姬松茸多糖對(duì)輻射損傷大鼠的抗氧化作用研究

王俊婷劉劍英藍(lán)蕾胡曉文

(1.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合中心，266011；2.濟(jì)南軍區(qū)青島第一療養(yǎng)院，266071)

隨著工業(yè)技術(shù)的發(fā)展，人們接觸輻射的機(jī)會(huì)越來(lái)越多，如電視、電腦的廣泛應(yīng)用，從事輻照相關(guān)職業(yè)者，癌癥放射患者，醫(yī)學(xué)B超、CT等相關(guān)檢查都會(huì)受到輻射損害[1]，長(zhǎng)期接觸會(huì)對(duì)人們的身體產(chǎn)生一定的損害作用。因此，關(guān)于輻射損傷的防護(hù)日益受到人們的重視，這就使得輻射危害以及輻射防護(hù)成為了近年來(lái)研究的一個(gè)熱點(diǎn)問題。

姬松茸又名巴西蘑菇，是一種珍貴的食藥用菌。其子實(shí)體深層發(fā)酵菌絲體及發(fā)酵液中含有多種生物活性物質(zhì)，如多糖。國(guó)外報(bào)道姬松茸多糖具有很強(qiáng)的清除自由基、抗腫瘤、抗氧化、增強(qiáng)自身免疫力等多種生物學(xué)效應(yīng)[2]。但迄今為止，尚缺乏對(duì)其抗輻射損傷的氧化損傷保護(hù)作用療效及研究報(bào)告。

1 材料與方法

1.1 原料及試劑

1.1.1 姬松茸多糖 西安森冉生物工程有限公司提供，多糖濃度為50%(批號(hào)：SR20140416)。

1.1.2 主要試劑 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)測(cè)定試劑盒，丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)測(cè)定試劑盒，白細(xì)胞介素-2(IL-2)測(cè)定試劑盒，購(gòu)買自青島渝邑祥科貿(mào)有限公司。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)SD健康雄性大鼠40只，周齡6周，體質(zhì)量(140±20)g，于實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)一周。

1.1.4 主要儀器 紫外線分光光度儀、電子天平、TDL-40B高速離心機(jī)等。

1.2 輻射損傷大鼠模型的建立

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 采用完全隨機(jī)分組的方法隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、姬松茸多糖高劑量組[200 mg/(kg·d)]、姬松茸多糖低劑量組[100 mg/(kg·d)]共4組，每組10只，分籠飼養(yǎng)，自然晝夜，節(jié)律光照，溫度(20±5)℃，相對(duì)濕度為40%～60%。

1.2.2 建立動(dòng)物模型 所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后開始造模，給予直線加速器(美國(guó)瓦里安Warian-21EX)X射線輻射損傷，皮源距100 cm，劑量率100 cGy/min，全身輻射劑量為5.0 Gy(表1)。

表1 動(dòng)物模型具體分組

1.3 樣品采集 輻射后灌胃飼養(yǎng)14 d后，末次給藥后24 h稱重，給予10%水合氯醛麻醉(0.3 mL/100 g)，待麻醉完全后腹主動(dòng)脈取血2 mL，靜置20 min后離心血清(20 min 2 000～3 000 r/min)，仔細(xì)收集上清液，－20℃保存待測(cè)，測(cè)定指標(biāo)為谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)，具體操作方法見試劑盒說(shuō)明書。

1.4 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理 用SPSS 17.0軟件處理數(shù)據(jù)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 姬松茸多糖對(duì)輻射損傷后大鼠GSH-PX和MDA的影響 與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組GSH-PX含量下降，MDA含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而多糖對(duì)照組GSH-PX含量升高，MDA含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與模型對(duì)照組相比，多糖對(duì)照組GSH-PX含量升高，MDA含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；當(dāng)多糖劑量達(dá)到200 mg/(kg·d)時(shí)，血清中GSH-PX含量升高，MDA含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，表2)。

2.2 姬松茸多糖對(duì)輻射損傷模型TNF-α和IL-2的影響與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組TNF-α、IL-2含量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而多糖對(duì)照組TNF-α、IL-2含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與模型對(duì)照組相比，多糖對(duì)照組TNF-α、IL-2含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；當(dāng)多糖劑量達(dá)到200 mg/(kg·d)時(shí)，血清中TNF-α、IL-2含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，表3)。

表2 姬松茸多糖對(duì)輻射損傷后大鼠GSH-PX和MDA的影響

表3 姬松茸多糖對(duì)輻射損傷后大鼠TNF-α和IL-2的影響

3 討論

輻射作用于機(jī)體會(huì)產(chǎn)生大量的自由基，這些自由基成為傳遞輻射能的主要媒介，從而引發(fā)一系列的放射生物效應(yīng)[3]。輻射不僅可以引起各種組織器官的氧化損傷，甚至誘發(fā)細(xì)胞癌變、突變的嚴(yán)重后果，還會(huì)對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)造成損傷以及產(chǎn)生過量的自由基，使體內(nèi)防御系統(tǒng)造成嚴(yán)重的破壞[4]。因此，研究利用天然植物中具有的天然活性成分，以提高機(jī)體抗輻射能力，預(yù)防和減輕輻射對(duì)人體的損害，具有重要而實(shí)用的價(jià)值。

正常組織受到射線照射后，由于射線與組織的相互作用，產(chǎn)生大量自由基，后者作用于生物膜引起膜的脂質(zhì)過氧化，造成生物膜功能和代謝的改變，從而使輻射損傷進(jìn)一步加重[5]。GSH-PX作為機(jī)體組織主要清除自由基的抗氧化酶，其活力的高低可間接反映機(jī)體清除自由基的能力。MDA是脂質(zhì)過氧化的主要產(chǎn)物，是反映機(jī)體自由基水平和氧化應(yīng)激水平的一項(xiàng)指標(biāo)。兩組指標(biāo)反映機(jī)體的抗氧化狀態(tài)，觀察這兩項(xiàng)指標(biāo)，可反映機(jī)體脂質(zhì)過氧化的程度及清除自由基而防御過氧化毒性的能力[6]。

腫瘤壞死因子(TNF-α)是細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中一個(gè)重要的多功能成員，其對(duì)多種組織器官產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)，使機(jī)體維持內(nèi)部自穩(wěn)，抵御各種致病因子必不可少的免疫調(diào)節(jié)因子，是由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的參與免疫和炎癥反應(yīng)的主要調(diào)節(jié)因子[7]。IL-2又名T細(xì)胞生長(zhǎng)因子，是由活化的CD4＋T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生的具有廣泛生物活性的細(xì)胞因子。IL-2是T細(xì)胞亞群的生長(zhǎng)因子，其主要功能是促進(jìn)T細(xì)胞的增殖，可以誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生和增殖，促進(jìn)免疫球蛋白的產(chǎn)生和B細(xì)胞的生長(zhǎng)，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞抗原提呈、殺菌能力和細(xì)胞毒性等[8]。所以TNF-α和IL-2是調(diào)控免疫應(yīng)答的重要因子，參與抗體反應(yīng)、造血和腫瘤監(jiān)視，在氧化損傷和抗腫瘤功能上有重要作用。

本實(shí)驗(yàn)中給予大鼠輻射損傷后，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組GSH-PX含量降低，MDA含量增加，TNF-α、IL-2含量降低(P＜0.05)；與模型對(duì)照組相比，服用姬松茸多糖的大鼠GSH-PX含量升高，MDA含量降低，，TNF-α、IL-2含量升高(P＜0.05)；當(dāng)多糖劑量達(dá)到200 mg/(kg·d)時(shí)，GSH-PX含量升高，MDA含量降低，TNF-α、IL-2含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，表明姬松茸多糖對(duì)輻射損傷后大鼠的抗氧化能力具有明顯的保護(hù)作用。

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