• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      桑黃菌絲多糖的提取及多糖成分分析

      2014-11-20 12:03:32許謙
      湖北農業(yè)科學 2014年18期
      關鍵詞:桑黃正交試驗多糖

      許謙

      摘要:以桑黃(Phellinus igniarius)菌絲體為材料,探索熱水提取法提取桑黃菌絲體多糖的工藝,并分析桑黃多糖的主要組成成分。試驗在100 ℃的恒溫下,以多糖提取率為考察目標,分別對提取料液比(m/V,g:mL)和提取時間進行考察,利用硅膠薄層分析的方法,對桑黃多糖的成分做初步測定。熱水提取的最優(yōu)工藝為在水提溫度為100 ℃條件下,料液比1∶45、浸提時間3.5 h,此時桑黃粗多糖提取率為3.99%;桑黃菌絲體多糖的單糖組成初步確定有D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-乳糖。

      關鍵詞:桑黃(Phellinus igniarius);熱水提取法;多糖;正交試驗

      中圖分類號:S646.9;TQ464.1 文獻標識碼:A 文章編號:0439-8114(2014)18-4405-03

      桑黃(Phellinus igniarius)是一種珍貴的藥用真菌,主要寄生在桑樹、楊樹等樹干上。目前,關于桑黃的文獻報道主要集中在多糖提取、抗癌機理及分子結構研究等?,F(xiàn)代醫(yī)學研究表明,一些桑黃子實體的提取物具有明顯的抗癌作用,對小鼠肉瘤S180的抑制率為96.7%,對小鼠艾氏癌的抑制率為87%[1]。藥理學研究表明,三萜、多糖和黃酮類物質是其活性成分,其中以多糖為主[2,3],在實際多糖產出中,菌絲體粗多糖含量是子實體的22.48倍[4]。有體外細胞試驗表明,蛋白多糖與粗多糖對腫瘤細胞EC109和SiHa的抑制率沒有明顯差異[5]。

      目前,常用的桑黃多糖的提取方法有熱水提取法[6]和超聲波輔助提取法[7],這兩種方法時間長,但操作簡單。歐陽小麗等[8]研究了微波法提取茶薪菇菌絲體多糖的最佳工藝,無論在節(jié)能、高效還是在試驗操作方面,微波法都是最適的工藝,但是微波法有其局限性,即不適于大批量的工業(yè)生產。本試驗采用常用的熱水提取法提取桑黃菌絲多糖,優(yōu)化最佳提取工藝,從而提高桑黃菌絲多糖得率,以期對工業(yè)發(fā)酵生產起到一定的指導作用。

      1 材料與方法

      1.1 材料與試劑

      材料:桑黃菌絲體;D-葡萄糖,D-木糖,D-半乳糖,L-阿拉伯糖,L-鼠李糖,D-乳糖;硅膠G薄層板。

      Sevage試劑:三氯甲烷∶正丁醇=4∶1。

      展開劑:正丁醇∶甲醇∶氯仿∶冰醋酸∶水=12.5∶4.5∶5.0∶1.5∶1.5。

      葡萄糖標準溶液:精密稱取105 ℃下干燥恒重的分析純葡萄糖0.058 2 g,置于小燒杯中,加去離子水溶解并轉移至1 000 mL 容量瓶中,搖勻,配制成濃度為0.058 2 mg/mL葡萄糖標準溶液。

      蒽酮-硫酸試劑:精密稱取蒽酮200 mg于100 mL容量瓶中,用80%濃硫酸緩慢定容至刻度,邊加邊攪拌,搖勻,直至蒽酮完全溶解,此時溶液呈黃色透明狀。將得到的蒽酮-硫酸試劑放于棕色瓶中置于陰涼處密封保存(當日配制使用)。

      顯色劑:二苯胺1 g,苯胺1 mL,85%磷酸5 mL混合溶解于50 mL丙酮溶液中。

      儀器:恒溫水浴鍋;離心機;真空干燥箱;層析缸。

      1.2 試驗方法

      1.2.1 桑黃菌絲體干粉的制備 取適量(6 g)桑黃菌絲體,用去離子水洗凈,置50 ℃烘箱中干燥12 h,取出后充分研磨成粉,然后用100目篩過濾,備用。

      1.2.2 試驗設計 以多糖提取率為考察目標,在100 ℃的恒溫下,分別對提取料液比(m/V,g:mL,下同)和時間進行考察,每個條件下取桑黃菌絲體干粉0.2 g,按照2個因素3個水平共有9種設計方案進行桑黃菌絲體多糖的提取,按相應的提取料液比加入去離子水,于相應溫度下提取相應的時間;提取液經3 500 r/min離心15 min,取上清液進行粗多糖的制備。

      1.2.3 醇沉法得粗多糖[9] 采用乙醇等有機試劑作沉淀劑,通過降低多糖溶液的介電常數和溶解度,使多糖從溶液中沉淀出來。精確量取一定體積的多糖溶液,與3倍體積的95%的乙醇混勻,4 ℃下沉淀過夜,3 500 r/min離心15 min,收集沉淀,干燥得桑黃粗多糖。

      1.2.4 sevage法脫蛋白 取桑黃粗多糖溶于熱水(10 mL)中,按多糖溶液體積加入0.2倍sevage試劑 ,混合后劇烈震蕩30 min,靜置1 h,3 500 r/min離心20 min,取上清液后再加入0.2倍sevage試劑,重復此操作2次,至有機層無沉淀為止。收集上清液,從上清液中取1 mL用于多糖含量測定,剩余上清液用4倍體積無水乙醇4 ℃沉淀多糖,次日3 500 r/min離心15 min,收集沉淀,并依次用丙酮、無水乙醇、乙醚洗滌,常規(guī)干燥得脫蛋白多糖,用于多糖成分的分析。

      1.2.5 蒽酮-硫酸法測定多糖含量[10]

      1)多糖得率測定。多糖得率=多糖質量/桑黃菌絲體干粉質量×100%

      2)標準曲線的制作及粗多糖吸光度的測定。準確移取濃度為0.058 2 mg/mL 葡萄糖標準溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 mL置于具塞試管中,以去離子補足至1 mL,加入蒽酮-硫酸試劑4 mL,加塞,立即搖勻。迅速浸于冰水浴中冷卻,各管加完后置于100 ℃水浴中顯色10 min,管口加塞,以防水分蒸發(fā)。取出,冰浴速冷至室溫,以去離子水為空白,于620 nm波長處測吸光度。以標準葡萄糖含量(mg/mL)為縱坐標,以吸光度(A)為橫坐標,繪制標準曲線。

      取“1.2.4”中上清液1 mL稀釋8倍,再從中精確量取1 mL于試管中,加入蒽酮試劑4 mL,立即搖勻。迅速冷卻后于100 ℃水浴中顯色10 min。取出,冰浴速冷至室溫,于620 nm波長處測定其吸光度。代入回歸方程求出多糖溶液中多糖含量。

      1.2.6 桑黃菌絲體多糖成分分析 運用薄層色譜法分析多糖組成成分[11]。

      1)精確稱取脫蛋白多糖10 mg,10 mg樣品中加入5 mL 1 mol/L硫酸,密封試管100 ℃下水解4 h,水解液冷卻后加入足量碳酸鋇中和,4 500 r/min下離心10 min后收集上清液,沉淀以5 mL 50%乙醇洗滌后再離心,合并上清液。上清液于40 ℃下真空干燥,殘渣溶于1 mL去離子水中備用。

      同樣,精確稱定D-葡萄糖3 mg、D-木糖3 mg、 D-半乳糖3 mg、L-阿拉伯糖3 mg、L-鼠李糖3 mg、D-乳糖3 mg各溶于2 mL去離子水中制成對照糖溶液。

      2)薄層色譜層析。①硅膠G薄層板。試驗前取一塊硅膠G板于110 ℃烘箱中活化1 h,取出后即可使用,亦可貯于干燥器中備用。薄層表面要求平整,厚薄均勻。②點樣。選取制備好的薄板一塊,在距1.5 cm底邊的直線上選7個點,各點間距2 cm,用調至1 μL的移液槍于各點處分別點上不同的糖樣品,樣點直徑盡量不超過2 mm,前次樣點干后才能再次復點,重復3次。③展開。以體積比12.5∶4.5∶5.0∶1.5∶1.5的正丁醇∶甲醇∶氯仿∶冰醋酸∶水為展開劑倒入直徑為15 cm的培養(yǎng)皿,將培養(yǎng)皿放入層析缸,待薄層板上樣品點自然干燥后,將薄板置于盛有層析溶劑的層折缸中的培養(yǎng)皿中,自下向上展層,當展層溶劑到達離薄板頂端約3 cm 處時取出薄板,前沿作一記號,用吹風機將其吹干。④顯色。待薄板吹干后,均勻地噴上一層苯胺-二苯胺溶液顯色劑,于85 ℃下顯色至斑點清晰,則各糖分別顯出各自的顏色。

      2 結果與分析

      2.1 標準曲線的繪制

      以吸光度為橫坐標,葡萄糖含量為縱坐標,繪制標準曲線,結果見圖1。由圖1可以看出,在葡萄糖含量為0.000~0.100 mg/mL 的范圍內,葡萄糖含量與吸光度線性關系良好。經線性回歸標準曲線方程為Y=0.106 0A+0.000 2,R2=0.999。

      2.2 各種方案試驗結果

      2因素3水平共有9中試驗方案,9種試驗方案結果見表2。從表2可以看出,在水提溫度為100 ℃的條件下,料液比1∶45,提取時間3.5 h,此時多糖提取率為3.99%,而在料液比為1∶55,提取時間為4.0 h的提取率最小為0.61%。

      2.3 薄層色譜結果

      選擇展開劑體積比為12.5∶4.5∶5.0∶1.5∶1.5的正丁醇∶甲醇∶氯仿∶冰醋酸∶水薄層圖譜見圖2。由圖2可以得出,點樣線到溶劑前沿的距離為11.5 cm,且已知公式Rf=點樣線到斑點中心的距離/點樣線到溶劑前沿的距離,則各糖對應的Rf值如下表3。綜合考慮可得出桑黃粗多糖的單糖組成接近為D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-乳糖。因薄層色譜影響因素較多,如展開劑、顯色劑的選擇,顯色時,顯色劑量的控制等,所以單糖種類確定、精確的單糖組成和含量需進一步運用其他技術進行分析,如氣相色譜等。

      3 小結與討論

      藥用真菌近年來越來越被人們所重視,如桑黃具有極高的藥用價值,其中以多糖為主。由于其具有多種功效,因此對多糖的研究已成為醫(yī)藥食品界的熱門領域。

      由于蒽酮-硫酸法幾乎可以測定溶液中所有碳水化合物的含量,所以用該法測出的碳水化合物含量,實際上是溶液中全部可溶性碳水化合物的總量[11-13]。因此,蒽酮-硫酸法測定結果略高于苯酚-硫酸法,所測結果更為合理準確。

      本試驗考察了料液比、提取時間2個因素分別對多糖提取率的影響,結合其他考察因素得出最佳的提取條件為:在水提溫度為100 ℃的前提下,料液比1∶45,提取時間3.5 h,多糖提取率最高可達3.99%。這個桑黃多糖提取率高于游慶紅等[6]的桑黃多糖提取率1.133%、尹秀蓮等[13]的桑黃多糖提取率1.46%及秦俊哲等[11]的桑黃子實體多糖提取率3.43%。這個試驗用一種比較簡單的方法獲得了較高的多糖提取率,對于桑黃多糖的工業(yè)化提取具有重要的指導意義。

      運用薄層色譜法初步確定桑黃菌絲體多糖的單糖組成為D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-乳糖,這與秦俊哲等[11]測定的桑黃子實體多糖的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖,日本桑黃子實體多糖的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖具有較大差別,產生不同的原因有品種的原因,也可能因為菌絲體與子實體原材料不同所造成。

      參考文獻:

      [1] IKEKAWA T, NAKANISHI M, VEHARA N, et al. Antitumor action of some basidiomycetes, especially Phellinus linteus[J]. Gann, 1986,59(9):155-157.

      [2] 呂英華,王建芳,李玉平,等.藥用真菌桑黃的研究進展[J].蠶業(yè)科學,2009,35(1):204-210.

      [3] SASAKI T,F(xiàn)ULII K,SUGURA M,et al. Antitumor polysaccharides from some polyporaceae. Ganderma applanatum(Pers.) Pat and Phellinus linteus Teng[J]. Chem Pharm Bull, 1971, 19(10):821-826.

      [4] 王英輝,許泓瑜,敖宗華,等.桑黃發(fā)酵菌粉與桑黃子實體成分分析比較[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2008,34(2):126-129.

      [5] 梁大勇,黃 芳,趙 晨,等.桑黃粗多糖除蛋白及抗腫瘤活性[J].生物加工過程,2012,10(3):56-60.

      [6] 游慶紅,尹秀蓮.響應面法優(yōu)化桑黃多糖提取工藝研究[J].中國釀造,2010(5):67-69.

      [7] 逯家輝,董 媛,張益波,等.響應面法優(yōu)化桑黃菌絲體多糖超聲波提取工藝的研究[J].林產化學與工業(yè),2009,29(2):63-68.

      [8] 歐陽小麗,張曉昱,王宏勛,等.茶薪菇菌絲體多糖提取方法的研究[J].中國食用菌,2004,23(5):35-37.

      [9] KIM G Y,PARK H S,NAM B H.Purification and characterization of acidic proteo-heteroglycan from the fruiting body of Phellinus linteus (Berk. & M.A. Curtis) Teng[J].Bioresource Technology, 2003,89(1):81-86.

      [10] 劉曉涵,陳永剛,林 勵,等.蒽酮-硫酸法與苯酚-硫酸法測定枸杞中多糖含量的比較[J].食品科技,2009,34(4):270-272.

      [11] 秦俊哲,劉 華.桑黃子實體多糖工藝及單糖組成研究[J].中國食用菌,2008,27(6):43-45.

      [12] 莊楚強,何春雄.應用數理統(tǒng)計基礎[M].第三版.廣州:華南理工大學出版社,2009.

      [13] 尹秀蓮,游慶紅.超聲輔助復合酶法提取桑黃多糖[J].食品與機械,2011(4):58-60.

      1.2.6 桑黃菌絲體多糖成分分析 運用薄層色譜法分析多糖組成成分[11]。

      1)精確稱取脫蛋白多糖10 mg,10 mg樣品中加入5 mL 1 mol/L硫酸,密封試管100 ℃下水解4 h,水解液冷卻后加入足量碳酸鋇中和,4 500 r/min下離心10 min后收集上清液,沉淀以5 mL 50%乙醇洗滌后再離心,合并上清液。上清液于40 ℃下真空干燥,殘渣溶于1 mL去離子水中備用。

      同樣,精確稱定D-葡萄糖3 mg、D-木糖3 mg、 D-半乳糖3 mg、L-阿拉伯糖3 mg、L-鼠李糖3 mg、D-乳糖3 mg各溶于2 mL去離子水中制成對照糖溶液。

      2)薄層色譜層析。①硅膠G薄層板。試驗前取一塊硅膠G板于110 ℃烘箱中活化1 h,取出后即可使用,亦可貯于干燥器中備用。薄層表面要求平整,厚薄均勻。②點樣。選取制備好的薄板一塊,在距1.5 cm底邊的直線上選7個點,各點間距2 cm,用調至1 μL的移液槍于各點處分別點上不同的糖樣品,樣點直徑盡量不超過2 mm,前次樣點干后才能再次復點,重復3次。③展開。以體積比12.5∶4.5∶5.0∶1.5∶1.5的正丁醇∶甲醇∶氯仿∶冰醋酸∶水為展開劑倒入直徑為15 cm的培養(yǎng)皿,將培養(yǎng)皿放入層析缸,待薄層板上樣品點自然干燥后,將薄板置于盛有層析溶劑的層折缸中的培養(yǎng)皿中,自下向上展層,當展層溶劑到達離薄板頂端約3 cm 處時取出薄板,前沿作一記號,用吹風機將其吹干。④顯色。待薄板吹干后,均勻地噴上一層苯胺-二苯胺溶液顯色劑,于85 ℃下顯色至斑點清晰,則各糖分別顯出各自的顏色。

      2 結果與分析

      2.1 標準曲線的繪制

      以吸光度為橫坐標,葡萄糖含量為縱坐標,繪制標準曲線,結果見圖1。由圖1可以看出,在葡萄糖含量為0.000~0.100 mg/mL 的范圍內,葡萄糖含量與吸光度線性關系良好。經線性回歸標準曲線方程為Y=0.106 0A+0.000 2,R2=0.999。

      2.2 各種方案試驗結果

      2因素3水平共有9中試驗方案,9種試驗方案結果見表2。從表2可以看出,在水提溫度為100 ℃的條件下,料液比1∶45,提取時間3.5 h,此時多糖提取率為3.99%,而在料液比為1∶55,提取時間為4.0 h的提取率最小為0.61%。

      2.3 薄層色譜結果

      選擇展開劑體積比為12.5∶4.5∶5.0∶1.5∶1.5的正丁醇∶甲醇∶氯仿∶冰醋酸∶水薄層圖譜見圖2。由圖2可以得出,點樣線到溶劑前沿的距離為11.5 cm,且已知公式Rf=點樣線到斑點中心的距離/點樣線到溶劑前沿的距離,則各糖對應的Rf值如下表3。綜合考慮可得出桑黃粗多糖的單糖組成接近為D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-乳糖。因薄層色譜影響因素較多,如展開劑、顯色劑的選擇,顯色時,顯色劑量的控制等,所以單糖種類確定、精確的單糖組成和含量需進一步運用其他技術進行分析,如氣相色譜等。

      3 小結與討論

      藥用真菌近年來越來越被人們所重視,如桑黃具有極高的藥用價值,其中以多糖為主。由于其具有多種功效,因此對多糖的研究已成為醫(yī)藥食品界的熱門領域。

      由于蒽酮-硫酸法幾乎可以測定溶液中所有碳水化合物的含量,所以用該法測出的碳水化合物含量,實際上是溶液中全部可溶性碳水化合物的總量[11-13]。因此,蒽酮-硫酸法測定結果略高于苯酚-硫酸法,所測結果更為合理準確。

      本試驗考察了料液比、提取時間2個因素分別對多糖提取率的影響,結合其他考察因素得出最佳的提取條件為:在水提溫度為100 ℃的前提下,料液比1∶45,提取時間3.5 h,多糖提取率最高可達3.99%。這個桑黃多糖提取率高于游慶紅等[6]的桑黃多糖提取率1.133%、尹秀蓮等[13]的桑黃多糖提取率1.46%及秦俊哲等[11]的桑黃子實體多糖提取率3.43%。這個試驗用一種比較簡單的方法獲得了較高的多糖提取率,對于桑黃多糖的工業(yè)化提取具有重要的指導意義。

      運用薄層色譜法初步確定桑黃菌絲體多糖的單糖組成為D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-乳糖,這與秦俊哲等[11]測定的桑黃子實體多糖的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖,日本桑黃子實體多糖的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖具有較大差別,產生不同的原因有品種的原因,也可能因為菌絲體與子實體原材料不同所造成。

      參考文獻:

      [1] IKEKAWA T, NAKANISHI M, VEHARA N, et al. Antitumor action of some basidiomycetes, especially Phellinus linteus[J]. Gann, 1986,59(9):155-157.

      [2] 呂英華,王建芳,李玉平,等.藥用真菌桑黃的研究進展[J].蠶業(yè)科學,2009,35(1):204-210.

      [3] SASAKI T,F(xiàn)ULII K,SUGURA M,et al. Antitumor polysaccharides from some polyporaceae. Ganderma applanatum(Pers.) Pat and Phellinus linteus Teng[J]. Chem Pharm Bull, 1971, 19(10):821-826.

      [4] 王英輝,許泓瑜,敖宗華,等.桑黃發(fā)酵菌粉與桑黃子實體成分分析比較[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2008,34(2):126-129.

      [5] 梁大勇,黃 芳,趙 晨,等.桑黃粗多糖除蛋白及抗腫瘤活性[J].生物加工過程,2012,10(3):56-60.

      [6] 游慶紅,尹秀蓮.響應面法優(yōu)化桑黃多糖提取工藝研究[J].中國釀造,2010(5):67-69.

      [7] 逯家輝,董 媛,張益波,等.響應面法優(yōu)化桑黃菌絲體多糖超聲波提取工藝的研究[J].林產化學與工業(yè),2009,29(2):63-68.

      [8] 歐陽小麗,張曉昱,王宏勛,等.茶薪菇菌絲體多糖提取方法的研究[J].中國食用菌,2004,23(5):35-37.

      [9] KIM G Y,PARK H S,NAM B H.Purification and characterization of acidic proteo-heteroglycan from the fruiting body of Phellinus linteus (Berk. & M.A. Curtis) Teng[J].Bioresource Technology, 2003,89(1):81-86.

      [10] 劉曉涵,陳永剛,林 勵,等.蒽酮-硫酸法與苯酚-硫酸法測定枸杞中多糖含量的比較[J].食品科技,2009,34(4):270-272.

      [11] 秦俊哲,劉 華.桑黃子實體多糖工藝及單糖組成研究[J].中國食用菌,2008,27(6):43-45.

      [12] 莊楚強,何春雄.應用數理統(tǒng)計基礎[M].第三版.廣州:華南理工大學出版社,2009.

      [13] 尹秀蓮,游慶紅.超聲輔助復合酶法提取桑黃多糖[J].食品與機械,2011(4):58-60.

      1.2.6 桑黃菌絲體多糖成分分析 運用薄層色譜法分析多糖組成成分[11]。

      1)精確稱取脫蛋白多糖10 mg,10 mg樣品中加入5 mL 1 mol/L硫酸,密封試管100 ℃下水解4 h,水解液冷卻后加入足量碳酸鋇中和,4 500 r/min下離心10 min后收集上清液,沉淀以5 mL 50%乙醇洗滌后再離心,合并上清液。上清液于40 ℃下真空干燥,殘渣溶于1 mL去離子水中備用。

      同樣,精確稱定D-葡萄糖3 mg、D-木糖3 mg、 D-半乳糖3 mg、L-阿拉伯糖3 mg、L-鼠李糖3 mg、D-乳糖3 mg各溶于2 mL去離子水中制成對照糖溶液。

      2)薄層色譜層析。①硅膠G薄層板。試驗前取一塊硅膠G板于110 ℃烘箱中活化1 h,取出后即可使用,亦可貯于干燥器中備用。薄層表面要求平整,厚薄均勻。②點樣。選取制備好的薄板一塊,在距1.5 cm底邊的直線上選7個點,各點間距2 cm,用調至1 μL的移液槍于各點處分別點上不同的糖樣品,樣點直徑盡量不超過2 mm,前次樣點干后才能再次復點,重復3次。③展開。以體積比12.5∶4.5∶5.0∶1.5∶1.5的正丁醇∶甲醇∶氯仿∶冰醋酸∶水為展開劑倒入直徑為15 cm的培養(yǎng)皿,將培養(yǎng)皿放入層析缸,待薄層板上樣品點自然干燥后,將薄板置于盛有層析溶劑的層折缸中的培養(yǎng)皿中,自下向上展層,當展層溶劑到達離薄板頂端約3 cm 處時取出薄板,前沿作一記號,用吹風機將其吹干。④顯色。待薄板吹干后,均勻地噴上一層苯胺-二苯胺溶液顯色劑,于85 ℃下顯色至斑點清晰,則各糖分別顯出各自的顏色。

      2 結果與分析

      2.1 標準曲線的繪制

      以吸光度為橫坐標,葡萄糖含量為縱坐標,繪制標準曲線,結果見圖1。由圖1可以看出,在葡萄糖含量為0.000~0.100 mg/mL 的范圍內,葡萄糖含量與吸光度線性關系良好。經線性回歸標準曲線方程為Y=0.106 0A+0.000 2,R2=0.999。

      2.2 各種方案試驗結果

      2因素3水平共有9中試驗方案,9種試驗方案結果見表2。從表2可以看出,在水提溫度為100 ℃的條件下,料液比1∶45,提取時間3.5 h,此時多糖提取率為3.99%,而在料液比為1∶55,提取時間為4.0 h的提取率最小為0.61%。

      2.3 薄層色譜結果

      選擇展開劑體積比為12.5∶4.5∶5.0∶1.5∶1.5的正丁醇∶甲醇∶氯仿∶冰醋酸∶水薄層圖譜見圖2。由圖2可以得出,點樣線到溶劑前沿的距離為11.5 cm,且已知公式Rf=點樣線到斑點中心的距離/點樣線到溶劑前沿的距離,則各糖對應的Rf值如下表3。綜合考慮可得出桑黃粗多糖的單糖組成接近為D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-乳糖。因薄層色譜影響因素較多,如展開劑、顯色劑的選擇,顯色時,顯色劑量的控制等,所以單糖種類確定、精確的單糖組成和含量需進一步運用其他技術進行分析,如氣相色譜等。

      3 小結與討論

      藥用真菌近年來越來越被人們所重視,如桑黃具有極高的藥用價值,其中以多糖為主。由于其具有多種功效,因此對多糖的研究已成為醫(yī)藥食品界的熱門領域。

      由于蒽酮-硫酸法幾乎可以測定溶液中所有碳水化合物的含量,所以用該法測出的碳水化合物含量,實際上是溶液中全部可溶性碳水化合物的總量[11-13]。因此,蒽酮-硫酸法測定結果略高于苯酚-硫酸法,所測結果更為合理準確。

      本試驗考察了料液比、提取時間2個因素分別對多糖提取率的影響,結合其他考察因素得出最佳的提取條件為:在水提溫度為100 ℃的前提下,料液比1∶45,提取時間3.5 h,多糖提取率最高可達3.99%。這個桑黃多糖提取率高于游慶紅等[6]的桑黃多糖提取率1.133%、尹秀蓮等[13]的桑黃多糖提取率1.46%及秦俊哲等[11]的桑黃子實體多糖提取率3.43%。這個試驗用一種比較簡單的方法獲得了較高的多糖提取率,對于桑黃多糖的工業(yè)化提取具有重要的指導意義。

      運用薄層色譜法初步確定桑黃菌絲體多糖的單糖組成為D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-乳糖,這與秦俊哲等[11]測定的桑黃子實體多糖的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖,日本桑黃子實體多糖的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖具有較大差別,產生不同的原因有品種的原因,也可能因為菌絲體與子實體原材料不同所造成。

      參考文獻:

      [1] IKEKAWA T, NAKANISHI M, VEHARA N, et al. Antitumor action of some basidiomycetes, especially Phellinus linteus[J]. Gann, 1986,59(9):155-157.

      [2] 呂英華,王建芳,李玉平,等.藥用真菌桑黃的研究進展[J].蠶業(yè)科學,2009,35(1):204-210.

      [3] SASAKI T,F(xiàn)ULII K,SUGURA M,et al. Antitumor polysaccharides from some polyporaceae. Ganderma applanatum(Pers.) Pat and Phellinus linteus Teng[J]. Chem Pharm Bull, 1971, 19(10):821-826.

      [4] 王英輝,許泓瑜,敖宗華,等.桑黃發(fā)酵菌粉與桑黃子實體成分分析比較[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2008,34(2):126-129.

      [5] 梁大勇,黃 芳,趙 晨,等.桑黃粗多糖除蛋白及抗腫瘤活性[J].生物加工過程,2012,10(3):56-60.

      [6] 游慶紅,尹秀蓮.響應面法優(yōu)化桑黃多糖提取工藝研究[J].中國釀造,2010(5):67-69.

      [7] 逯家輝,董 媛,張益波,等.響應面法優(yōu)化桑黃菌絲體多糖超聲波提取工藝的研究[J].林產化學與工業(yè),2009,29(2):63-68.

      [8] 歐陽小麗,張曉昱,王宏勛,等.茶薪菇菌絲體多糖提取方法的研究[J].中國食用菌,2004,23(5):35-37.

      [9] KIM G Y,PARK H S,NAM B H.Purification and characterization of acidic proteo-heteroglycan from the fruiting body of Phellinus linteus (Berk. & M.A. Curtis) Teng[J].Bioresource Technology, 2003,89(1):81-86.

      [10] 劉曉涵,陳永剛,林 勵,等.蒽酮-硫酸法與苯酚-硫酸法測定枸杞中多糖含量的比較[J].食品科技,2009,34(4):270-272.

      [11] 秦俊哲,劉 華.桑黃子實體多糖工藝及單糖組成研究[J].中國食用菌,2008,27(6):43-45.

      [12] 莊楚強,何春雄.應用數理統(tǒng)計基礎[M].第三版.廣州:華南理工大學出版社,2009.

      [13] 尹秀蓮,游慶紅.超聲輔助復合酶法提取桑黃多糖[J].食品與機械,2011(4):58-60.

      猜你喜歡
      桑黃正交試驗多糖
      桑黃——古老中藥放新彩
      桑黃黃酮的研究進展
      米胚多糖的組成及抗氧化性研究
      熟三七多糖提取工藝的優(yōu)化
      中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:45
      桑黃纖孔菌發(fā)酵液化學成分的研究
      中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:20:03
      傾斜式子棉清理機工作質量影響因素分析
      復方萬年青膠囊神經保護作用成分的水提取工藝研究
      基于MADYMO的航空座椅約束系統(tǒng)優(yōu)化設計
      科技視界(2016年18期)2016-11-03 21:44:44
      祁山藥醇提物提取工藝研究
      科技視界(2016年20期)2016-09-29 11:36:29
      桑黃液體發(fā)酵茶飲料工藝研究
      中國釀造(2016年12期)2016-03-01 03:08:28
      江华| 周宁县| 新巴尔虎右旗| 马边| 二连浩特市| 策勒县| 新郑市| 潞西市| 凉山| 乐昌市| 高陵县| 绥化市| 郁南县| 黄石市| 鱼台县| 望都县| 和龙市| 永新县| 淳安县| 和龙市| 营山县| 桐柏县| 乌鲁木齐县| 城市| 尼木县| 镇平县| 镇原县| 京山县| 五台县| 陕西省| 鹤庆县| 黑龙江省| 阳东县| 宜昌市| 涞源县| 永安市| 庆云县| 天全县| 英德市| 满洲里市| 北碚区|