達(dá)到了43.3%和57.7%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示notch-1 核異位可能是宮頸腫瘤病變因素。

3.2 p16 在宮頸癌中表達(dá)及臨床意義

p16 基因是細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的重要因子，可抑制細(xì)胞周期，進(jìn)而抑制細(xì)胞的異常增殖。p16 可特定性競爭性結(jié)合CDK4 進(jìn)而導(dǎo)致CDK4 的活性被抑制，抑制了細(xì)胞由G1 期向S 期的轉(zhuǎn)變同時(shí)阻止了DNA 合成的啟動(dòng)[6]。CDK4 激酶的活性被抑制也將導(dǎo)Rb不能磷酸化，未磷酸化的Rb 增多而抑制細(xì)胞增殖。故p16 基因的變異或其蛋白的失活會(huì)導(dǎo)致cyclinD→CDK4/6→Rb→EF 細(xì)胞周期調(diào)節(jié)途徑失控，而使細(xì)胞過度增殖，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。研究表明，p16 在具有HPV 感染的宮頸癌中表達(dá)異常，且其表達(dá)與宮頸癌病情嚴(yán)重程度存在正相關(guān)的關(guān)系。因此，可認(rèn)為HPV 感染可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞中p16 的表達(dá)增高，而HPV 通過E6、E7 蛋白介導(dǎo)而導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生，即HPV 感染是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的主要病因。研究表明，p16 表達(dá)的強(qiáng)弱可作為檢測是否感染了HPV 的一種簡單可靠的方法，且其靈敏度和特異度分別為95%，96%，通過檢測p16 可提高宮頸癌診斷的靈敏度，具有一定的臨床意義。該組研究3 種組織中p16 的表達(dá)分別為75%、83.3%和92.3%，三者相互比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。該結(jié)果和許多文獻(xiàn)[7-8]中報(bào)道不一致，對此的理解是HPV 感染導(dǎo)致了p16 的表達(dá)增大，且并不是所有HPV 感染都發(fā)展為宮頸癌，且該組實(shí)驗(yàn)所選的樣本數(shù)較少。

通過聯(lián)合檢測notch-1、p16 的表達(dá)可提高宮頸癌診斷的靈敏度，為其防治提供新的方向，具有一定的臨床意義。

[1]劉馨,白艷香.血清腫瘤標(biāo)志物和宮頸癌分期的相關(guān)性及其機(jī)制[J].中國老年學(xué)雜志,2014(11):2945-2946.

[2]Gong-ling PENG,Ye TIAN,Chong LU et al.Effects of Notch-1 Down-regulation on Malignant Behaviors of Breast Cancer Stem Cells[J].華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)英德文版，2014,34(2):195-200.

[3]馬永超，范文娟，吳華，等.Notch 信號通路在血小板衍生生長因子-BB誘導(dǎo)人胰腺癌細(xì)胞增殖過程中的作用[J].解剖學(xué)報(bào),2014,45(2):239-241.

[4]巴黎,丁雪冰,王雪晶，等.Notch 信號通路在1-甲基-4-苯基吡啶誘導(dǎo)的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡中的作用[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2014,94(13):1025-1028.

[5]萬磊,劉健,黃傳兵，等.Notch-Jagged/Delta 信號通路在佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠肺功能降低中的作用[J].中南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2014,39(2):109-116.

[6]Raghu Hari,Gondi Christopher ,Dinh Dzung et al.Specific knockdown of uPA/uPAR attenuates invasion in glioblastoma cells and xenografts by inhibition of cleavage and trafficking of Notch -1 receptor[J].Molecular Cancer,2011,10(1).

[7]李道旺，王紅群，王慶梅，等.p16 及p53 蛋白在前列腺癌中的表達(dá)及意義[J].山東醫(yī)藥,2014(17):43-45.

[8]Pooja Malhotra,Rakesh Kochhar,Kim Vaiphei,et al.Aberrant promoter methylation of p16 in colorectal adenocarcinoma in North Indian patients[J].World Journal of Gastrointestinal Oncology,2011,2(7).