胃腺癌中細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶1、2和DNA雙鏈斷裂修復(fù)蛋白51的表達(dá)及意義

周文燕 (揚(yáng)州友好醫(yī)院內(nèi)三科，江蘇 揚(yáng)州 225009)

胃腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程不清楚。研究認(rèn)為機(jī)體的基因和蛋白表達(dá)失常是促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的重要因素。細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶(CHK1)1、2是細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)(G1/S，S和G2/S)發(fā)揮作用的主要激酶，對(duì)維持機(jī)體基因組的穩(wěn)定及基因的平衡有重要作用〔1，2〕。DNA雙鏈斷裂修復(fù)蛋白(RAD)51是一種高度保守和主要在同源重組中發(fā)揮作用的DNA修復(fù)蛋白〔3〕，3種蛋白異常表達(dá)對(duì)腫瘤發(fā)展及放療反應(yīng)均有一定影響。本文探討胃腺癌CHK1、CHK2和RAD51的表達(dá)特征及其臨床意義。

1 材料和方法

1.1 臨床資料 近3年我院行胃腺癌根治手術(shù)的患者97例作為觀察組，年齡50～83歲，平均65.6歲，其中男51例，女46例。納入均經(jīng)病理醫(yī)師再次確診，并符合WHO中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中高分化20例，中分化15例，低分化62例。收集切端經(jīng)病理證實(shí)為正常胃黏膜組織80例作為對(duì)照組，年齡51～82歲，平均65.3歲，其中男42例，女38例。兩組一般臨床資料無(wú)明顯差別(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 免疫組化檢測(cè)CHK1、CHK2和RAD51蛋白的表達(dá)CHK1、CHK2和RAD51蛋白均購(gòu)自武漢博士德生物工程公司，均為濃縮液。對(duì)抗體進(jìn)行不同比例的稀釋，選擇最理想的配比濃度用于正式實(shí)驗(yàn)。3種蛋白的檢測(cè)均應(yīng)用免疫組化SABC法，DAB染色。操作均由同一病理科主管技師進(jìn)行，嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作，嚴(yán)格質(zhì)量控制。

1.3 CHK1、CHK2和 RAD51蛋白檢測(cè)結(jié)果的判定方法CHK1和CHK2以細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞，RAD51以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。每張切片觀察5個(gè)腫瘤細(xì)胞(觀察組)、上皮細(xì)胞(對(duì)照組)染色密集的區(qū)域(400倍)，取其平均值，以陽(yáng)性細(xì)胞≥25%定為陽(yáng)性，以陽(yáng)性細(xì)胞＜25%定為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SAS6.12軟件進(jìn)行χ2或相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組CHK1、CHK2和RAD51表達(dá)陽(yáng)性率的比較 觀察組中CHK1、CHK2和RAD51表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(P＜0.000 1)。見表 1。

2.2 CHK1、CHK2和RAD51在觀察組不同臨床特征中的表達(dá)比較 觀察組CHK1、CHK2和RAD51的表達(dá)與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度和臨床分期相關(guān)(P＜0.001)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性。見表2。

2.3 觀察組CHK1、CHK2和RAD51表達(dá)的相關(guān)性 觀察組CHK1 和 RAD51(r=0.42，P=0.042 3)、CHK2 和 RAD51(r=0.47，P=0.034 2)的表達(dá)具有正相關(guān)性。

表1 兩組CHK1、CHK2和RAD51表達(dá)陽(yáng)性率的比較〔n(%)〕

表2 CHK1、CHK2和RAD51在觀察組不同臨床特征中的陽(yáng)性表達(dá)比較〔n(%)〕

3 討論

促進(jìn)胃腫瘤進(jìn)展的主要是癌基因的激活和抑癌基因的失活，當(dāng)基因和蛋白異常表達(dá)誘導(dǎo)腫瘤進(jìn)展過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞增殖活性升高，生長(zhǎng)速度加快，侵襲能力更強(qiáng)〔4，5〕。CHK1 和CHK2是細(xì)胞周期檢測(cè)中最關(guān)鍵的效應(yīng)蛋白激酶〔6，7〕。其異常表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的增殖過(guò)程，也對(duì)腫瘤治療過(guò)程中治療反應(yīng)有一定的判斷作用。RAD51是細(xì)胞DNA修復(fù)系統(tǒng)中的重要一員，因此其正常表達(dá)對(duì)維持其穩(wěn)定性有重要意義。由于多種因素均能引起DNA損傷，其中最嚴(yán)重的是DNA雙鏈斷裂〔8〕，因此RAD51的正常表達(dá)對(duì)其修復(fù)有重要作用，而當(dāng)其異常表達(dá)可以引起損傷或修復(fù)障礙。目前已知有重組修復(fù)和非同源末端連接兩種機(jī)制參與DNA雙鏈斷裂的修復(fù)。雖然研究CHK1、CHK2和RAD51在腫瘤中的表達(dá)較多，但是學(xué)者發(fā)現(xiàn)其在不同腫瘤中的表達(dá)不一致。高麗麗等〔9〕認(rèn)為CHK2在乳腺癌中高表達(dá)是促進(jìn)腫瘤發(fā)生和發(fā)展的重要因素。申帥等〔10〕認(rèn)為CHK1和RAD51在結(jié)腸癌中低表達(dá)進(jìn)可以加速腫瘤的增殖過(guò)程。吳春等〔11〕認(rèn)為CHK2在高級(jí)別漿液腺癌中高表達(dá)。鄧年豐等〔12〕認(rèn)為CHK1和RAD51在舌鱗癌中高表達(dá)。因此CHK1、CHK2和RAD51在不同腫瘤中的表達(dá)并不一致，且 CHK1、CHK2和RAD51可能在同一腫瘤中的不同臨床特征或不同分化程度中的表達(dá)也不盡相同。

本研究結(jié)果提示3種蛋白高表達(dá)是促進(jìn)腫瘤發(fā)生的重要因素。CHK1和CHK2作為ATM和ATE的下游效應(yīng)基因，如果細(xì)胞的DNA受到損傷或破壞時(shí)，被ATM和ATR活化的CHK2通過(guò)其下游的底物磷酸酶CDC25和14-3-3蛋白來(lái)激活細(xì)胞檢測(cè)點(diǎn)關(guān)卡，使細(xì)胞周期阻滯在G1/S轉(zhuǎn)折處、S期和G2/M轉(zhuǎn)折處，此時(shí)發(fā)揮DNA修復(fù)的作用，如果其表達(dá)過(guò)高或明顯異常，則細(xì)胞增殖活性出現(xiàn)異常，此時(shí)可以引起細(xì)胞的異常增生，也使腫瘤細(xì)胞明顯活化，癌化過(guò)程明顯。也有學(xué)者認(rèn)為CHK1和CHK2的功能還有激活轉(zhuǎn)錄、調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞黏附的作用〔13，14〕。同源配對(duì)是重組修復(fù)的關(guān)鍵步驟，RAD51作為催化源配對(duì)的關(guān)鍵酶，通過(guò)對(duì)鏈配對(duì)和鏈交換的影響發(fā)揮作用。也有研究〔15〕認(rèn)為RAD51可以刺激源重組和姐妹染色體的交換，引起基因的不穩(wěn)定。本文結(jié)果提示3種蛋白參與了腫瘤的進(jìn)展。CHK1、CHK2和RAD51高表達(dá)時(shí)，腫瘤的侵襲增強(qiáng)，此時(shí)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)活躍，細(xì)胞繁殖快，使腫瘤的體積增大。由于腫瘤的浸潤(rùn)深度、分化程度和臨床分期均為腫瘤預(yù)后的重要指標(biāo)，因此三者高表達(dá)時(shí)可能提示預(yù)后不良。CHK1、CHK2和RAD51可能在同一通路上起調(diào)節(jié)作用，其作用的間接途徑可能有對(duì)增殖和血管生成的調(diào)節(jié)，但是具體機(jī)制及作用途徑有待證實(shí)。

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