2012～2013年杭州市蕭山區(qū)手足口病病原譜及臨床特征分析＊

陳亮，李儀（浙江省杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 311200）

手足口病（HFMD）是由多種腸道病毒（EV）引起的常見傳染病，好發(fā)于嬰幼兒，可引起發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹等癥狀，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致心肌炎、無菌性腦膜腦炎等并發(fā)癥［1］。HFMD 常見病原體包括EV71及柯薩奇病毒（Cox）A4、A5、A16、B1、B3等，其中以EV71和CoxA16最為常見［2－3］。EV71能夠引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變，在亞太地區(qū)的流行呈上升趨勢；CoxA16則極易導(dǎo)致心肌炎、心包炎等疾?。?－6］。本研究對(duì)208例HFMD 疑似患兒實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測結(jié)果和各類臨床資料進(jìn)行了回顧性分析，旨在了解杭州地區(qū)HFDM 病原譜及臨床特征。

1 資料與方法

1.1 一般資料2012年5月至2013年7月本院就診的HFDM 疑似患兒208例，男116例、女92例，年齡10個(gè)月至7歲，平均（2.65±1.56）歲。

1.2 試劑和儀器 Qiagen公司QIAamp病毒RNA 小量提取試劑盒，江蘇默樂生物科技有限公司熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法（RT－PCR）EV71、CA16及通用型EV 核酸檢測試劑盒；美國ABI公司7500型PCR 擴(kuò)增儀。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集208例患兒共采集標(biāo)本253份，包括咽拭子標(biāo)本45份、糞便標(biāo)本208份。

1.3.2 RNA 提取按照試劑盒說明書的要求提取標(biāo)本RNA。RNA 提取液終體積為50μL，－80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 熒光定量RT－PCR 檢測熒光定量RT－PCR 反應(yīng)體系：RT－PCR緩沖液12.5μL，Taq 酶0.5μL，反轉(zhuǎn)錄酶0.5μL，引物和探針各6.5μL，RNA 核酸提取液5μL。反應(yīng)條件：45℃15min，95℃2min，94℃10s、60℃10s循環(huán)40次。每批臨床標(biāo)本檢測的同時(shí)檢測試劑盒自帶質(zhì)控品，質(zhì)控品檢測結(jié)果均在控制范圍內(nèi)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同性別和年齡患兒病原體檢測結(jié)果分析病原體檢測結(jié)果顯示，EV 檢出率為83.17%（173／208），其中EV71所占比例最高［55.49%（96／173）］，其他EV 亞型及CoxA16分別占31.21%（54／173）和13.29%（23／173）。男、女性患兒EV檢出率分別為81.03%（94／116）和85.87%（79／92），EV71所占比例分別為58.51%（55／94）和51.90%（41／79），CoxA16所占比例分別為11.70%（11／94）和15.19%（12／79），其他EV亞型所占比例分別為29.79%（28／94）和32.91%（26／79）；男、女性患兒EV 檢出率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但CoxA16在不同性別患兒中的所占比例均最低（P＜0.05）。5歲及其以下和5歲以上患兒EV 檢出率分別為86.81%（158／182）和57.69%（15／26），EV71所占比例分別為55.70%（88／158）和33.33%（5／15），其他EV 亞型所占比例分別為30.38%（48／158）和60.00%（9／15），CoxA16所占比例分別為13.92%（22／158）和6.67%（1／15）；CoxA16在不同年齡患兒中的所占比例均最低（P＜0.05）。

2.2 不同臨床癥狀患兒病原體檢測結(jié)果分析208例EV 陽性患兒中，多數(shù)患兒出現(xiàn)發(fā)熱癥狀，包括發(fā)熱伴皰疹112例、發(fā)熱伴嘔吐36例、發(fā)熱伴神經(jīng)系統(tǒng)癥狀26例，其他癥狀34例。不同臨床癥狀患兒RT－PCR檢測結(jié)果見表1。

表1 不同臨床癥狀患兒RT－PCR檢測結(jié)果（n）

2.3 不同類型標(biāo)本病原體檢測結(jié)果分析208份糞便標(biāo)本中，EV 檢出率為72.12%（150／208），EV71所占比例最高［54.00%（81／150），P＜0.05］，CoxA16和其他EV 亞型所占比例分別為14.00%（21／150）和32.00%（48／150）。45份咽拭子標(biāo)本中，EV 檢出率為51.11%（23／45），EV71所占比例最高［65.22%（15／23），P＜0.05］，其他EV 亞型和CoxA16所占比例分別為26.09%（6／23）和8.70%（2／23）。糞便標(biāo)本EV 檢出率高于咽拭子標(biāo)本（P＜0.05）。

3 討論

HFMD 是由多種EV 引起的小兒常見傳染病，常見病原體包括Cox、EV68～71型、?？刹《?、脊髓灰質(zhì)炎病毒等，其中以EV71和CoxA16最為常見［2－3，7］。本研究結(jié)果顯示，208例HFMD 疑似患兒以EV71感染為主，其他EV 亞型（即非EV71和非CoxA16）感染所占比例高于CoxA16，并與國內(nèi)其他地區(qū)的報(bào)道基本一致［8－9］，表明EV71仍是杭州地區(qū)HFMD患兒的最主要病原體，其他EV 亞型感染率則有所升高，值得密切關(guān)注。本研究結(jié)果還顯示，HFMD 疑似患兒以5歲及其以下兒童為主；5歲及其以下患兒EV71檢出率高于CoxA16和其他EV 亞型，而5歲以上患兒其他EV 亞型檢出百分比最高；本研究中其他EV 亞型檢出率高于文獻(xiàn)［10］報(bào)道，但與文獻(xiàn)［11］報(bào)道基本一致。

HFMD 的臨床診斷主要依賴于疾病的臨床癥狀。本研究結(jié)果表明，發(fā)熱伴皰疹是HFMD 最為主要的臨床癥狀，而EV71是引起發(fā)熱伴皰疹的主要病原體，CoxA16相對(duì)較少。HFMD 病原體主要通過糞－口和（或）密切接觸傳播，患者咽拭子和糞便標(biāo)本中均可檢出EV71、CoxA16和其他EV 亞型。Ooi等［12］的研究表明，HFMD 患者不同類型臨床標(biāo)本EV 檢出率有著一定的差異。本研究中，HFMD 患兒咽拭子和糞便標(biāo)本均檢出EV，糞便標(biāo)本EV71檢出率高于咽拭子標(biāo)本，但咽拭子和糞便標(biāo)本CoxA16和其他EV 亞型檢出率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明杭州地區(qū)HFMD 患兒EV71感染率較高，與國內(nèi)相關(guān)報(bào)道存在一定差異［9－11］。

不同地區(qū)及同一地區(qū)不同年份間HFMD 發(fā)病率存在一定的差異，不同年齡HFMD 患兒、不同類型標(biāo)本各種HFMD 相關(guān)病原體的檢測結(jié)果也存在一定的差異。因此，需要根據(jù)HFMD 患兒的病情，采集合適類型的標(biāo)本類型進(jìn)行相關(guān)病毒的檢測和分型。

目前尚沒有可用于HFMD 治療的特效抗病毒藥物。因此，加強(qiáng)對(duì)HFMD 病原體的檢測和分型，實(shí)現(xiàn)疾病的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，對(duì)于預(yù)防和控制HFMD 的流行至關(guān)重要。

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