• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    煙草轉(zhuǎn)基因研究常用遺傳元件篩查策略

    2014-11-27 05:00:21余婧張孝廉趙丹鄒頡趙杰宏
    中國煙草學報 2014年1期
    關鍵詞:轉(zhuǎn)基因元件煙草

    余婧,張孝廉,趙丹,鄒頡,趙杰宏

    1 貴州省煙草科學研究院,煙草行業(yè)煙草分子遺傳重點實驗室,貴州 貴陽550081;

    2貴州煙葉復烤有限責任公司銅仁復烤廠,貴州 銅仁 554300;

    3 貴州大學貴州省農(nóng)業(yè)生物工程重點實驗 室,貴州 貴陽 550025

    生物技術

    煙草轉(zhuǎn)基因研究常用遺傳元件篩查策略

    余婧1,2,張孝廉1,趙丹3,鄒頡1,趙杰宏1

    1 貴州省煙草科學研究院,煙草行業(yè)煙草分子遺傳重點實驗室,貴州 貴陽550081;

    2貴州煙葉復烤有限責任公司銅仁復烤廠,貴州 銅仁 554300;

    3 貴州大學貴州省農(nóng)業(yè)生物工程重點實驗 室,貴州 貴陽 550025

    通過檢索國 內(nèi)外近10年煙草轉(zhuǎn)基因研究的相關文獻,建立了轉(zhuǎn)基因煙草常用轉(zhuǎn)化遺傳元件的數(shù)據(jù)庫,統(tǒng)計了每個遺傳元件及組合元件的使用頻率后,發(fā)現(xiàn)利用7種遺傳元件,包括:啟動子P-35S、標記基因NPT II、HPT、Bar和aadA、報告基因GUS及終止子T-NOS作為靶標元件組合,能使目前煙草轉(zhuǎn)基因 事件的理論篩 查率達到100%,從而構(gòu)建出轉(zhuǎn)基因煙草的優(yōu)化篩查策略。

    轉(zhuǎn)基因煙草;遺傳元件;轉(zhuǎn)基因篩查

    煙草制品作為一種特殊的消費品,其吸食安全性一直是爭論的焦點,轉(zhuǎn)基因煙草比其他轉(zhuǎn)基因植物更難獲得消費者的認可。轉(zhuǎn)基因煙草不能進行商業(yè)化生產(chǎn),且煙草制品中不能含有轉(zhuǎn)基因成分,煙草轉(zhuǎn)基因研究只能作為一種技術儲備[1]。在我國,我們一方面在加大轉(zhuǎn)基因研發(fā)力度,另一方面,也在強化對轉(zhuǎn)基因的監(jiān)管,嚴控轉(zhuǎn)基因污染[2]。煙草中轉(zhuǎn)基因成分的檢測是一個復雜的問題,涉及技術、法律及商業(yè)信息,國際上尚無統(tǒng)一的檢測標準。

    轉(zhuǎn)基因成分檢測主要包括基于DNA檢測和基于蛋白質(zhì)檢測的方法,其中基于DNA的轉(zhuǎn)基因檢測方法應用最為廣泛[3],例如實時熒 光定量聚合酶鏈式方應(RQ-PCR) 被廣泛應用于定量檢測食品或飼料中的轉(zhuǎn)基因成份含量[4]?;贒NA的轉(zhuǎn)基因檢測方法首先通過對某些遺傳元件進行篩查,例如導入的外源表達基因、用于篩選陽性植株的篩選標記基因、以及各種啟動子、終止子,挑選出使用頻率最高的少數(shù)幾個遺傳元件作為檢測靶標,如果檢測出其中任何一個元件,表明該樣品含有轉(zhuǎn)基因成分,如果未檢出,則表明樣品中不含有已知轉(zhuǎn)基因成分,不同作物使用的遺傳元件種類和頻次各不相同,因此不同作物需根據(jù)具體情況采用合適的篩查檢測策略[5-6]。

    目前關于轉(zhuǎn)基因作物遺傳元件篩查信息的報道,研究對象多為玉米、大豆、油菜、棉花、水稻等國際上商業(yè)化種植的轉(zhuǎn)基因作物[6-8],而有關轉(zhuǎn)基因煙草遺傳元件篩查的文獻未見報道,本文根據(jù)國內(nèi)外已發(fā)表的有關煙草遺傳轉(zhuǎn)化的研究文獻,統(tǒng)計部分常用遺傳轉(zhuǎn)化元件在煙草遺傳轉(zhuǎn)化中出現(xiàn)的頻率,以期篩選出煙草轉(zhuǎn)基因檢測中理論覆蓋率最高的基因元件組合,為煙草轉(zhuǎn)基因檢測奠定基礎。

    1 材料與方法

    在中國知網(wǎng)全文期刊數(shù)據(jù)庫(http://www.cnki.net/)輸入關鍵詞“轉(zhuǎn)基因煙草”,在google學術搜索(http://scholar.google.com/)輸入關鍵詞“transgenic tobacco”,搜索近10年來國內(nèi)及國外有關轉(zhuǎn)基因煙草的研究情況,對文獻所報道的轉(zhuǎn)入煙草的外源基因啟動子、終止子和篩選標記基因進行篩查,并統(tǒng)計各單個遺傳元件及遺傳元件組合在煙草遺傳轉(zhuǎn)化研究中的使用頻率。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 煙草轉(zhuǎn)基因研究中高頻使用遺傳元件

    在我們的篩查中,隨機選取近10年來有關煙草轉(zhuǎn)基因研究報道共229篇,根據(jù)所收集的信息,目前煙草轉(zhuǎn)基因研究中常用的啟動子主要有P-35S,篩選標記基因主要有:NPT II、HPT、Bar,報告基因主要有:GUS、GFP,終止子主要有T-NOS、T-35S、T-OCS。部分轉(zhuǎn)化事例中還使用到單子葉植物遺傳轉(zhuǎn)化常用啟動子P-Ubi[9-11],誘導表達或特異性表達啟動子Napin[12]、RD29A[13]、PrbcS[14]等啟動子約40種,aadA[15]、OFP[16]等篩選、報告基因及Cry1A[17]、OsLS[18]、PtrMAPK[19]等抗蟲、抗病、抗旱相關功能基因約200種,共涉及250種以上遺傳元件。部分較為常用的遺傳元件來源及功能見表1。

    表1 煙草遺傳轉(zhuǎn)化部分常用遺傳元件來源及功能Tab.1 Source and function of common genetic elements in genetic transformation part of tobacco

    2.2 轉(zhuǎn)基因煙草研究中單個遺傳元件使用頻率

    所篩查的有關轉(zhuǎn)基因煙草研究的229篇文獻中,國內(nèi)期刊文獻166篇,國外期刊文獻 63篇。由于涉及文獻數(shù)量及轉(zhuǎn)化事件較多,我們無法按目前國際上所流行的單個事件單個列出的方式進行矩陣統(tǒng)計[6-8],于是將搜索到的有關文獻按其轉(zhuǎn)化事件的目的進行分類,分為“品質(zhì)改良”、“生物反應器”、“生態(tài)環(huán)境效益改良”、“基因功能驗證分析”、“其它”五種類型,其中,“基因功能驗證分析”分為“啟動子功能”、“表達基因功能”兩種類型。

    以轉(zhuǎn)化事件的分類為列,常用遺傳元件為行,統(tǒng)計各遺傳元件在轉(zhuǎn)基因煙草研究中的使用頻率。統(tǒng)計結(jié)果如表2。表達基因啟動子P-35S使用頻率最高,在國內(nèi)及國外所報道的文獻中,其使用頻率分別為65.1%、74.6%,綜合使用頻率67.7%;表達基因終止子T-NOS使用頻率最高,綜合使用頻率67.7%;篩選標記基因NPT II使用頻率最高,綜合使用頻率63.3%;報告基因GUS使用頻率最高,綜合使用頻率25.8%。

    2.3 轉(zhuǎn)基因煙草研究中常用遺傳元件組合篩查

    從表2可以看出,沒有任何單個遺傳元件的使用頻率達到100%,因此無法用單個元件檢測出所有的轉(zhuǎn)基因煙草,為盡最大可能檢測到煙草轉(zhuǎn)基因事件,需使用兩個元件以 上的組合進行篩查。

    我們將使用頻率偏高的元件組合后進行篩查,篩查結(jié)果列于表3。其中①號組合:P-35S+T-NOS是國際上較為常用的轉(zhuǎn)基因作物篩查組合元件[3,20],目前批準商業(yè)化種植的轉(zhuǎn)基因作物90%以上至少含有這二種元件的一個[21],在我們的篩 查中,煙草轉(zhuǎn)基因研究中有86.0%的轉(zhuǎn)化事件使用到①號組合中的一個元件,即該組合的理論篩查覆蓋率為86.0%;表3中,③號組合:P-35S+T-NOS+NPT II理論篩查覆蓋率為90.0%,而CORESTA(Task Force Genetically Modified Tobacco-Detection Methods)[22]、GB/T 24310-2009 《煙草及煙草制品 轉(zhuǎn)基因檢測方法》[23]將P-35S、T-NOS、NPT II三種遺傳元件作為轉(zhuǎn)基因煙草檢測中共有序列標志,可是在該檢測中,即使用三個元件同時進行檢測,理論上仍然約有10%的煙草轉(zhuǎn)基因污染事件會被漏檢。

    為最大限度的檢測到煙草轉(zhuǎn)基因事件,我們在③號組合的基礎上加了GUS、HPT等常用遺傳元件組合,盡管⑦號組合:P-35S + T-NOS +NPT II+GUS+Hpt+Bar所選遺傳元件均為煙草轉(zhuǎn)基因事件中常使用的基因元件,但經(jīng)我們篩查,其覆蓋率為98.7%,理論上仍有1.3%的煙草轉(zhuǎn)基因事件會被漏檢,經(jīng)過統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)該漏檢元件均為aadA基因,aadA基因所編碼的壯觀霉素抗性基因是煙草葉綠體轉(zhuǎn)化技術中最常用、最好的篩選標記[24],在部分煙草葉綠體轉(zhuǎn)基因事件中,該篩選標記基因及表達基因的啟動子及終止子均為特異的[15,25-27],因此,即使使用⑦號組合中的所有元件進行檢測,也不能覆蓋到該類型的轉(zhuǎn)基因事件,在表2中,盡管所統(tǒng)計的aadA基因的使用頻率僅為4.4%,但鑒于該轉(zhuǎn)化事件的特殊性,為不使煙草葉綠體轉(zhuǎn)化事件漏檢,最高限度降低轉(zhuǎn)基因事件的漏檢 率,綜合以上 分析,我們建議以⑨號組合:P-35S + T-NOS +NPT II+GUS+HPT+Bar+aadA進行篩查,能最大限度檢測到轉(zhuǎn)基因事件,該組合涉及7個遺傳元件,理論篩查覆蓋率為100%。

    表2 煙草轉(zhuǎn)基因研究中常用遺傳元件使用頻率Tab.2 Usage frequency of common genetic elements in transgenic tobacco research

    表2(續(xù))

    表3 煙草轉(zhuǎn)基因研究中常用遺傳元件組合篩查Tab.3 Screening of common combined genetic elements in the study of transgenic tobacco

    3 討論

    1983年,首例含有抗生素藥類的轉(zhuǎn)基因煙草在美國培育成功[28],之后的30年間,轉(zhuǎn)基因技術發(fā)展十分常迅猛,轉(zhuǎn)基因生物及其產(chǎn)品大量問世[29-30]。煙草作為基因工程研究中使用最為廣泛,遺傳轉(zhuǎn)化技術最為成熟的模式植物[31-32],各科研單位遺傳轉(zhuǎn)化煙草的目的不僅僅是對其品質(zhì)進行遺傳改良[33],更多的是將外源基因?qū)霟煵?,在轉(zhuǎn)基因煙草中對未知基因進行分析、驗證、發(fā)掘,或?qū)煵葑鳛樯锓磻魃a(chǎn)研制基因工程藥物、天然香料及化工原料等[30,32-34]。

    隨著煙草轉(zhuǎn)基因研發(fā)力度的不斷加大,國家局為保證我國煙草制品吸食安全性,自2003年,便已下發(fā)《國家煙草專賣局關于加強對轉(zhuǎn)基因煙草監(jiān)控的通知》國煙科〔2003〕387號,對轉(zhuǎn)基因煙草進行監(jiān)控、檢測,嚴防煙草制品轉(zhuǎn)基因污染。

    已有文獻報道,隨著轉(zhuǎn)基因技術的不斷發(fā)展,越來越多的轉(zhuǎn)基因案例中采用了全新的啟動子、終止子和標記基因,使得現(xiàn)在常用的篩選元件覆蓋面減小,失去篩選的意義[20],因此,對煙草轉(zhuǎn)基因檢測而言,有必要對現(xiàn)有轉(zhuǎn)基因事件中所使用的遺傳元件進行分析,并根據(jù)這些信息再次篩選合適的篩查靶標。本文通過對229篇轉(zhuǎn)基因煙草研究中所用遺傳元件進行篩查,最終選定P-35S+T-NOS+NPT II+GUS+HPT+Bar+aadA這一組合為理想篩查組合,主要考慮以下因素:1)盡管部分煙草轉(zhuǎn)基因事件采用新的遺傳元件,但P-35S、T-NOS、NPT II三種元件在遺傳轉(zhuǎn)化研究中原理、技術最為成熟,因此,煙草轉(zhuǎn)化事件中使用三種元件其中之一分別作為啟動子、終止子或篩選標記基因的頻率仍然較高,且它們?yōu)閲H上較為流行的轉(zhuǎn)基因作物檢測靶標序列;2)在以上三種元件組合使用的基礎上,加入GUS、HPT、Bar三種遺傳元件能增加篩查覆蓋頻率;3)加入aadA基因能檢測到部分煙草葉綠體轉(zhuǎn)化事件,降低漏檢風險。

    本文首次統(tǒng)計并分析了近10年來國內(nèi)外文獻所報道的煙草轉(zhuǎn)基因事件,建立了煙草轉(zhuǎn)基因研究常用遺傳元件數(shù)據(jù)庫,構(gòu)建P-35S+T-NOS+NPT II+GUS+HPT+Bar+aadA 7種遺傳元件的最優(yōu)篩查組合策略,理論篩查覆蓋率為100%,并首次提 出將aadA基因納入篩查組合,防止部分煙草葉綠體轉(zhuǎn)化事件的漏檢。值得提出的是,我們的篩查組合是通過對煙草轉(zhuǎn)基因“已發(fā)生事件”的統(tǒng)計而篩選出,就目前而言是可行的,但隨著轉(zhuǎn)基因技術的不斷進步及發(fā)展, 該策略并不意味著對“將來發(fā)生事件”的檢測能達到100%。

    綜上,該篩查策略的提出,進一步完善了現(xiàn)有的轉(zhuǎn)基因檢測體系,為行業(yè)當前煙草轉(zhuǎn)基因的檢測提供了篩查依據(jù)。

    [1]李正風,劉勇,夏玉珍.黃瓜花葉病毒及抗病轉(zhuǎn)基因煙草研究進展[J].生物技術,2006,16(5):80-82.

    [2]吳明生,云曉敏,宋歌,等.轉(zhuǎn)基因玉米種子快速篩查方法研究與應用[J].生物技術通報,2013,(1):102-106.

    [3]Holden M J,Levine M,Scholdberg T,et al.The use of 35S and Tnos expression elements in the measurement of genetically engineered plant materials [J].Analytical and bioanalytical chemistry,2010,396(6):2175-2187.

    [4]Trapmann S,Emons H.Reliable GMO analysis [J].Analytical and bioanalytical chemistry,2005,381(1):72-74.

    [5]Tengs T,Zhang H,Holst-Jensen A,et al.Characterization of unknown genetic modifications using high throughput sequencing and computational subtraction [J].BMC biotechnology,2009,9(1):87-92.

    [6]張麗,武玉花,吳剛,等.轉(zhuǎn)基因油菜篩查檢測策略研究[J].中國油料作物學報,2012,34(1):74-81.

    [7]Van den Bulcke M,Lievens A,Barbau-Piednoir E,et al.A theoretical introduction to “Combinatory SYBR?Green qPCR Screening”,a matrix-based approach for the detection of materials derived from genetically modified plants [J].Analytical and bioanalytical chemistry,2010,396(6):211 3-2123.

    [8]Holst-Jensen A,Bertheau Y,de Loose M,et al.Detecting un-authorized genetically modi fied organisms (GMOs) and derived materials [J].Biotechnology advances,2012,30(6):1318-1335.

    [9]梁衛(wèi)紅,李莉,彭威風,等.水稻光敏色素相互作用因子基因OsPIL11的表達模式及其在光信號傳導中作用的初步分析[J].中國水稻科學,2012,26(3):255-260.

    [10]封偉,肖姍姍,常閃閃,等.超表達OsSsr1基因增強煙草耐鹽性[J].山東農(nóng)業(yè)大學學報:自然科學版,2012,43(1):12-17.

    [11]吳文俊,賈小霞,張金文,等.Chi和Bar基因雙價植物表達載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因煙草的初步檢測[J].甘肅農(nóng)業(yè)大學學報,2010,45(3):56-59.

    [12]陳桂敏,吳剛,武玉花,等.轉(zhuǎn) Barnase 基因無籽植物的研究[J].農(nóng)業(yè)生物技術學報,2012,20(2):113-120.

    [13]劉榮梅,李鳳蘭,胡國富,等.轉(zhuǎn)CBF3基因煙草的抗寒性研究[J].東北農(nóng)業(yè)大學學報,2011,42(11):119-123.

    [14]王奇峰,胡清泉,趙玥,等.光誘導和組成型啟動子控制檸檬酸合酶基因過量表達對轉(zhuǎn)基因煙草耐鋁性影響的比較[J].浙江大學學報(農(nóng)業(yè)與生命科學版),2011,1:31-39.

    [15]Waheed M T,Th?nes N,Müller M,et al.Transplastomic expression of a modi fied human papillomavirus L1 protein leading to the assembly of capsomeres in tobacco:a step towards cost-effective second-generation vaccines [J].Transgenic research,2011,20(2):271-282.

    [16]Mann D,Abercrombie L,Rudis M,et al.Very bright orange fluorescent plants:endoplasmic reticulum targeting of orange fluorescent proteins as visual reporters in transgenic plants [J].BMC biotechnology,2012,12(1):17-26.

    [17]管敏,崔洪志,等.啟動子驅(qū)動CrylA基因在煙草中特異性表達研究[J].作物學報,2008,34(4):565-570.

    [18]Wu Tingquan,Guo An,Zhao Yanying,et al.Ectopic expression of the rice lumazine synthase gene contributes to defense responses in transgenic tobacco [J].Phytopathology,2010,100(6):573-581.

    [19]Huang Xiaosan,Luo Tao,Fu Xingzhenget al.Cloning and molecular characterization of a mitogen-activated protein kinase gene from Poncirus trifoliata whose ectopic expression confers dehydration/drought tolerance in transgenic tobacco [J].Journal of experimental botany,2011,62(14):5191-5206.

    [20]Debode F,Janssen E,Berben G.Development of 10 new screening PCR assays for GMO detection targeting promoters (pFMV,pNOS,pSSuAra,pTA29,pUbi,pRice actin) and terminators (t35S,tE9,tOCS,tg7) [J].European Food Research and Technology,2013,236:659-669.

    [21]胡尚杰,吳剛,武玉花等.轉(zhuǎn)基因作物篩查用陽性質(zhì)粒分子的構(gòu)建及應用研究 [J].中國油料作物學報,2010,32(2):173-179.

    [22]Bindler G,Borne F D,Gadani Fet al.Task Force Genetically Modified Tobacco – Detection Methods [C]//CORESTA.1999.

    [23]中國國家標準化管理委員會,GB/T 24310-2009 《煙草及煙草制品 轉(zhuǎn)基因檢測方法》[S].北京:中國標準出版社,2009.

    [24]侯丙凱,陳正華.高等植物的質(zhì)體基因轉(zhuǎn)化[J].生物工程進展,2000,20(1):70-73.

    [25]丁玉梅,楊正安,周曉罡等.Bt基因轉(zhuǎn)入煙草葉綠體獲得轉(zhuǎn)化植株的研究[J].湖南農(nóng)業(yè)大學學報:自然科學版,2007,33:189-192.

    [26]王玉華,吳忠義,張秀海等.PHAs合酶基因轉(zhuǎn)化煙草葉綠體的研究[J].農(nóng)業(yè)生物技術學報,2006,14(2):213-218.

    [27]Lenzi P,Scotti N,Alagna F,et al.Translational fusion of chloroplast-expressed human papillomavirus type 16 L1 capsid p rotein enhances antigen accumulation in transplastomic tobacco [J].Transgenic research,2008,17(6):1091-1102.

    [28]Zambryski P,Joos H,Genetello C,et al.Ti plasmid vector for the introduction of D NA into plant cells without alteration of their normal regeneration capacity [J].The EMBO journal,1983,2(12):2143-2150.

    [29]胡平,姚國新,盛繼群.轉(zhuǎn)基因作物安全性研究進展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學,2006,34(16):3955-3956.

    [30]黃鈴,包巨南.轉(zhuǎn)基因技術的發(fā)展及其社會影響[J].化工時刊,2007,21(04):50-55.

    [31]章鎮(zhèn),孫愛君,房經(jīng)貴等.農(nóng)桿菌介導 rolC 基因轉(zhuǎn)化煙草植株的研究[J].南京農(nóng)業(yè)大學學報,2001,24(1):25-29.

    [32]徐宜民,時焦.轉(zhuǎn)基因煙草與生物制藥[J].世界農(nóng)業(yè),2002,279(7):44-46.

    [33]楊鐵釗,李欽奎,李偉.植物次生代謝與煙草香味物質(zhì)[J].中國煙草科學,2005,4:23-26.

    [34]李軼女,胡英考,沈桂芳.轉(zhuǎn)基因植物基因工程疫苗[J].生物技術通報,2002,2(4):11-15.

    Screening strategy of genetic elements used in transgenic study

    YU Jing1,2,ZHANG Xiaolian1,ZHAO Dan3,ZOU Jie1,ZHAO Jiehong1
    1 Key Laboratory of Molecular Genetics,Guizhou Tobacco Research Institute,Guiyang 550081,Guizhou,China;
    2 Guizhou Tongren Tobacco Leaf Redrying Co.,Ltd.,Tongren 554300,Guizhou,China;
    3 Guizhou Key Laboratory of Agricultural Bioengineering,Guizhou University,Guiyang 550025,Guizhou,China

    A transgenic tobacco database of routine genetic elements was established based on literature review of t ransgenic tobacco research in the last 10 years.Genetic elements that were commonly used in transgenic tobacco research were screened to reveal frequency of individual and combination of genetic elements.A combination of P-35S promoter,NPT II/HPT/Bar/aadA selective marker genes,GUS reporter gene and T-NOS te r minator as screening target elements can make screening rate of transgenic tobacco reach 100% in theory.Thus,an optimized screening s trategy for transgenic tobacco is being laid out.

    transgenic tobacco; genetic elements; transgenic screening

    10.3969/j.issn.1004-5708.2014.01.015

    TS413

    A

    1004-5708(2014)01-0078-06

    貴州省科學技術基金“富鉀基因發(fā)掘及無選擇標記轉(zhuǎn)基因煙草培育研究”(黔科合J字[2010]2251);中國煙草總公司貴州省公司科技項目“抗TMV富K轉(zhuǎn)基因煙草育種研究”(200910); 貴州省科技支撐計劃農(nóng)業(yè)攻關“轉(zhuǎn)基因烤煙檢測標準物質(zhì)和檢測技術研究及應用”(黔科合NY[2013]3020號)

    余婧(1983—),女,碩士,農(nóng)藝師,主要從事煙草轉(zhuǎn)基因檢測及煙草生物技術研究,Email:yujingbio@126.com

    趙杰宏(1978—),男,博士,副研究員,主要從事煙草生物技術研究,Email:zhaojiehong@126.com

    2013-05-30

    猜你喜歡
    轉(zhuǎn)基因元件煙草
    煙草具有輻射性?
    探秘轉(zhuǎn)基因
    學與玩(2022年10期)2022-11-23 08:32:00
    轉(zhuǎn)基因,你吃了嗎?
    煙草依賴的診斷標準
    QFN元件的返工指南
    煙草中茄酮的富集和應用
    天然的轉(zhuǎn)基因天然的轉(zhuǎn)基因“工程師”及其對轉(zhuǎn)基因食品的意蘊
    在新興產(chǎn)業(yè)看小元件如何發(fā)揮大作用
    寶馬i3高電壓元件介紹(上)
    Cu4簇合物“元件組裝”合成及其結(jié)構(gòu)與電催化作用
    国产真实乱freesex| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产大屁股一区二区在线视频| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 欧美黑人巨大hd| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲自偷自拍三级| 欧美色视频一区免费| 嫩草影院新地址| av在线天堂中文字幕| 亚洲自偷自拍三级| 欧美性感艳星| 丝袜美腿在线中文| 少妇人妻精品综合一区二区 | 五月玫瑰六月丁香| 欧美一区二区亚洲| 最近中文字幕高清免费大全6 | 性色avwww在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产精品一及| 国产三级中文精品| 欧美一区二区精品小视频在线| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久久午夜欧美精品| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲美女黄片视频| avwww免费| 亚洲最大成人中文| 最好的美女福利视频网| 久久精品人妻少妇| 国产免费av片在线观看野外av| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 国产国拍精品亚洲av在线观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 精品不卡国产一区二区三区| 日本黄大片高清| 精品不卡国产一区二区三区| 两个人的视频大全免费| 大型黄色视频在线免费观看| 久久中文看片网| 日韩强制内射视频| 69人妻影院| 丰满乱子伦码专区| 春色校园在线视频观看| 1024手机看黄色片| 久99久视频精品免费| 国产日本99.免费观看| 女人被狂操c到高潮| 亚洲黑人精品在线| 亚洲av熟女| 久久久久国内视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 在现免费观看毛片| 亚洲欧美激情综合另类| 国产视频内射| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲天堂国产精品一区在线| 精品一区二区三区av网在线观看| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲,欧美,日韩| 国产精品国产高清国产av| 动漫黄色视频在线观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 婷婷六月久久综合丁香| av在线天堂中文字幕| 深爱激情五月婷婷| 在线免费观看不下载黄p国产 | 亚洲av免费在线观看| 欧美黑人巨大hd| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 一本一本综合久久| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 日本成人三级电影网站| 亚洲综合色惰| 男人和女人高潮做爰伦理| 老女人水多毛片| 亚洲色图av天堂| 国产主播在线观看一区二区| 欧美黑人巨大hd| 日本在线视频免费播放| 免费在线观看影片大全网站| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 成人性生交大片免费视频hd| 午夜视频国产福利| 午夜福利18| 国产伦人伦偷精品视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 在线观看66精品国产| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 久久亚洲真实| 国产精品一区二区免费欧美| 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美在线一区亚洲| 日本在线视频免费播放| 国产爱豆传媒在线观看| 乱人视频在线观看| 欧美高清性xxxxhd video| h日本视频在线播放| 热99在线观看视频| 禁无遮挡网站| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产真实伦视频高清在线观看 | 成人特级黄色片久久久久久久| 精品乱码久久久久久99久播| 人妻少妇偷人精品九色| 欧美激情国产日韩精品一区| 久久久久久久久大av| 免费观看的影片在线观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 免费在线观看影片大全网站| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 久久精品国产亚洲网站| 一个人看视频在线观看www免费| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 久久亚洲真实| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产精品无大码| av视频在线观看入口| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 九色成人免费人妻av| 可以在线观看的亚洲视频| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 精品久久久久久,| 最近中文字幕高清免费大全6 | 日韩欧美精品v在线| 制服丝袜大香蕉在线| 色av中文字幕| 国产爱豆传媒在线观看| 一区二区三区四区激情视频 | 久久99热6这里只有精品| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 真人一进一出gif抽搐免费| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲真实伦在线观看| 观看美女的网站| 亚洲人成网站在线播| 99视频精品全部免费 在线| 五月玫瑰六月丁香| 久久久久性生活片| 免费看光身美女| 国产高清激情床上av| 日韩高清综合在线| 91狼人影院| 少妇被粗大猛烈的视频| 最近最新免费中文字幕在线| 国产精品久久电影中文字幕| 欧美三级亚洲精品| 久久久久久国产a免费观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 又黄又爽又免费观看的视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 韩国av在线不卡| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产精品,欧美在线| 午夜精品久久久久久毛片777| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 啪啪无遮挡十八禁网站| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 中亚洲国语对白在线视频| 午夜精品一区二区三区免费看| 午夜福利在线在线| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 99久久成人亚洲精品观看| 国产精品一区二区性色av| 欧美性猛交黑人性爽| 性欧美人与动物交配| av福利片在线观看| 国产一区二区激情短视频| 国产69精品久久久久777片| 少妇高潮的动态图| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲av不卡在线观看| 久久精品91蜜桃| 舔av片在线| 亚洲男人的天堂狠狠| 欧美日韩黄片免| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲天堂国产精品一区在线| 日本与韩国留学比较| 久久午夜福利片| 99精品在免费线老司机午夜| 欧美bdsm另类| 在线免费观看不下载黄p国产 | 久久久色成人| 亚洲最大成人中文| 国国产精品蜜臀av免费| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲电影在线观看av| 综合色av麻豆| 午夜久久久久精精品| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产高清有码在线观看视频| 黄色欧美视频在线观看| 日韩欧美精品v在线| 久久久久国内视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产成人福利小说| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 久久精品人妻少妇| 久久九九热精品免费| 91狼人影院| 美女黄网站色视频| 午夜爱爱视频在线播放| av天堂中文字幕网| 最近中文字幕高清免费大全6 | 搡女人真爽免费视频火全软件 | 干丝袜人妻中文字幕| 麻豆成人av在线观看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲精品一区av在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 尾随美女入室| 免费高清视频大片| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 最近在线观看免费完整版| 免费看光身美女| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产单亲对白刺激| 欧美一区二区精品小视频在线| 69av精品久久久久久| 黄色欧美视频在线观看| 国产不卡一卡二| 国产人妻一区二区三区在| 欧美不卡视频在线免费观看| 欧美性猛交黑人性爽| 直男gayav资源| 神马国产精品三级电影在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| .国产精品久久| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 亚洲第一电影网av| 国产一区二区三区av在线 | 丝袜美腿在线中文| 亚洲无线观看免费| 亚洲内射少妇av| 欧美高清性xxxxhd video| 日韩人妻高清精品专区| 日本一二三区视频观看| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲av一区综合| 亚洲在线观看片| 成人三级黄色视频| 麻豆成人午夜福利视频| 精品不卡国产一区二区三区| av视频在线观看入口| 99精品在免费线老司机午夜| 美女黄网站色视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 午夜福利成人在线免费观看| 日日啪夜夜撸| 能在线免费观看的黄片| 亚洲第一区二区三区不卡| 一夜夜www| 日韩一区二区视频免费看| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 午夜福利欧美成人| 日本黄色片子视频| 亚洲专区中文字幕在线| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲色图av天堂| 嫩草影院精品99| 亚洲在线自拍视频| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| av在线蜜桃| 久久久久久久精品吃奶| 中文字幕高清在线视频| 88av欧美| 国产av一区在线观看免费| av中文乱码字幕在线| 午夜精品在线福利| 一级黄色大片毛片| 国产精品女同一区二区软件 | 91在线精品国自产拍蜜月| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 一进一出好大好爽视频| 欧美色欧美亚洲另类二区| 日本黄色视频三级网站网址| 制服丝袜大香蕉在线| 可以在线观看毛片的网站| 一进一出好大好爽视频| 欧美国产日韩亚洲一区| 午夜福利欧美成人| 一级黄片播放器| 999久久久精品免费观看国产| 成人午夜高清在线视频| 国产成人一区二区在线| 国产一区二区三区在线臀色熟女| a级一级毛片免费在线观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 99热这里只有精品一区| 五月伊人婷婷丁香| 久久草成人影院| 日本免费一区二区三区高清不卡| 久久久国产成人免费| 在线a可以看的网站| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 免费在线观看影片大全网站| 一本久久中文字幕| 久久香蕉精品热| 啪啪无遮挡十八禁网站| 看免费成人av毛片| 亚洲av熟女| 尾随美女入室| 深爱激情五月婷婷| 国产精品不卡视频一区二区| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 免费在线观看日本一区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲天堂国产精品一区在线| 精品一区二区免费观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 51国产日韩欧美| 国产精品久久久久久久电影| 91久久精品国产一区二区成人| av在线亚洲专区| 有码 亚洲区| 精品久久久噜噜| 丰满的人妻完整版| 在线播放国产精品三级| 热99在线观看视频| 亚洲第一电影网av| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 免费看av在线观看网站| 国产一区二区三区av在线 | 国产亚洲av嫩草精品影院| 少妇高潮的动态图| 天美传媒精品一区二区| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 18+在线观看网站| 国产精品三级大全| 日韩一区二区视频免费看| 国产亚洲91精品色在线| 日本三级黄在线观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久久久国产成人精品二区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 又粗又爽又猛毛片免费看| 麻豆国产av国片精品| 久久精品91蜜桃| 亚洲va在线va天堂va国产| 白带黄色成豆腐渣| 午夜福利在线观看吧| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲国产精品成人综合色| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 搡老妇女老女人老熟妇| 天天一区二区日本电影三级| 国产高清有码在线观看视频| 成人国产综合亚洲| 欧美黑人巨大hd| 成人国产综合亚洲| videossex国产| 国产乱人伦免费视频| 毛片一级片免费看久久久久 | 亚洲精品国产成人久久av| 免费人成在线观看视频色| 国产av不卡久久| 国内精品久久久久精免费| 99热只有精品国产| 99热这里只有是精品50| 亚洲精品色激情综合| 久久国产精品人妻蜜桃| 在线免费观看的www视频| 日本黄色片子视频| 一个人看的www免费观看视频| 精品不卡国产一区二区三区| 在线a可以看的网站| 久久久久久国产a免费观看| 99热这里只有是精品在线观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 久久99热这里只有精品18| 能在线免费观看的黄片| 国产黄片美女视频| 国产亚洲91精品色在线| 精品日产1卡2卡| 亚洲国产高清在线一区二区三| 欧美一区二区国产精品久久精品| 精品日产1卡2卡| 国产高潮美女av| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 联通29元200g的流量卡| 精品久久久久久久久亚洲 | 久久久久久久久久成人| 国产精品,欧美在线| 老司机午夜福利在线观看视频| av.在线天堂| 搡老妇女老女人老熟妇| 真人做人爱边吃奶动态| avwww免费| 99热这里只有精品一区| 久久久久久久久大av| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国内精品久久久久精免费| 麻豆国产97在线/欧美| 国产欧美日韩精品一区二区| av在线天堂中文字幕| 伦精品一区二区三区| 一区二区三区四区激情视频 | 人人妻人人看人人澡| 亚洲无线在线观看| 免费看光身美女| 欧美激情在线99| 看十八女毛片水多多多| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 好男人在线观看高清免费视频| 一区二区三区高清视频在线| 99热6这里只有精品| 日韩欧美精品v在线| 婷婷丁香在线五月| 婷婷六月久久综合丁香| 天堂网av新在线| 久久久久久久午夜电影| 国产精品亚洲美女久久久| 一夜夜www| 伦理电影大哥的女人| 日韩高清综合在线| 悠悠久久av| 亚洲四区av| 又粗又爽又猛毛片免费看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产精品无大码| 成人亚洲精品av一区二区| 精品国产三级普通话版| 国产高清三级在线| 欧美一区二区国产精品久久精品| 不卡视频在线观看欧美| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 免费av不卡在线播放| 日韩高清综合在线| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲成a人片在线一区二区| 少妇人妻一区二区三区视频| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 午夜日韩欧美国产| 成人午夜高清在线视频| 十八禁网站免费在线| 欧美最黄视频在线播放免费| 欧美一区二区亚洲| 国产精品国产高清国产av| 97热精品久久久久久| 我的老师免费观看完整版| 国产精品一区www在线观看 | 又爽又黄a免费视频| 亚洲18禁久久av| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 我要搜黄色片| 在线观看66精品国产| 最近在线观看免费完整版| 久久欧美精品欧美久久欧美| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 美女黄网站色视频| 国产在线男女| 欧美性感艳星| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 99久久精品国产国产毛片| 久久热精品热| 免费看av在线观看网站| 色综合亚洲欧美另类图片| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 听说在线观看完整版免费高清| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 听说在线观看完整版免费高清| 国产欧美日韩精品一区二区| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲中文日韩欧美视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 床上黄色一级片| 国产伦在线观看视频一区| 欧美zozozo另类| 国产极品精品免费视频能看的| bbb黄色大片| 日本色播在线视频| 级片在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 日韩精品中文字幕看吧| 给我免费播放毛片高清在线观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲男人的天堂狠狠| 久久久久久久久大av| 国产欧美日韩精品一区二区| 搡老妇女老女人老熟妇| 动漫黄色视频在线观看| 免费av不卡在线播放| 中文字幕熟女人妻在线| 免费无遮挡裸体视频| 日韩亚洲欧美综合| 成人三级黄色视频| 国产 一区 欧美 日韩| 久久久精品欧美日韩精品| 伦理电影大哥的女人| 久9热在线精品视频| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 又爽又黄a免费视频| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 亚洲成人久久爱视频| av国产免费在线观看| 精品久久久噜噜| 偷拍熟女少妇极品色| 熟女电影av网| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 色综合亚洲欧美另类图片| 看片在线看免费视频| 免费搜索国产男女视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 成年人黄色毛片网站| 久久精品91蜜桃| 午夜福利视频1000在线观看| 日本成人三级电影网站| 欧美成人a在线观看| 一个人看视频在线观看www免费| 俄罗斯特黄特色一大片| 联通29元200g的流量卡| 亚洲av美国av| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲18禁久久av| 国产综合懂色| 久久久成人免费电影| 国产精品久久电影中文字幕| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 窝窝影院91人妻| 亚洲国产欧美人成| 成人精品一区二区免费| 国产精品爽爽va在线观看网站| 在线国产一区二区在线| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 中文字幕av在线有码专区| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 91在线观看av| 男女之事视频高清在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 又紧又爽又黄一区二区| 春色校园在线视频观看| 亚洲一区二区三区色噜噜| 亚洲成人久久爱视频| 午夜福利在线在线| 欧美丝袜亚洲另类 | x7x7x7水蜜桃| 国产男靠女视频免费网站| 国产69精品久久久久777片| 少妇被粗大猛烈的视频| 在线播放国产精品三级| 色吧在线观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产男人的电影天堂91| 中文字幕av在线有码专区| 国产高清有码在线观看视频| 国产精品1区2区在线观看.| 国产精品久久视频播放| 三级国产精品欧美在线观看| 国产麻豆成人av免费视频| 色在线成人网| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久久久久久伊人网av| 淫妇啪啪啪对白视频| 波多野结衣高清作品| 99久久精品一区二区三区| 深爱激情五月婷婷| 亚洲欧美日韩东京热| 久久久久久久精品吃奶| 小说图片视频综合网站| 俺也久久电影网| 12—13女人毛片做爰片一| 一进一出抽搐动态| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 成人国产麻豆网| 九色国产91popny在线| a级毛片免费高清观看在线播放| 波多野结衣巨乳人妻| 日本a在线网址| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 在线观看午夜福利视频| 国产熟女欧美一区二区| 日韩 亚洲 欧美在线| av在线观看视频网站免费| 色av中文字幕| 久久亚洲精品不卡| 国产色爽女视频免费观看| 久久精品综合一区二区三区| 老司机深夜福利视频在线观看| 天天躁日日操中文字幕| 99国产极品粉嫩在线观看| 天堂网av新在线| 亚洲国产精品成人综合色| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲av成人精品一区久久| 夜夜爽天天搞| 国产男靠女视频免费网站| 联通29元200g的流量卡| 日本 欧美在线|