埃博霉素產(chǎn)生菌的純化及其意義

任閃閃+劉延霆+楊聯(lián)合+趙博宇+牛春玲

隨著比紫杉醇臨床效果更佳的埃博霉素被發(fā)現(xiàn)，埃博霉素的產(chǎn)生菌——纖維堆囊菌日益引起重視，本文通過(guò)對(duì)其純化方法進(jìn)行探索，簡(jiǎn)化純化步驟，縮短純化周期，為埃博霉素的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

埃博霉素 纖維堆囊菌 分離純化

目前最為知名的抗腫瘤藥物非紫杉醇莫屬。但由于紫杉醇提取于紅豆杉，而紅豆杉又?jǐn)?shù)量有限，后續(xù)資源不足，因此尋找與紫杉醇的代替者就顯得尤為重要。埃博霉素（Epothilones）與紫杉醇的作用機(jī)制相同，埃博霉素A、B和D對(duì)癌細(xì)胞的生物活性與紫杉醇相當(dāng)，甚至更強(qiáng)，尤其是埃博霉素B，其活性比紫杉醇強(qiáng)10-100倍.但其水溶性更高，分子量更小，結(jié)構(gòu)更簡(jiǎn)單，對(duì)紫杉醇抗性的腫瘤細(xì)胞也有抗性。埃博霉素來(lái)源于粘細(xì)菌的纖維堆囊菌屬。但由于粘細(xì)菌不能以單細(xì)胞的形態(tài)進(jìn)行生長(zhǎng)且生長(zhǎng)緩慢，因此分離純化困難，純化周期長(zhǎng)，因此進(jìn)一步探索粘細(xì)菌尤其是纖維堆囊菌的快速分離純化顯得尤為重要。

1材料與方法

1.1土樣

采集河南中醫(yī)學(xué)院的土樣及腐殖質(zhì)。

1.2主要試劑和儀器設(shè)備

常規(guī)試劑自上海生工；提取DNA相關(guān)試劑，PCR相關(guān)試劑均購(gòu)自于北京天根生物公司。主要儀器設(shè)備：體式顯微鏡stekeo discovery V8；倒置顯微鏡DP73 TH4-200等。

1.3分離、純化所需的培養(yǎng)基

CNST培養(yǎng)基：KNO3 0.5 g/L，Na2HPO4 0.25 g/L，MgSO4·7H2O 1 g/L，F(xiàn)eCl3 0.01 g/L，微量元素液1mL，pH 7.2。

1.4方法

1.4.1土樣采集的標(biāo)準(zhǔn)及初步處理

將采集的有機(jī)質(zhì)含量豐富（富含其它微生物）的土壤樣品，自然風(fēng)干后研成粉末狀，平鋪在滅過(guò)菌的平皿中，用配成適當(dāng)濃度的制霉菌素液（1片/50mL無(wú)菌水）過(guò)夜處理，干燥后二次處理，將二次處理后干燥的土樣裝入滅過(guò)菌的離心管中待用。

1.4.2纖維堆囊菌分離富集純化及驗(yàn)純

纖維堆囊菌的分離富集一般用CNST培養(yǎng)基。配制CNST滅菌后待其冷卻至不燙手時(shí)，加入30～40U經(jīng)過(guò)過(guò)濾除菌的放線菌酮液，≤40U的青霉素，5～20U的慶大霉素，≤40U的卡那霉素，≤100U的氨芐青霉素，凝固后，貼上1.5～2cm見(jiàn)方的滅菌濾紙片，每皿4張，倒置平板，在超凈臺(tái)中放置1-2天后除去培養(yǎng)基水汽。

將土樣研碎后，適量勻撒在濾紙片上，每個(gè)CNST平板接一個(gè)土樣。先在30℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一周，之后將接有土樣的平板置于室溫下繼續(xù)培養(yǎng)，在解剖鏡下堅(jiān)持每天觀察，如果濾紙片變橘紅或者橙紅色或者有菌膜出現(xiàn)則用接種鏟將變色部分（此為纖維堆囊菌的子實(shí)體部分）或菌膜轉(zhuǎn)接至新的平板上。對(duì)于纖維堆囊菌的純化，主要是在顯微鏡下轉(zhuǎn)接其子實(shí)體或菌膜，具體方法為：先將在顯微鏡下觀察到的較純的菌膜或子實(shí)體的位置在平皿底部標(biāo)出，之后在超凈臺(tái)中用注射器轉(zhuǎn)接至新的加有各種抗生素的CNST平板上，多次轉(zhuǎn)接后（此時(shí)霉菌的量大大減少），對(duì)菌體（主要是子實(shí)體）進(jìn)行洗滌。

對(duì)于染菌嚴(yán)重的子實(shí)體，用過(guò)濾好的放線菌酮配成溶液，具體濃度是0.05mg/mL，分裝至各個(gè)1.5mL的離心管中，然后在離心管中接入染菌子實(shí)體，于56～57℃水浴3～4h（個(gè)別染菌嚴(yán)重的子實(shí)體可以提高水浴溫度，但不能超過(guò)57℃），之后將子實(shí)體轉(zhuǎn)接至新的平板，待菌重新長(zhǎng)出。如果仍有染菌，可以多次重復(fù)此步驟。直至可以長(zhǎng)出完整透明的菌膜。

1.4.3纖維堆囊菌DNA的提取

采用CTAB法提取菌株DNA，并適當(dāng)稀釋作為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增菌株16S rDNA序列。所用引物為細(xì)菌常用引物：27f和1492r。PCR 擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃ 5min；94℃ 1min；58℃ 1min；72℃ 3min；30 cycles；72℃ 10min；4℃保溫。

2實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1纖維堆囊菌的分離純化——形態(tài)觀察

可以觀察到子實(shí)體在濾紙上大量堆積，培養(yǎng)基中3～5成團(tuán)，20～200μm，呈黃色、橙紅色、棕黃色、鐵銹色、黑色；營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞呈圓柱狀，末端鈍圓，長(zhǎng)2.5～10μm；粘孢子在形態(tài)上與營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞區(qū)別小，長(zhǎng)1～3μm；其擴(kuò)展菌膜輻射狀或扇狀，邊緣通常有樹(shù)枝狀或其它不規(guī)則突起。如圖1，符合纖維堆囊菌形態(tài)學(xué)上的特征。

A B

C

圖1 不同生長(zhǎng)周期的纖維堆囊菌（5×）

A在濾紙上剛剛完成富集；B擴(kuò)展到濾紙邊緣的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞；C營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在瓊脂上完成富集，形成大量子實(shí)體

2.2纖維堆囊菌的分離純化-分子生物學(xué)鑒定

純化的纖維堆囊菌16S rDNA序列與NCBI上的基因序列相比較，相似性都在98%以上。

3討論

結(jié)合纖維堆囊菌特殊的生長(zhǎng)特點(diǎn)：（1）菌體細(xì)胞可聚集形成肉眼可見(jiàn)的子實(shí)體結(jié)構(gòu)；（2）在貧瘠的培養(yǎng)基上易形成擴(kuò)展的菌落；（3）粘細(xì)菌的子實(shí)體或粘孢子具有較高的耐熱性。本文創(chuàng)新性地使用了抗生素洗滌法與高溫處理法相結(jié)合，大大提高了純化效率。制霉菌素抑制霉菌的效果很好，但其水溶性較差，而將二甲亞砜作為溶劑加入培養(yǎng)基中又嚴(yán)重影響纖維堆囊菌的生長(zhǎng)且有刺激性氣味。故有必要找出能夠替代制霉菌素的抗生素，最終發(fā)現(xiàn)用水溶性較好且相對(duì)濃度較高的放線菌酮對(duì)子實(shí)體進(jìn)行洗滌，可以達(dá)到同樣的抑制霉菌的效果。結(jié)合纖維堆囊菌的子實(shí)體耐高溫這一相對(duì)優(yōu)勢(shì)生理特點(diǎn)對(duì)其進(jìn)行高溫水浴，在抑制甚至殺死其它雜菌的同時(shí)又不影響纖維堆囊菌的生長(zhǎng)。

通過(guò)此方法，使纖維堆囊菌的純化時(shí)間由之前的半年甚至一年縮短至一到兩個(gè)月。相對(duì)于微生物的傳統(tǒng)純化方法和粘細(xì)菌的其他純化方法，本文的試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單高效，為纖維堆囊菌資源提供更加豐富和多樣的研究材料，同時(shí)也為大量獲得埃博霉素（Epothilones）及其結(jié)構(gòu)類似物提供更多的原始產(chǎn)生菌。

參考文獻(xiàn)：

[1]Gerth K，B.N.， Hoffe C，et al.，EpothiJones A and B：Antifungal and Cytotoxic Compounds from Sorangium cellulosum （Myxobacteria）[J].J Antibiot，1996，（49）：560-563.endprint

隨著比紫杉醇臨床效果更佳的埃博霉素被發(fā)現(xiàn)，埃博霉素的產(chǎn)生菌——纖維堆囊菌日益引起重視，本文通過(guò)對(duì)其純化方法進(jìn)行探索，簡(jiǎn)化純化步驟，縮短純化周期，為埃博霉素的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

埃博霉素 纖維堆囊菌 分離純化

目前最為知名的抗腫瘤藥物非紫杉醇莫屬。但由于紫杉醇提取于紅豆杉，而紅豆杉又?jǐn)?shù)量有限，后續(xù)資源不足，因此尋找與紫杉醇的代替者就顯得尤為重要。埃博霉素（Epothilones）與紫杉醇的作用機(jī)制相同，埃博霉素A、B和D對(duì)癌細(xì)胞的生物活性與紫杉醇相當(dāng)，甚至更強(qiáng)，尤其是埃博霉素B，其活性比紫杉醇強(qiáng)10-100倍.但其水溶性更高，分子量更小，結(jié)構(gòu)更簡(jiǎn)單，對(duì)紫杉醇抗性的腫瘤細(xì)胞也有抗性。埃博霉素來(lái)源于粘細(xì)菌的纖維堆囊菌屬。但由于粘細(xì)菌不能以單細(xì)胞的形態(tài)進(jìn)行生長(zhǎng)且生長(zhǎng)緩慢，因此分離純化困難，純化周期長(zhǎng)，因此進(jìn)一步探索粘細(xì)菌尤其是纖維堆囊菌的快速分離純化顯得尤為重要。

1材料與方法

1.1土樣

采集河南中醫(yī)學(xué)院的土樣及腐殖質(zhì)。

1.2主要試劑和儀器設(shè)備

常規(guī)試劑自上海生工；提取DNA相關(guān)試劑，PCR相關(guān)試劑均購(gòu)自于北京天根生物公司。主要儀器設(shè)備：體式顯微鏡stekeo discovery V8；倒置顯微鏡DP73 TH4-200等。

1.3分離、純化所需的培養(yǎng)基

CNST培養(yǎng)基：KNO3 0.5 g/L，Na2HPO4 0.25 g/L，MgSO4·7H2O 1 g/L，F(xiàn)eCl3 0.01 g/L，微量元素液1mL，pH 7.2。

1.4方法

1.4.1土樣采集的標(biāo)準(zhǔn)及初步處理

將采集的有機(jī)質(zhì)含量豐富（富含其它微生物）的土壤樣品，自然風(fēng)干后研成粉末狀，平鋪在滅過(guò)菌的平皿中，用配成適當(dāng)濃度的制霉菌素液（1片/50mL無(wú)菌水）過(guò)夜處理，干燥后二次處理，將二次處理后干燥的土樣裝入滅過(guò)菌的離心管中待用。

1.4.2纖維堆囊菌分離富集純化及驗(yàn)純

纖維堆囊菌的分離富集一般用CNST培養(yǎng)基。配制CNST滅菌后待其冷卻至不燙手時(shí)，加入30～40U經(jīng)過(guò)過(guò)濾除菌的放線菌酮液，≤40U的青霉素，5～20U的慶大霉素，≤40U的卡那霉素，≤100U的氨芐青霉素，凝固后，貼上1.5～2cm見(jiàn)方的滅菌濾紙片，每皿4張，倒置平板，在超凈臺(tái)中放置1-2天后除去培養(yǎng)基水汽。

將土樣研碎后，適量勻撒在濾紙片上，每個(gè)CNST平板接一個(gè)土樣。先在30℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一周，之后將接有土樣的平板置于室溫下繼續(xù)培養(yǎng)，在解剖鏡下堅(jiān)持每天觀察，如果濾紙片變橘紅或者橙紅色或者有菌膜出現(xiàn)則用接種鏟將變色部分（此為纖維堆囊菌的子實(shí)體部分）或菌膜轉(zhuǎn)接至新的平板上。對(duì)于纖維堆囊菌的純化，主要是在顯微鏡下轉(zhuǎn)接其子實(shí)體或菌膜，具體方法為：先將在顯微鏡下觀察到的較純的菌膜或子實(shí)體的位置在平皿底部標(biāo)出，之后在超凈臺(tái)中用注射器轉(zhuǎn)接至新的加有各種抗生素的CNST平板上，多次轉(zhuǎn)接后（此時(shí)霉菌的量大大減少），對(duì)菌體（主要是子實(shí)體）進(jìn)行洗滌。

對(duì)于染菌嚴(yán)重的子實(shí)體，用過(guò)濾好的放線菌酮配成溶液，具體濃度是0.05mg/mL，分裝至各個(gè)1.5mL的離心管中，然后在離心管中接入染菌子實(shí)體，于56～57℃水浴3～4h（個(gè)別染菌嚴(yán)重的子實(shí)體可以提高水浴溫度，但不能超過(guò)57℃），之后將子實(shí)體轉(zhuǎn)接至新的平板，待菌重新長(zhǎng)出。如果仍有染菌，可以多次重復(fù)此步驟。直至可以長(zhǎng)出完整透明的菌膜。

1.4.3纖維堆囊菌DNA的提取

采用CTAB法提取菌株DNA，并適當(dāng)稀釋作為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增菌株16S rDNA序列。所用引物為細(xì)菌常用引物：27f和1492r。PCR 擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃ 5min；94℃ 1min；58℃ 1min；72℃ 3min；30 cycles；72℃ 10min；4℃保溫。

2實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1纖維堆囊菌的分離純化——形態(tài)觀察

可以觀察到子實(shí)體在濾紙上大量堆積，培養(yǎng)基中3～5成團(tuán)，20～200μm，呈黃色、橙紅色、棕黃色、鐵銹色、黑色；營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞呈圓柱狀，末端鈍圓，長(zhǎng)2.5～10μm；粘孢子在形態(tài)上與營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞區(qū)別小，長(zhǎng)1～3μm；其擴(kuò)展菌膜輻射狀或扇狀，邊緣通常有樹(shù)枝狀或其它不規(guī)則突起。如圖1，符合纖維堆囊菌形態(tài)學(xué)上的特征。

A B

C

圖1 不同生長(zhǎng)周期的纖維堆囊菌（5×）

A在濾紙上剛剛完成富集；B擴(kuò)展到濾紙邊緣的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞；C營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在瓊脂上完成富集，形成大量子實(shí)體

2.2纖維堆囊菌的分離純化-分子生物學(xué)鑒定

純化的纖維堆囊菌16S rDNA序列與NCBI上的基因序列相比較，相似性都在98%以上。

3討論

結(jié)合纖維堆囊菌特殊的生長(zhǎng)特點(diǎn)：（1）菌體細(xì)胞可聚集形成肉眼可見(jiàn)的子實(shí)體結(jié)構(gòu)；（2）在貧瘠的培養(yǎng)基上易形成擴(kuò)展的菌落；（3）粘細(xì)菌的子實(shí)體或粘孢子具有較高的耐熱性。本文創(chuàng)新性地使用了抗生素洗滌法與高溫處理法相結(jié)合，大大提高了純化效率。制霉菌素抑制霉菌的效果很好，但其水溶性較差，而將二甲亞砜作為溶劑加入培養(yǎng)基中又嚴(yán)重影響纖維堆囊菌的生長(zhǎng)且有刺激性氣味。故有必要找出能夠替代制霉菌素的抗生素，最終發(fā)現(xiàn)用水溶性較好且相對(duì)濃度較高的放線菌酮對(duì)子實(shí)體進(jìn)行洗滌，可以達(dá)到同樣的抑制霉菌的效果。結(jié)合纖維堆囊菌的子實(shí)體耐高溫這一相對(duì)優(yōu)勢(shì)生理特點(diǎn)對(duì)其進(jìn)行高溫水浴，在抑制甚至殺死其它雜菌的同時(shí)又不影響纖維堆囊菌的生長(zhǎng)。

通過(guò)此方法，使纖維堆囊菌的純化時(shí)間由之前的半年甚至一年縮短至一到兩個(gè)月。相對(duì)于微生物的傳統(tǒng)純化方法和粘細(xì)菌的其他純化方法，本文的試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單高效，為纖維堆囊菌資源提供更加豐富和多樣的研究材料，同時(shí)也為大量獲得埃博霉素（Epothilones）及其結(jié)構(gòu)類似物提供更多的原始產(chǎn)生菌。

參考文獻(xiàn)：

[1]Gerth K，B.N.， Hoffe C，et al.，EpothiJones A and B：Antifungal and Cytotoxic Compounds from Sorangium cellulosum （Myxobacteria）[J].J Antibiot，1996，（49）：560-563.endprint

隨著比紫杉醇臨床效果更佳的埃博霉素被發(fā)現(xiàn)，埃博霉素的產(chǎn)生菌——纖維堆囊菌日益引起重視，本文通過(guò)對(duì)其純化方法進(jìn)行探索，簡(jiǎn)化純化步驟，縮短純化周期，為埃博霉素的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

埃博霉素 纖維堆囊菌 分離純化

目前最為知名的抗腫瘤藥物非紫杉醇莫屬。但由于紫杉醇提取于紅豆杉，而紅豆杉又?jǐn)?shù)量有限，后續(xù)資源不足，因此尋找與紫杉醇的代替者就顯得尤為重要。埃博霉素（Epothilones）與紫杉醇的作用機(jī)制相同，埃博霉素A、B和D對(duì)癌細(xì)胞的生物活性與紫杉醇相當(dāng)，甚至更強(qiáng)，尤其是埃博霉素B，其活性比紫杉醇強(qiáng)10-100倍.但其水溶性更高，分子量更小，結(jié)構(gòu)更簡(jiǎn)單，對(duì)紫杉醇抗性的腫瘤細(xì)胞也有抗性。埃博霉素來(lái)源于粘細(xì)菌的纖維堆囊菌屬。但由于粘細(xì)菌不能以單細(xì)胞的形態(tài)進(jìn)行生長(zhǎng)且生長(zhǎng)緩慢，因此分離純化困難，純化周期長(zhǎng)，因此進(jìn)一步探索粘細(xì)菌尤其是纖維堆囊菌的快速分離純化顯得尤為重要。

1材料與方法

1.1土樣

采集河南中醫(yī)學(xué)院的土樣及腐殖質(zhì)。

1.2主要試劑和儀器設(shè)備

常規(guī)試劑自上海生工；提取DNA相關(guān)試劑，PCR相關(guān)試劑均購(gòu)自于北京天根生物公司。主要儀器設(shè)備：體式顯微鏡stekeo discovery V8；倒置顯微鏡DP73 TH4-200等。

1.3分離、純化所需的培養(yǎng)基

CNST培養(yǎng)基：KNO3 0.5 g/L，Na2HPO4 0.25 g/L，MgSO4·7H2O 1 g/L，F(xiàn)eCl3 0.01 g/L，微量元素液1mL，pH 7.2。

1.4方法

1.4.1土樣采集的標(biāo)準(zhǔn)及初步處理

將采集的有機(jī)質(zhì)含量豐富（富含其它微生物）的土壤樣品，自然風(fēng)干后研成粉末狀，平鋪在滅過(guò)菌的平皿中，用配成適當(dāng)濃度的制霉菌素液（1片/50mL無(wú)菌水）過(guò)夜處理，干燥后二次處理，將二次處理后干燥的土樣裝入滅過(guò)菌的離心管中待用。

1.4.2纖維堆囊菌分離富集純化及驗(yàn)純

纖維堆囊菌的分離富集一般用CNST培養(yǎng)基。配制CNST滅菌后待其冷卻至不燙手時(shí)，加入30～40U經(jīng)過(guò)過(guò)濾除菌的放線菌酮液，≤40U的青霉素，5～20U的慶大霉素，≤40U的卡那霉素，≤100U的氨芐青霉素，凝固后，貼上1.5～2cm見(jiàn)方的滅菌濾紙片，每皿4張，倒置平板，在超凈臺(tái)中放置1-2天后除去培養(yǎng)基水汽。

將土樣研碎后，適量勻撒在濾紙片上，每個(gè)CNST平板接一個(gè)土樣。先在30℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一周，之后將接有土樣的平板置于室溫下繼續(xù)培養(yǎng)，在解剖鏡下堅(jiān)持每天觀察，如果濾紙片變橘紅或者橙紅色或者有菌膜出現(xiàn)則用接種鏟將變色部分（此為纖維堆囊菌的子實(shí)體部分）或菌膜轉(zhuǎn)接至新的平板上。對(duì)于纖維堆囊菌的純化，主要是在顯微鏡下轉(zhuǎn)接其子實(shí)體或菌膜，具體方法為：先將在顯微鏡下觀察到的較純的菌膜或子實(shí)體的位置在平皿底部標(biāo)出，之后在超凈臺(tái)中用注射器轉(zhuǎn)接至新的加有各種抗生素的CNST平板上，多次轉(zhuǎn)接后（此時(shí)霉菌的量大大減少），對(duì)菌體（主要是子實(shí)體）進(jìn)行洗滌。

對(duì)于染菌嚴(yán)重的子實(shí)體，用過(guò)濾好的放線菌酮配成溶液，具體濃度是0.05mg/mL，分裝至各個(gè)1.5mL的離心管中，然后在離心管中接入染菌子實(shí)體，于56～57℃水浴3～4h（個(gè)別染菌嚴(yán)重的子實(shí)體可以提高水浴溫度，但不能超過(guò)57℃），之后將子實(shí)體轉(zhuǎn)接至新的平板，待菌重新長(zhǎng)出。如果仍有染菌，可以多次重復(fù)此步驟。直至可以長(zhǎng)出完整透明的菌膜。

1.4.3纖維堆囊菌DNA的提取

采用CTAB法提取菌株DNA，并適當(dāng)稀釋作為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增菌株16S rDNA序列。所用引物為細(xì)菌常用引物：27f和1492r。PCR 擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃ 5min；94℃ 1min；58℃ 1min；72℃ 3min；30 cycles；72℃ 10min；4℃保溫。

2實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1纖維堆囊菌的分離純化——形態(tài)觀察

可以觀察到子實(shí)體在濾紙上大量堆積，培養(yǎng)基中3～5成團(tuán)，20～200μm，呈黃色、橙紅色、棕黃色、鐵銹色、黑色；營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞呈圓柱狀，末端鈍圓，長(zhǎng)2.5～10μm；粘孢子在形態(tài)上與營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞區(qū)別小，長(zhǎng)1～3μm；其擴(kuò)展菌膜輻射狀或扇狀，邊緣通常有樹(shù)枝狀或其它不規(guī)則突起。如圖1，符合纖維堆囊菌形態(tài)學(xué)上的特征。

A B

C

圖1 不同生長(zhǎng)周期的纖維堆囊菌（5×）

A在濾紙上剛剛完成富集；B擴(kuò)展到濾紙邊緣的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞；C營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在瓊脂上完成富集，形成大量子實(shí)體

2.2纖維堆囊菌的分離純化-分子生物學(xué)鑒定

純化的纖維堆囊菌16S rDNA序列與NCBI上的基因序列相比較，相似性都在98%以上。

3討論

結(jié)合纖維堆囊菌特殊的生長(zhǎng)特點(diǎn)：（1）菌體細(xì)胞可聚集形成肉眼可見(jiàn)的子實(shí)體結(jié)構(gòu)；（2）在貧瘠的培養(yǎng)基上易形成擴(kuò)展的菌落；（3）粘細(xì)菌的子實(shí)體或粘孢子具有較高的耐熱性。本文創(chuàng)新性地使用了抗生素洗滌法與高溫處理法相結(jié)合，大大提高了純化效率。制霉菌素抑制霉菌的效果很好，但其水溶性較差，而將二甲亞砜作為溶劑加入培養(yǎng)基中又嚴(yán)重影響纖維堆囊菌的生長(zhǎng)且有刺激性氣味。故有必要找出能夠替代制霉菌素的抗生素，最終發(fā)現(xiàn)用水溶性較好且相對(duì)濃度較高的放線菌酮對(duì)子實(shí)體進(jìn)行洗滌，可以達(dá)到同樣的抑制霉菌的效果。結(jié)合纖維堆囊菌的子實(shí)體耐高溫這一相對(duì)優(yōu)勢(shì)生理特點(diǎn)對(duì)其進(jìn)行高溫水浴，在抑制甚至殺死其它雜菌的同時(shí)又不影響纖維堆囊菌的生長(zhǎng)。

通過(guò)此方法，使纖維堆囊菌的純化時(shí)間由之前的半年甚至一年縮短至一到兩個(gè)月。相對(duì)于微生物的傳統(tǒng)純化方法和粘細(xì)菌的其他純化方法，本文的試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單高效，為纖維堆囊菌資源提供更加豐富和多樣的研究材料，同時(shí)也為大量獲得埃博霉素（Epothilones）及其結(jié)構(gòu)類似物提供更多的原始產(chǎn)生菌。

參考文獻(xiàn)：

[1]Gerth K，B.N.， Hoffe C，et al.，EpothiJones A and B：Antifungal and Cytotoxic Compounds from Sorangium cellulosum （Myxobacteria）[J].J Antibiot，1996，（49）：560-563.endprint