腎復(fù)寧顆粒抑制5/6腎切除CRF大鼠腎組織α－SMA表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究＊

徐軍建 蘇衍進(jìn) 曹君一 陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院（咸陽712000）

△陜西中醫(yī)學(xué)院（咸陽712046）

▲山西省大同市中醫(yī)醫(yī)院（大同037000）

慢性腎功能衰竭（CRF）簡稱慢性腎衰，是指由各種原因引起腎臟進(jìn)行性損害并持續(xù)性惡化、造成腎單位被嚴(yán)重破壞、腎實(shí)質(zhì)發(fā)生不可逆的損害，導(dǎo)致機(jī)體在代謝廢物的排泄和調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)及酸堿平衡等方面發(fā)生紊亂的一種臨床綜合征。腎纖維化是慢性腎衰竭發(fā)生及發(fā)展的共同途徑，它包括腎小管萎縮、腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化，是各種腎臟病進(jìn)展到終末期呈現(xiàn)的基本病理變化。因此，抗腎纖維化是治療慢性腎衰竭的最佳途徑。近年來，抗腎間質(zhì)纖維化治療已成為慢性腎臟病的研究熱點(diǎn)。西醫(yī)對腎纖維化治療的研究很多，多運(yùn)用血管緊張素受體拮抗劑和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑及醛固酮受體拮抗劑，如他汀類降脂藥、螺內(nèi)酯等，經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究和臨床觀察證實(shí)其對腎臟有一定的抗纖維化作用，但臨床療效并不十分理想。

我們經(jīng)文獻(xiàn)檢索，發(fā)現(xiàn)國外對中藥抗腎間質(zhì)纖維化的研究極少，國內(nèi)學(xué)者在中醫(yī)藥防治腎纖維化方面已經(jīng)進(jìn)行了大量探索性研究，發(fā)現(xiàn)了具有抗腎間質(zhì)纖維化作用的許多單味中藥、中藥提取物及中藥復(fù)方，體現(xiàn)出中醫(yī)藥在防治腎間質(zhì)纖維化方面的優(yōu)勢和特色。

筆者經(jīng)過長期臨床實(shí)踐和文獻(xiàn)研究，總結(jié)出了腎復(fù)寧顆粒（黃芪、丹參、當(dāng)歸、大黃），主要功效為益氣活血、降濁排毒，針對慢性腎衰竭氣虛血瘀，濁毒內(nèi)蘊(yùn)的病機(jī)特點(diǎn)，此方寒熱偏性不明顯，藥性平和，廣泛適用于慢性腎衰竭的各個(gè)證型，經(jīng)臨床觀察對慢性腎衰竭具有很好的治療效果。為探討上述方藥作用機(jī)理，具體實(shí)驗(yàn)研究如下：

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康SD雄性大鼠75只，由西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 腎復(fù)寧顆粒：組成為黃芪、丹參、當(dāng)歸、大黃，比例為6：6：2：1。上方藥物由陜西康惠制藥股份有限公司制備。

1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑 10%多聚甲醛溶液；HE染色試劑；Masson染色試劑；兔抗鼠α－SMA抗體：bs－0189R；免疫組化染色試劑盒：SP－0023。

1.4 方 法 根據(jù)文獻(xiàn)制作5/6腎切除大鼠CRF模型［1］。術(shù)后將手術(shù)組大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型對照組、腎復(fù)寧顆粒大劑量組、腎復(fù)寧顆粒中劑量組、腎復(fù)寧顆粒小劑量組，每組各15只。造模4周后，對小、中、大劑量分別給予腎復(fù)寧顆粒3g/（kg·d）、6g/（kg·d）、9g/（kg·d）開始灌胃，假手術(shù)組和模型對照組分別予以4mL生理鹽水灌胃。共干預(yù)8周，之后處死大鼠，測定血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）及腎組織中α－SMA的表達(dá)水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 腎復(fù)寧顆粒對CRF大鼠血Scr、BUN的影響 見表1。

表1 腎復(fù)寧顆粒對CRF大鼠血肌酐和尿素氮的影響（±s）

表1 腎復(fù)寧顆粒對CRF大鼠血肌酐和尿素氮的影響（±s）

注：與假手術(shù)組比較△P＜0.01；與模型對照組比較▲P＜0.01；與中藥小劑量組比較□P＜0.01；與中劑量組比較■P＜0.05；與中藥小劑量組比較☆P＜0.05。

15 25.73±3.26 6.38±0.77模型對照組 13 56.77±7.47△ 10.28±1.85△中藥小劑量組 14 42.71±6.44▲ 9.37±1.25中藥中劑量組 15 40.87±4.02▲☆ 8.86±1.02▲☆中藥大劑量組 15 36.27±3.88▲□■ 7.88±0.86血肌酐 尿素氮假手術(shù)組組 別 n▲□■

2.2 腎復(fù)寧顆粒對CRF大鼠腎間質(zhì)α－SMA陽性積分結(jié)果 見表2。

表2 腎復(fù)寧顆粒對CRF大鼠腎間質(zhì)α－SMA陽性積分結(jié)果（±s）

表2 腎復(fù)寧顆粒對CRF大鼠腎間質(zhì)α－SMA陽性積分結(jié)果（±s）

注：與假手術(shù)組比較△P＜0.01；與模型對照組比較▲P＞0.05；與模型對照組比較★P＜0.05，與中藥小劑量組比較☆P＞0.05；與模型對照組比較□P＜0.01，與中藥小劑量組比較■P＜0.05，與中藥中劑量組比較◆P＜0.05。

α－SMA組別15 12 3 0 0 1.20±0.41模型對照組 13 1 2 8 2 2.85±0.80△中藥小劑量組 14 1 5 6 2 2.64±0.84▲中藥中劑量組 15 4 6 4 1 2.13±0.92★☆中藥大劑量組 15 5 6 3 1 2.00±0.93陽性積分假手術(shù)組腎組織病變程度n － ＋ ＋＋＋＋＋□■◆

3 結(jié) 論腎復(fù)寧顆?？梢允笴RF大鼠的一般生存狀態(tài)得以改善，降低Scr、BUN，抑制CRF大鼠殘余腎組織中α－平滑肌肌動(dòng)蛋白（α－SMA）在腎組織中的表達(dá)，從而使腎臟纖維化減輕，延緩CRF發(fā)展至終末期的進(jìn)程，有效地保護(hù)和改善腎功能。

4 討 論慢性腎衰竭發(fā)生及發(fā)展的共同途徑為腎纖維化。而現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明：α－SMA是細(xì)胞骨架蛋白的一種，是肌成纖維細(xì)胞（MFB）激活的特異性蛋白，廣泛分布于平滑肌、外周細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞及某些基底細(xì)胞中。正常腎組織中幾乎無肌成纖維細(xì)胞，α－SMA僅表達(dá)于腎臟血管的中層［2－5］。在腎小管間質(zhì)纖維化發(fā)生發(fā)展過程中，肌成纖維細(xì)胞隨即出現(xiàn)，并過度沉積在ECM中，而該細(xì)胞主要表達(dá)α－SMA，故α－SMA的表達(dá)在腎纖維化進(jìn)展過程中具有很重要的意義，因此，抑制腎組織中α－SMA的表達(dá)，是有效治療慢性腎衰竭、延緩腎間質(zhì)纖維化進(jìn)展的重要措施之一。

慢性腎衰屬中醫(yī)虛勞、關(guān)格、水腫等范疇，筆者在長期臨床實(shí)踐過程中認(rèn)為：其病機(jī)為氣虛血瘀，濁毒內(nèi)聚，治療以益氣活血，通腑泄?jié)釣閯t，臨床方選腎復(fù)寧顆粒（黃芪、丹參、當(dāng)歸、大黃）治療多例患者，獲較好療效?，F(xiàn)代藥理研究表明：黃芪具有雙向免疫調(diào)節(jié)功能，可以改善機(jī)體微循環(huán)，改善血流變學(xué)特性，增加腎血流量，有利于有害物質(zhì)的清除，減輕脂質(zhì)在腎小球和腎間質(zhì)的沉積，抑制系膜細(xì)胞和間質(zhì)成纖維細(xì)胞活化，減少細(xì)胞外基質(zhì)分泌，減輕腎間質(zhì)纖維化，消除蛋白尿，保護(hù)腎功能。大黃：改善氮代謝紊亂；減輕腎小球代償性肥大，緩解其高代謝狀態(tài)；改善CRF大鼠腎小管的損害，抑制CRF腎小球系膜細(xì)胞增殖以及細(xì)胞外基質(zhì)增生。丹參：改善CRF患者的血液流變學(xué)狀態(tài)，抑制血小板的聚集，使血液黏度降低，改善腎臟微循環(huán)，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞。

本研究表明：假手術(shù)組Scr、BUN無明顯異常，模型對照組和腎復(fù)寧顆粒小、中、大劑量組Scr、BUN指標(biāo)均高于假手術(shù)組（P＜0.01），腎復(fù)寧顆粒小、中、大劑量組較模型對照組均明顯降低（P＜0.01），其中又以腎復(fù)寧顆粒大劑量組降低尤為顯著。腎組織α－SMA水平檢查結(jié)果：模型對照組較假手術(shù)組α－SMA水平明顯升高（P＜0.01），腎復(fù)寧顆粒小、中、大劑量組較模型對照組α－SMA水平均降低，其中以腎復(fù)寧顆粒中、大劑量組降低最為明顯。

綜上所述：腎復(fù)寧顆粒治療慢性腎功能衰竭作用機(jī)理可能為：①改善腎臟微循環(huán)、增加腎血流量，降低血液粘稠度。②降低Scr、BUN，抑制CRF大鼠殘余腎組織中α－平滑肌肌動(dòng)蛋白（α－SMA）在腎組織中的表達(dá)，從而使腎臟纖維化減輕，延緩CRF發(fā)展至終末期的進(jìn)程，有效地保護(hù)和改善腎功能。

［1］胡安康，朱孝榮，袁紅花.慢性腎衰竭大鼠模型的建立［J］.中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2011，19（1）：34－38.

［2］Quinlan JM，YuWY，HornseyMA，et al.In vitro culture of embryonic mouse intestinal epithelium：Cell differentiation and introduction of reporter genes［J］.BMC DevBiol，2006，6：24.

［3］蔣文功，劉玉華.人類IgA腎病腎小球Ki－67陽性細(xì)胞、α－SMA表達(dá)的免疫組化研究［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，22（2）：188－190.

［4］楊汝春，王永鈞，魯 盈，等.益氣祛風(fēng)濕方對阿霉素大鼠腎組織α－SMA、ROCK1表達(dá)的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志.2009，48（1）：104－107.

［5］Eddy AA.Molecular insights into renal interstitial fibrosis［J］.J Am Soc Nephrol，1996，7（12）：2495－2508.