糖尿病動(dòng)物模型視網(wǎng)膜病變的實(shí)驗(yàn)研究

曹明芳 ，林 翔 ，江 蕊 ，程 良 ，張婧文

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院，福建福州 350004； 2.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建福州 350122）

糖尿病是發(fā)達(dá)國(guó)家和發(fā)展中國(guó)家所日益關(guān)注的公共健康問題。目前，糖尿病的治療出現(xiàn)了死亡率下降，而失明率逐漸增高的矛盾現(xiàn)象。糖尿病性視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy，DR）是導(dǎo)致糖尿病失明的最常見、最嚴(yán)重且治療最為棘手的疾病。本研究采用鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）腹腔注射法建立糖尿病動(dòng)物模型，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的視網(wǎng)膜病變，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

8w齡敘利亞金黃地鼠：北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司；2%STZ溶液：預(yù)先滅菌，使用前臨時(shí)配制，配制后0.5h內(nèi)注射完畢；血糖儀，0.5%美多麗-P滴眼液，20%熒光素鈉（廣西梧州制藥股份有限公司），F(xiàn)VC-45眼底熒光血管攝像機(jī)，STRATUSOCT掃描儀，GF-JY-01型直接檢影鏡。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組與造模 敘利亞金黃地鼠20只，（180±20）g，隨機(jī)分為正常對(duì)照組和模型組，每組10只動(dòng)物。正常對(duì)照組適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后，予腹腔注射等體積檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液。測(cè)血糖，稱重。模型組適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后，禁食12h，按50mg/kg的用量腹腔內(nèi)注射2%鏈脲佐菌素，連續(xù)3d；72h后取尾靜脈血測(cè)血糖，第5天時(shí)重復(fù)檢測(cè)血糖，確定糖尿病動(dòng)物模型造模成功（血糖高于13.5mmol/L即算成功）。觀察兩組動(dòng)物一般狀態(tài)，每2w測(cè)血糖、體質(zhì)量，視血糖維持狀態(tài)決定是否進(jìn)行2次造模。

1.2.2 眼底彩照及FFA檢查方法 造模后，每日觀察兩組地鼠眼底，每2w行眼底彩照及眼底熒光素血管造影（fluoresce angiography，F(xiàn)FA）檢查，0.5%美多麗-P滴眼液雙眼散瞳后，將20%熒光素鈉（0.01g/kg）自尾靜脈注入，2s～4s內(nèi)推注完畢，同時(shí)拍攝眼底像。

1.2.3 OCT檢查方法 造模后，每2w行光學(xué)相干斷層掃描（optical coherence tomography，OCT）檢查，0.5%美多麗-P滴眼液雙眼散瞳后，模型組行眼底有病變處掃描，正常對(duì)照組行相應(yīng)視網(wǎng)膜掃描。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較用t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 一般狀態(tài)變化

正常對(duì)照組敘利亞金黃地鼠體毛呈棕黃色，柔軟順亮，皮膚豐滿有彈性，眼睛有神，活潑靈敏，食欲正常。模型組敘利亞金黃地鼠自模型建立1w后開始飲水量、進(jìn)食量和尿量逐漸增多，4w后逐漸出現(xiàn)體毛枯黃稀疏、皮膚松弛、躁動(dòng)，8w后體重減輕，16w后體毛枯黃部分脫落，體重明顯減輕，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，皮下組織明顯減少。

2.2 血糖變化

造模后正常對(duì)照組和模型組血糖水平分別為（6.1340±0.0559）mmol/L、（26.1500±0.6888）mmol/L；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)兩組血糖水平分別為（6.0400±0.0870）mmol/L、（28.8000±0.2534）mmol/L。造模后和實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，模型組血糖水平均明顯高于正常對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

2.3 眼底彩照的變化

正常對(duì)照組敘利亞金黃地鼠視網(wǎng)膜顏色紅，眼底色素不太均勻，視盤位于視網(wǎng)膜中央，視網(wǎng)膜血管以視盤為中心放射狀分布（圖1）。模型組敘利亞金黃地鼠于造模后4w視網(wǎng)膜開始出現(xiàn)散在分布的點(diǎn)片狀黃白色病灶及少量紅色點(diǎn)狀病灶。造模后8w視網(wǎng)膜點(diǎn)片狀黃白色病灶增多，紅色點(diǎn)狀病灶無明顯變化。造模后16w視網(wǎng)膜點(diǎn)片狀黃白色病灶明顯增多，呈彌漫性分布，紅色點(diǎn)狀病灶無明顯變化（圖2）。

2.4 FFA檢查結(jié)果

圖1 正常對(duì)照組敘利亞金黃地鼠眼底彩照

圖2 造模16w后模型組敘利亞金黃地鼠眼底彩照

正常對(duì)照組敘利亞金黃地鼠視盤及視網(wǎng)膜血管充盈完全，無異常熒光表現(xiàn)（圖3）。模型組敘利亞金黃地鼠于造模后4w開始出現(xiàn)視網(wǎng)膜平均循環(huán)時(shí)間延遲，可見點(diǎn)狀及小片狀高熒光灶，一直持續(xù)到造模后 16w（圖 4）。

圖3 正常對(duì)照組敘利亞金黃地鼠FFA

圖4 造模16w后模型組敘利亞金黃地鼠FFA

2.5 OCT檢查

正常對(duì)照組敘利亞金黃地鼠OCT表現(xiàn)視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜結(jié)構(gòu)清晰（圖5）。模型組敘利亞金黃地鼠于造模后4w OCT圖像示視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層間可見顆粒樣強(qiáng)反射，一直持續(xù)到造模后16w（圖6）。

圖5 正常對(duì)照組敘利亞金黃地鼠OCT

圖6 造模16w后模型組敘利亞金黃地鼠OCT

3 討論

STZ是目前使用最廣泛的糖尿病動(dòng)物模型所用化學(xué)誘導(dǎo)劑，其組織毒性相對(duì)較小，動(dòng)物存活率高，致糖尿病的作用穩(wěn)定［1-3］，腹腔注射成模率高［4］。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M10只動(dòng)物1只在實(shí)驗(yàn)過程中進(jìn)行了追加注射。模型組動(dòng)物均出現(xiàn)了典型的糖尿病“三多一少”癥狀，即多飲、多食、多尿和消瘦。眼底檢查可見黃白色點(diǎn)狀病灶及小片狀紅色病灶，F(xiàn)FA檢查出現(xiàn)了視網(wǎng)膜平均循環(huán)時(shí)間延遲和視網(wǎng)膜點(diǎn)狀及小片狀高熒光灶的改變，OCT檢查可見神經(jīng)上皮層間的顆粒樣強(qiáng)反射，這些改變均與人類糖尿病及糖尿病性視網(wǎng)膜病變的表現(xiàn)十分相似，考慮該模型可作為研究人類糖尿病微血管并發(fā)癥之DR的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制的重要途徑。

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