黃連解毒散超微粉治療雞大腸桿菌病的效果

馬霞++張國祖++郭振環(huán)

摘要：觀察了黃連解毒散超微粉對人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的治療效果。通過人工誘發(fā)建立雞大腸桿菌病模型，用黃連解毒散超微粉進(jìn)行治療，同時設(shè)黃連解毒散散劑對照和氟苯尼考西藥對照，觀察臨床癥狀、體質(zhì)量變化及血清超氧化物歧化酶活性和內(nèi)毒素含量變化。結(jié)果表明，黃連解毒散超微粉、黃連解毒散散劑和西藥氟苯尼考的治愈率和有效率差異不顯著；黃連解毒散超微粉和黃連解毒散散劑降低血清內(nèi)毒素含量，提高超氧化物歧化酶活性，增加體質(zhì)量的作用顯著優(yōu)于西藥氟苯尼考。黃連解毒散超微粉對人工雞大腸桿菌病有很好的療效，與其散劑比較，使用劑量可以節(jié)省一半。

關(guān)鍵詞：黃連解毒散；超微粉；雞；大腸桿菌??；療效；劑量

中圖分類號： S858.315.1+2文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2014）10-0204-03

收稿日期：2013-12-21

基金項目：河南省重點科技攻關(guān)項目（編號：122102110185、122102110224）；河南省科技成果轉(zhuǎn)化項目（編號：132201310002）。

作者簡介：馬霞（1978—），女，山東泰安人，博士，講師，主要從事中獸藥新制劑研究。 E-mail：maxia801010@126.com。雞大腸桿菌病的發(fā)病率和死亡率很高，不同品種不同日齡的雞均可發(fā)病，給養(yǎng)雞業(yè)造成極大的損失[1-3]?？咕帉υ摬‰m有一定的治療和預(yù)防作用，但由于其反復(fù)和大量應(yīng)用，極易產(chǎn)生抗藥性，而且易造成藥物殘留影響食品安全[4]。中藥具有療效可靠、毒副作用小、不易產(chǎn)生有害殘留等優(yōu)勢[5]，河南省康星藥業(yè)股份有限公司研制開發(fā)了黃連解毒散超微粉，本試驗通過人工誘發(fā)雞大腸桿菌病，然后用黃連解毒散超微粉進(jìn)行治療，旨在確認(rèn)該藥對雞大腸桿菌病的療效，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗藥物

黃連解毒散超微粉，河南省康星藥業(yè)有限公司制備，規(guī)格：100 g；批號：11110502；黃連解毒散，河南省康星藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品，規(guī)格：每袋100 g；批號：12060101；氟苯尼考粉，河南省康星藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，規(guī)格：100 g ∶10 g；批號：11110101。

1.2檢測試劑

內(nèi)毒素和超氧化物歧化酶ELISA檢測試劑盒，R&D Systems Inc.，Minneapolis公司產(chǎn)品，批號分別為12-03和12-01。

1.3主要儀器

酶標(biāo)儀，離心機(jī)，超凈工作臺，分析天平，恒溫?fù)u床等。

1.4攻毒菌種與人工發(fā)病預(yù)試驗

雞大腸桿菌O78株（C83890），購自中國獸藥監(jiān)察所。

菌種復(fù)活與鑒定：先將菌種接種到GN增菌液中，放置 37 ℃ 恒溫?fù)u床（180 r/min）培養(yǎng)8 h，然后無菌操作接種于麥康凱瓊脂平板上，37 ℃培養(yǎng)16 h，呈邊緣整齊、光滑、隆起的紅色菌落。從麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上挑取單個的菌落用革蘭氏染色后，在油鏡下觀察，有許多短桿狀、單個散落的紅色細(xì)菌。

菌種培養(yǎng)：挑取經(jīng)鑒定過的單個菌落接種于GN增菌液中，放置37 ℃恒溫?fù)u床（180 r/min）培養(yǎng)8 h。然后無菌操作接種于麥康凱瓊脂平板上，37 ℃培養(yǎng)16 h。4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

攻毒預(yù)試：挑取麥康凱瓊脂平板上單個菌落于GN增菌液中放置37 ℃恒溫?fù)u床（180 r/min）培養(yǎng)8 h。用麥?zhǔn)媳葷岱ㄕ{(diào)整菌液濃度為1×107 CFU/mL、1×108 CFU/mL、1×109 CFU/mL、1×1010 CFU/mL和1×1011 CFU/mL；取60日齡羅曼蛋公雞180羽隨機(jī)均分為6組，每組30羽?？瞻讓φ战M隔離飼養(yǎng)并胸肌注射0.5 mL GN增菌液。其余5組，分別用稀釋的大腸桿菌菌液胸肌注射0.5mL攻毒。各組死亡率在0～100%之間（表1），因正式試驗時需要觀察用藥效果，死亡率太高不利于觀察用藥效果，死亡率太低又不利于比較不同劑量的藥物治療效果，所以選擇1×109 CFU/mL菌液濃度（死亡率為36.7%）為正式試驗的攻毒菌液濃度。

2結(jié)果

2.1總體療效

2.4試驗前后體質(zhì)量變化

在試驗開始時，各組間體質(zhì)量差異不顯著（P>0.05）。 在試驗結(jié)束時（28 d），各攻毒組體質(zhì)量顯著低于空白對照組，黃連解毒散超微粉組和黃連解毒散散劑對照組間的體質(zhì)量差異不顯著（P>0.05），但顯著高于西藥對照組，西藥對照組顯著高于陽性對照組（P<0.05） （表6）。

表6各組體質(zhì)量的變化

組別體質(zhì)量（g/羽）0 d28 d黃連解毒散超微粉組875±30a1 137±35b黃連解毒散散劑對照875±25a1 140±39b西藥氟苯尼考對照868±27a1 080±33c陽性對照861±26a995±37d空白對照867±28a1 255±38a注：同列數(shù)據(jù)后標(biāo)不同字母者差異顯著（P<0.05）。

3討論

本試驗結(jié)果顯示，黃連解毒散超微粉組、黃連解毒散散劑對照組和西藥對照組的治愈率和有效率差異不顯著，但顯著高于陽性對照組；黃連解毒散超微粉和黃連解毒散散劑降低血清內(nèi)毒素含量、提高超氧化物歧化酶濃度、增加體質(zhì)量作用的效果差異不顯著，但顯著優(yōu)于西藥對照組。表明，黃連解毒散超微粉對雞大腸桿菌病有較好的療效，與其粉散劑比較，達(dá)到治療等效的使用劑量可以減少一半。

黃連解毒散為《中華人民共和國獸藥典》2010版二部中收錄方劑，由黃連、黃芩、黃柏、梔子四味中藥組方而成。具有瀉火解毒之功效。主治三焦實熱，瘡黃腫毒。方中黃連瀉上焦心火兼瀉中焦火，為君藥；黃芩瀉上焦肺火，為臣藥；黃柏瀉下焦腎火，為佐藥；梔子通瀉三焦之火，導(dǎo)熱下行從膀胱而出，為使藥[8]。孫守芳采用給家兔靜脈注射大腸桿菌內(nèi)毒素的方法成功復(fù)制中醫(yī)溫病氣分證模型，該氣分證階段是溫病衛(wèi)氣營血傳變過程中期階段，此時正盛邪實，正邪相爭激烈，三焦壯熱。用白虎湯、黃連解毒散等清寒方劑進(jìn)行治療，取得了很好的效果，并且發(fā)現(xiàn)清寒方劑具有清除氣分證模型家兔血清內(nèi)毒素和提高超氧化物歧化酶濃度的作用[9]。

本試驗中我們用大腸桿菌攻毒雛雞后，雛雞表現(xiàn)為病雞精神沉郁，羽毛松亂，食欲不振，呼吸困難，喘氣，呼吸鑼音，張口伸頸，拉黃白色稀糞。剖檢變化為，肝臟腫大，有時見到淡黃色壞死灶，肝包膜略有增厚，不透明呈黃白色，易剝脫。心包增厚不透明，心包積有淡黃色液體；氣囊炎也是常見的變化，胸、腹等氣囊囊壁增厚呈灰黃色。病程經(jīng)歷氣分證階段，最后至營血分證而死亡。應(yīng)用黃連解毒散進(jìn)行治療就是對三焦實熱的氣分證進(jìn)行對證治療，把好氣分關(guān)，防止傳入營血分而導(dǎo)致雛雞更多死亡。

超微粉碎拔術(shù)是20世紀(jì)70年代為適應(yīng)高科技的發(fā)展而形成的一種新技術(shù)，在發(fā)達(dá)國家被廣泛應(yīng)用于冶金、食品、醫(yī)藥、化妝品、航天航空等國民經(jīng)濟(jì)部門及軍事領(lǐng)域。中藥超微粉碎技術(shù)又稱中藥細(xì)胞級粉碎技術(shù)，通過超微粉碎，中藥材的顆粒從傳統(tǒng)工藝的60目左右提高到300目以上，粉碎后中藥粒子的中心粒徑在5～10 μm。這項新技術(shù)應(yīng)用于不同質(zhì)地的中藥材，通過細(xì)胞破壁打破了細(xì)胞壁的屏障可使其中有效成分直接暴露出來，從而使藥物起效更加迅速、充分[10-11]。本試驗結(jié)果表明，1%劑量黃連解毒散超微粉與2%劑量黃連解毒散散劑對人工攻毒模型雞大腸桿菌病的治療效果差異不顯著，這意味著黃連解毒散經(jīng)超微粉碎后用于疾病防治可以節(jié)省一半的用藥量。

參考文獻(xiàn)：

[1]程漢，胡新崗，曹軍平. 雞大腸桿菌病病原的分離鑒定及藥敏試驗[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（3）：172-174.

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[3]孟志敏，牛小飛，李連缺，等. 甲砜霉素可溶性粉對人工感染雞大腸桿菌病的藥效學(xué)研究[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，51（1）：120-122.

[4]周軍，李紅斌，李睿鴻. 濫用抗生素對養(yǎng)豬業(yè)的危害及應(yīng)對措施[J]. 當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè)，2011（6）：44-47.

[5]溫偉，呂金良，高振偉，等. 淺談現(xiàn)代中獸藥的發(fā)展前景[J]. 四川畜牧獸醫(yī)，2009，36（12）：12-14.

[6]王效田，孔祥峰，夏明龍，等. 南京郊區(qū)奶牛乳房炎病原菌分離鑒定及藥敏試驗[J]. 畜牧與獸醫(yī)，2004，36（11）：6-8.

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本試驗中我們用大腸桿菌攻毒雛雞后，雛雞表現(xiàn)為病雞精神沉郁，羽毛松亂，食欲不振，呼吸困難，喘氣，呼吸鑼音，張口伸頸，拉黃白色稀糞。剖檢變化為，肝臟腫大，有時見到淡黃色壞死灶，肝包膜略有增厚，不透明呈黃白色，易剝脫。心包增厚不透明，心包積有淡黃色液體；氣囊炎也是常見的變化，胸、腹等氣囊囊壁增厚呈灰黃色。病程經(jīng)歷氣分證階段，最后至營血分證而死亡。應(yīng)用黃連解毒散進(jìn)行治療就是對三焦實熱的氣分證進(jìn)行對證治療，把好氣分關(guān)，防止傳入營血分而導(dǎo)致雛雞更多死亡。

超微粉碎拔術(shù)是20世紀(jì)70年代為適應(yīng)高科技的發(fā)展而形成的一種新技術(shù)，在發(fā)達(dá)國家被廣泛應(yīng)用于冶金、食品、醫(yī)藥、化妝品、航天航空等國民經(jīng)濟(jì)部門及軍事領(lǐng)域。中藥超微粉碎技術(shù)又稱中藥細(xì)胞級粉碎技術(shù)，通過超微粉碎，中藥材的顆粒從傳統(tǒng)工藝的60目左右提高到300目以上，粉碎后中藥粒子的中心粒徑在5～10 μm。這項新技術(shù)應(yīng)用于不同質(zhì)地的中藥材，通過細(xì)胞破壁打破了細(xì)胞壁的屏障可使其中有效成分直接暴露出來，從而使藥物起效更加迅速、充分[10-11]。本試驗結(jié)果表明，1%劑量黃連解毒散超微粉與2%劑量黃連解毒散散劑對人工攻毒模型雞大腸桿菌病的治療效果差異不顯著，這意味著黃連解毒散經(jīng)超微粉碎后用于疾病防治可以節(jié)省一半的用藥量。

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本試驗中我們用大腸桿菌攻毒雛雞后，雛雞表現(xiàn)為病雞精神沉郁，羽毛松亂，食欲不振，呼吸困難，喘氣，呼吸鑼音，張口伸頸，拉黃白色稀糞。剖檢變化為，肝臟腫大，有時見到淡黃色壞死灶，肝包膜略有增厚，不透明呈黃白色，易剝脫。心包增厚不透明，心包積有淡黃色液體；氣囊炎也是常見的變化，胸、腹等氣囊囊壁增厚呈灰黃色。病程經(jīng)歷氣分證階段，最后至營血分證而死亡。應(yīng)用黃連解毒散進(jìn)行治療就是對三焦實熱的氣分證進(jìn)行對證治療，把好氣分關(guān)，防止傳入營血分而導(dǎo)致雛雞更多死亡。

超微粉碎拔術(shù)是20世紀(jì)70年代為適應(yīng)高科技的發(fā)展而形成的一種新技術(shù)，在發(fā)達(dá)國家被廣泛應(yīng)用于冶金、食品、醫(yī)藥、化妝品、航天航空等國民經(jīng)濟(jì)部門及軍事領(lǐng)域。中藥超微粉碎技術(shù)又稱中藥細(xì)胞級粉碎技術(shù)，通過超微粉碎，中藥材的顆粒從傳統(tǒng)工藝的60目左右提高到300目以上，粉碎后中藥粒子的中心粒徑在5～10 μm。這項新技術(shù)應(yīng)用于不同質(zhì)地的中藥材，通過細(xì)胞破壁打破了細(xì)胞壁的屏障可使其中有效成分直接暴露出來，從而使藥物起效更加迅速、充分[10-11]。本試驗結(jié)果表明，1%劑量黃連解毒散超微粉與2%劑量黃連解毒散散劑對人工攻毒模型雞大腸桿菌病的治療效果差異不顯著，這意味著黃連解毒散經(jīng)超微粉碎后用于疾病防治可以節(jié)省一半的用藥量。

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