龍?zhí)俳罟瞧委熂毙攒浗M織損傷的機(jī)制探討

汪濤胡衛(wèi)東鐘才進(jìn)趙雁平劉輝曾凡波

(1.廣州軍區(qū)武漢療養(yǎng)院，430074；2.廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院，430072；3.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，430030)

軟組織損傷臨床上主要為外力作用下皮膚、皮下深筋膜、韌帶、關(guān)節(jié)囊、肌肉、肌腱、神經(jīng)及血管受到的閉合性損傷和病理性損害，臨床表現(xiàn)為局部的疼痛、腫脹、功能障礙等，中醫(yī)辨證為瘀證，以活血化瘀、清熱涼血為主。龍?zhí)俳罟瞧哂袕?qiáng)筋壯骨、活血通絡(luò)的作用。本實(shí)驗(yàn)以大鼠軟組織損傷作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，觀察龍?zhí)俳罟瞧委熂毙攒浗M織損傷的作用，并檢測龍?zhí)俳罟瞧崛∥飳Π准?xì)胞介素-1β(IL-1β)的影響，探討其治療軟組織損傷的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 選用SD白色大鼠90只，雌雄各半[SPF級，190～210 g，湖北省實(shí)驗(yàn)動物研究中心，許可證號：SCXK(鄂)2008-0005]，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備 全自動多功能酶標(biāo)儀(Wellsacn MK3型，北京炳洋科技有限公司)；80-2臺式低速離心機(jī)(上海手術(shù)器械廠)；ALC-210.3電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

1.3 藥物及試劑 龍?zhí)俳罟瞧?，由本院制劑室提供，制劑批文：廣制字(2011)F03001(批號：130306)；龍?zhí)俳罟瞧崛∥铮喝↓執(zhí)俳罟瞧幏圻m量，70%乙醇提取2次，第1次10倍量溶劑，第2次6倍量，濃縮后加70%乙醇調(diào)整至1 g，浸膏相當(dāng)于2 g藥材。陽性對照藥物：雙氯芬酸二乙胺乳膠劑，北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：20 g/支，批號：X1600。IL-1β測定試劑盒：購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)造模 參照周國林[1]的造模方法將SD大鼠90只，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前24 h用10%硫化鈉對大鼠臀部及大腿后側(cè)脫毛，并做好標(biāo)記。將大鼠右下肢平放，固定于軟組織打擊器底座臺上，將50 g打擊錘拉至10 cm高度，松開打擊錘，自由落下，連擊5次，造成面積約1 cm2大小有明顯皮下出血及腫脹的非開放性軟組織損傷模型[2]。打擊后大鼠出現(xiàn)單側(cè)后肢跛行，肉眼即見打擊部位青紫、瘀血、腫脹，說明造模成功。局部皮膚破損以及檢查發(fā)現(xiàn)有骨折征象者予以排除。

1.5 動物分組 造模成功后所有大鼠在同一條件下(室溫20～25℃，相對濕度4%左右)，用普通飼料喂養(yǎng)，自由飲水。90只大鼠隨機(jī)分為：空白對照組(A組)，模型對照組(B組)，陽性藥組(雙氯芬酸二乙胺乳膠劑，C組)、龍?zhí)俳罟瞧蛣┝拷M(以下簡稱低劑量組，龍?zhí)俳罟瞧幏?.20 g/kg，加入一定量透皮吸收劑，D組)和龍?zhí)俳罟瞧邉┝拷M(以下簡稱高劑量組，龍?zhí)俳罟瞧幏?.80 g/kg，加入一定量透皮吸收劑，E組)，每組18只動物[3]。分5組后再按隨機(jī)數(shù)字表法每組再隨機(jī)分為3個時相點(diǎn)組(1 d組、3 d組、5 d組，每組6只)。

1.6 實(shí)驗(yàn)方法 A組與B組外敷無藥等容量乳膏基質(zhì)，用繃帶包扎固定。C組與D、E組分別外敷等容量雙氯芬酸二乙胺乳膠劑或龍?zhí)俳罟瞧幏郏♂寗?，涂布面積以超過受損區(qū)面積一半以上為度，外用衛(wèi)生膠布固定、包扎。每天換藥1次，連續(xù)用藥5 d。于造模后1 d、3 d、5 d分3批處死大鼠，用手術(shù)刀切開大鼠受打擊部位皮膚，分離皮下組織，切取腫脹明顯部位的組織片40 mg，將組織片用組織勻漿器進(jìn)行勻漿，采用ELISA法測組織中IL-1β含量，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行[4]。

2 結(jié)果

2.1 龍?zhí)俳罟瞧瑢浗M織損傷模型大鼠損傷癥候指數(shù)的影響 大鼠經(jīng)打擊后傷肢迅速出現(xiàn)腫脹、皮膚瘀斑及皮下出血現(xiàn)象，說明造模成功。

2.2 龍?zhí)俳罟瞧瑢ρ獫{IL-1β水平的影響 于造模后1 d、3 d及5 d時取血，測定血漿中IL-1β水平，各組模鼠損傷局部軟組織IL-1β含量在傷后各時相均明顯高于空白組(P＜0.01)，龍?zhí)俳罟瞧?、高劑量給藥組與雙氯芬酸二乙胺乳膠劑組均能降低損傷局部軟組織IL-1β含量，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05，表1)。

表1 各組動物受傷局部組織勻漿IL-1β含量比較(ng/mL±s)

表1 各組動物受傷局部組織勻漿IL-1β含量比較(ng/mL±s)

注：與A組比較，△P＜0.05；與B組比較，*P＜0.05，#P＜0.01

組別 1 d 3 d 5 d A組 1.208 4±0.576 9 B組 16.514 3±1.702 6△ 18.822 5±2.026 4 13.145 6±0.801 4 C組 13.124 1±1.365 7△* 14.368 5±1.124 9# 10.631 8±1.632 2#D組 9.875 6±0.698 2△* 12.913 7±2.364 1* 7.433 5±1.853 7#E組 9.823 3±2.348 6△* 14.173 0±4.865 7* 8.311 4±2.795 2#

3 討論

IL-1β是一種強(qiáng)效促炎癥細(xì)胞因子，軟組織中的IL-1β主要由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生[5]，正常情況下局部軟組織中IL-1β的水平極低。軟組織受傷后，促炎性細(xì)胞因子IL-1β釋放到受傷局部，可促進(jìn)炎性細(xì)胞發(fā)揮作用[6]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，龍?zhí)俳罟瞧娠@著抑制IL-1β的水平的升高，與模型組比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。由此推測，龍?zhí)俳罟瞧赡苁峭ㄟ^降低局部組織中IL-1β的水平從而抑制炎性細(xì)胞的作用，減輕炎癥反應(yīng)。

急性軟組織損傷的中醫(yī)病機(jī)是氣滯血瘀，不通致病。龍?zhí)俳罟瞧墒斓亍?dāng)歸、骨碎補(bǔ)、牛膝、雞血藤、羌獨(dú)活、海桐皮等中藥組成。熟地甘、微溫，入心、肝、腎經(jīng)，滋陰補(bǔ)血，治陰虛血少，本方用其填骨髓，強(qiáng)筋骨，長肌肉。當(dāng)歸味苦、溫、無毒，入肝、心、脾經(jīng)，補(bǔ)血、和血，治血虛痿痹、跌撲損傷，本方用其和血止痛。骨碎補(bǔ)味苦、溫、無毒，入腎、心經(jīng)，補(bǔ)腎、活血、續(xù)傷。文獻(xiàn)[7-8]報道，骨碎補(bǔ)具有促進(jìn)骨折愈合和補(bǔ)腎強(qiáng)骨的功效，其中，柚皮苷是其接骨療傷的主要活性成分；Jeong等[9]的研究結(jié)果顯示，骨碎補(bǔ)提取物能夠促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和分化，并可抑制骨吸收。《開寶本草》記載骨碎補(bǔ)“主破血，止血，補(bǔ)傷折?！薄妒セ莘健酚泄撬檠a(bǔ)散，治跌打損傷，消瘀止痛。牛膝酸平、無毒，入肝、腎經(jīng)，補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、活血去瘀。《名醫(yī)別錄》記載牛膝“主腳中酸痛，不欲踐地。”相關(guān)研究[10]結(jié)果顯示，牛膝具有擴(kuò)張下肢血管和改善血液黏稠度和微循環(huán)的作用，從而達(dá)到消腫止痛的目的。雞血藤苦、微甘、溫，入肝、腎經(jīng)，活血舒筋，消腫止痛?！讹嬈聟ⅰ酚涊d雞血藤“去瘀血，生新血，流利經(jīng)脈。治風(fēng)血痹癥。”羌活味苦辛、無毒，入膀胱、腎經(jīng)，散寒祛濕、利關(guān)節(jié)，治風(fēng)寒濕痹，項(xiàng)強(qiáng)筋急。文獻(xiàn)報道[11]，羌活能解熱鎮(zhèn)痛、抗炎，增加血流量，緩解疼痛和抗凝。獨(dú)活甘、微溫、無毒，入膀胱、腎經(jīng)，去風(fēng)勝濕、散寒止痛?！秱浼鼻Ы鹨健酚歇?dú)活寄生湯，能緩解疼痛、改善活動受限。藥理研究[12]結(jié)果顯示，獨(dú)活可擴(kuò)張血管、減少滲出，有鎮(zhèn)痛抗炎的作用，與非甾體類抗炎藥療效相當(dāng)，但無非甾體類抗炎藥所致的潰瘍、心慌、高血壓等不良反應(yīng)，安全有效，且費(fèi)用低廉。海桐皮味苦、平、無毒，入肝、腎經(jīng)，祛風(fēng)通絡(luò)治痹痛?！稁X南采藥錄》記載海桐皮“生肌，止痛，散血，涼皮膚，敷跌打?！薄缎盒l(wèi)生總微論方》有海桐皮散，治腳攣不能伸舉。本方骨碎補(bǔ)，牛膝，雞血藤主要用于活血消腫，而羌獨(dú)活，海桐皮用于活血止痛。局部外敷調(diào)藥用了食醋，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，食醋外敷有活血、消腫、止痛的作用，常用醋調(diào)中藥外敷治療腰腿扭傷、骨折、軟組織損傷，能迅速消腫止痛。諸藥合用，具有補(bǔ)益肝腎、活血化淤、行氣止痛之功；內(nèi)外兼治，增強(qiáng)了藥效，從而改善血液循環(huán)、消炎止痛。

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