MMP—2和MMP—9在Hp陽(yáng)性的腦梗死患者血清中的表達(dá)

王淑華

[摘要] 目的 探討幽門螺桿菌（Hp）感染陽(yáng)性的腦梗死（CI）患者血清中MMP-2和MMP-9的表達(dá)情況。 方法 選取2012年1月～2014年3月在菏澤市立醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的CI患者100例，患者均經(jīng)頭顱CT檢查、頸動(dòng)脈造影檢查并結(jié)合病史確診，同時(shí)選取無(wú)CI體征的健康體檢者100例為對(duì)照組，用ELISA法測(cè)定兩組的Hp細(xì)胞毒素相關(guān)基因蛋白（Hp-CagA-IgG），比較各組的Hp-CagA-IgG陽(yáng)性率。再把Hp-CagA-IgG陽(yáng)性的CI患者分為Hp重度感染CI組、Hp輕度感染CI組，把對(duì)照組中Hp-CagA-IgG陰性的受試者作為Hp陰性對(duì)照組。用ELISA法測(cè)定MMP-2、MMP-9，比較各組的MMP-2、MMP-9。 結(jié)果 CI組的Hp-CagA-IgG陽(yáng)性率為72.1%，明顯高于對(duì)照組的44.6%（P<0.01）。Hp重度感染CI組的MMP-2為（373±126）μg/L、MMP-9為（399±137）μg/L，Hp輕度感染CI組的MMP-2為（267±139）μg/L、MMP-9為（316±132）μg/L，均明顯高于Hp陰性對(duì)照組（P<0.01）；Hp重度感染CI組與Hp輕度感CI組的MMP-2、MMP-9比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。 結(jié)論 Hp感染能使CI患者的MMP-2和MMP-9表達(dá)量增高，從而使其發(fā)生CI的概率增高。

[關(guān)鍵詞] 腦梗死；幽門螺桿菌；感染；基質(zhì)金屬蛋白酶-2；基質(zhì)金屬蛋白酶-9

[中圖分類號(hào)] R743.9 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2014）10（c）-0089-03

Hp是世界上感染最普遍最廣泛的細(xì)菌之一。Hp感染導(dǎo)致消化系統(tǒng)疾病已有大量的研究，并且也已被全世界公認(rèn)，但是，對(duì)Hp感染導(dǎo)致腦梗死（cerebral infarction，CI）的研究國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少，并且還存在爭(zhēng)議，需要做大量、深入的試驗(yàn)研究來(lái)證實(shí)CI與Hp感染之間的關(guān)系和其可能的發(fā)病機(jī)制，從而為CI的早期防治提供一個(gè)新的手段和依據(jù)。本研究通過(guò)檢測(cè)Hp細(xì)胞毒素相關(guān)基因蛋白（Hp-CagA-IgG）及基質(zhì)金屬蛋白酶2和9（MMP-2和 MMP-9）在血清中的表達(dá)，來(lái)探討Hp感染與CI形成之間關(guān)系及其可能的發(fā)病機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年1月～2014年3月在菏澤市立醫(yī)院神內(nèi)科住院的CI患者，回顧性分析行頭顱CT/MRI檢查、頸動(dòng)脈造影檢查并結(jié)合臨床病史診斷為CI的患者100例，其中男51例，女49例，年齡49～82歲，平均（65.3±10.6）歲，患者均符合第四屆全國(guó)腦血管疾病會(huì)議制訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)。并同時(shí)選取無(wú)CI體征的健康體檢者100例為對(duì)照組，其中男50例，女50例，年齡50～85歲，平均（68.0±9.4）歲。兩組均除外消化系統(tǒng)疾病、結(jié)締組織病、肝腎系統(tǒng)疾病、免疫系疾病、合并感染性疾病、腫瘤、甲狀腺功能亢進(jìn)或減低、貧血、抗Hp治療史的患者及近期服用過(guò)抗氧化藥物（如B族維生素或葉酸）患者。

1.2 試劑及儀器

1.2.1 試劑 Hp-CagA-IgG試劑盒，購(gòu)自朗頓生物科技有限公司，MMP-2和MMP-9試劑盒，購(gòu)自上海研謹(jǐn)生物科技有限公司。

1.2.2 儀器 離心機(jī)：北京醫(yī)用離心機(jī)廠，型號(hào)為L(zhǎng)D-42；酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀：美國(guó)Instruments.Inc，型號(hào)為EL×800；低溫冰箱：日本Sanyo公司，型號(hào)為MDF-U332；洗板機(jī)：BIO-RAD公司，型號(hào)為1575；孵育箱：HIRA SAWA公司，型號(hào)為WJ-6C。

1.3 研究方法

用ELLSA法檢測(cè)Hp-CagA-IgG及基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書的操作規(guī)范去操作。

所有受試者于清晨空腹抽取靜脈血4 ml，沿管壁緩慢注入潔凈的玻璃試管內(nèi)，以3000 r/min的速度離心10 min，離心半徑為14 cm，取淡黃色上清液存于封閉玻璃試管中備用。①檢測(cè)CI組及對(duì)照組的血清Hp-CagA-IgG，比較兩組的Hp-CagA-IgG陽(yáng)性率。②根據(jù)檢測(cè)Hp-CagA-IgG的OD值大小，把Hp-CagA-IgG陽(yáng)性的CI患者分為Hp輕度感染CI組（100≤OD≤400），Hp重度感染CI組（OD>400）；把對(duì)照組中Hp-CagA-IgG陰性的受試者作為Hp陰性對(duì)照組。③用ELISA法分別檢測(cè)MMP-2和MMP-9在3組（Hp陰性對(duì)照組、Hp輕度感染CI組、Hp重度感染CI組）血清中的表達(dá)。比較各組的MMP-2、MMP-9。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)使用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多個(gè)樣本均數(shù)比較采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料的方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CI組與對(duì)照組Hp-CagA-IgG陽(yáng)性率的比較

CI組的Hp-CagA-IgG陽(yáng)性率（72.1%）明顯高于對(duì)照組的44.6%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

2.2 Hp陰性對(duì)照組、Hp輕度感染CI組、Hp重度感染CI組MMP-2、MMP-9的比較

Hp輕度感染CI、Hp重度感染CI組的MMP-2、MMP-9均明顯高于Hp陰性對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；Hp重度感染CI組與Hp輕度感染CI組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（表1）。

3 討論

研究表明，Hp感染后的致病作用與其菌型有關(guān)。Hp-CagA-IgG和空泡毒素（VacA）是Hp的毒力標(biāo)志。VacA可能是導(dǎo)致消化性潰瘍的重要因子，Hp-CagA-IgG是一種高分子Hp抗體，Hp-CagA-IgG 陽(yáng)性菌株脂多糖是一種特殊的內(nèi)毒素，其增強(qiáng)的毒力和細(xì)胞毒素性產(chǎn)物可能與CI相關(guān)[1]。Hp-CagA-IgG是Hp的一個(gè)標(biāo)志性毒力因子，具有很強(qiáng)的毒性，與致病力關(guān)系密切，雖然含量甚微，卻能引起強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答[2]。Pasceri等[3]通過(guò)對(duì)缺血性心腦血管疾病總結(jié)了10個(gè)回顧性研究、3個(gè)前瞻性研究，對(duì)Hp及其毒力菌株?duì)顩r與心腦血管疾病的關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果顯示心腦血管病與Hp-CagA-IgG菌株感染之間存在相關(guān)性，Hp-CagA-IgG菌株感染極有可能是相關(guān)心腦血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。本研究結(jié)果顯示，CI組的Hp-CagA-IgG陽(yáng)性率均明顯高于對(duì)照組，顯示CI與Hp感染可能呈正相關(guān)，尤其是Hp-CagA-IgG菌株感染與CI的發(fā)病機(jī)制可能有更重要的關(guān)系。Hp感染后，Hp-CagA-IgG抗體與頸動(dòng)脈血管壁相關(guān)抗原發(fā)生交叉反應(yīng)，啟動(dòng)炎癥過(guò)程，誘導(dǎo)急性炎性產(chǎn)物的表達(dá)和免疫反應(yīng)，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞受損和功能障礙，進(jìn)而啟動(dòng)頸動(dòng)脈粥樣硬化的病理演變過(guò)程，誘發(fā)CI的發(fā)生[4-5]。Hp感染導(dǎo)致全身性炎癥反應(yīng)，加劇粥樣硬化的發(fā)展和臨床癥狀的加重[6]。endprint

基質(zhì)金屬蛋白酶是一個(gè)大家族，因其需要Ca2+、Zn2+等金屬離子作為輔助因子而得名，是主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分離鑒別出26個(gè)成員，編號(hào)分別為MMP-1～26。根據(jù)作用底物以及片斷同源性，將MMPs分為6類，為膠原酶、明膠酶、基質(zhì)降解素、基質(zhì)溶解素、furin活化的MMP和其他分泌型MMP。

膠原酶為其中重要的一類，它主要有兩種形式，一種被糖化，分子量為92 kD，命名為MMP-9；另一種非糖化，分子量為72 kD，被稱為MMP-2。

近年來(lái)，動(dòng)脈粥樣硬化的“感染學(xué)說(shuō)”受到醫(yī)學(xué)界的關(guān)注[7]。炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)分泌多種炎性反應(yīng)因子和脂質(zhì)過(guò)氧化物，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞大量分泌MMP-2、MMP-9，而MMP-2和MMP-9降解內(nèi)皮細(xì)胞基底膜參，加速低密度脂蛋白滲透，有利于單核細(xì)胞入侵，并且與內(nèi)皮細(xì)胞黏附，使內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞，這是動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)這一[8]。此外，在泡沫化過(guò)程中，多種細(xì)胞因子調(diào)節(jié)其他細(xì)胞分泌大量的MMP-2和MMP-9，進(jìn)一步降解細(xì)胞外基質(zhì)，促使脂質(zhì)條紋的形成，并且加速動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)展[9]。本研究結(jié)果顯示，Hp輕度感染CI、Hp重度感染CI組的MMP-2、MMP-9均明顯高于Hp陰性對(duì)照組（P<0.01）；Hp重度感染CI組與Hp輕度感染CI組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），說(shuō)明Hp感染在CI的發(fā)生、發(fā)展中可能起更重要的作用。大量深入地研究Hp-CagA-IgG菌株感染與炎性反應(yīng)及MMP-2和MMP-9的濃度與CI的發(fā)生、發(fā)展之間的內(nèi)在聯(lián)系必定會(huì)為CI的防治策略開(kāi)拓更新的思路。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 鄭東明，王金春，郝慶，等.幽門螺桿菌感染對(duì)腦梗死患者血脂及纖維蛋白原水平的影響[J].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，33（1）：59-60.

[2] 劉明瑜.幽門螺桿菌感染與心腦血管病關(guān)系的探討[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2011，21（8）：1599-1601.

[3] 王玉梅，白彩琴.慢性產(chǎn)細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A幽門螺桿菌感染與動(dòng)脈硬化性腦梗死的發(fā)病關(guān)系探討[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志，2004，33（9）：779-781.

[4] 許先進(jìn)，金立軍.幽門螺桿菌感染與冠心病相關(guān)性的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2010，16（2）：244-248.

[5] 李唯瓊.幽門螺桿菌與腦梗塞相關(guān)性的探討[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2009，15（30）：17-18.

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[7] 王騰玉，彭成海，田野.基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系研究進(jìn)展[J].中國(guó)綜合臨床，2012，28（9）：997-999.

[8] 周波，劉利慧.冠心病患者血清炎癥因子水平測(cè)定及其臨床意義[J].實(shí)用醫(yī)藥，2014，31（2）：121-122.

[9] Macin SM，Perna FR，F(xiàn)arías EF，et al.Atorvastation has an important acute anti-inflammatory effect in patients with acute coronary syndrome：results of a randomized，double blind，placebo-controlled study[J].Am Heart J，2005，149（7）：451-457.

（收稿日期：2014-08-01 本文編輯：許俊琴）endprint

基質(zhì)金屬蛋白酶是一個(gè)大家族，因其需要Ca2+、Zn2+等金屬離子作為輔助因子而得名，是主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分離鑒別出26個(gè)成員，編號(hào)分別為MMP-1～26。根據(jù)作用底物以及片斷同源性，將MMPs分為6類，為膠原酶、明膠酶、基質(zhì)降解素、基質(zhì)溶解素、furin活化的MMP和其他分泌型MMP。

膠原酶為其中重要的一類，它主要有兩種形式，一種被糖化，分子量為92 kD，命名為MMP-9；另一種非糖化，分子量為72 kD，被稱為MMP-2。

近年來(lái)，動(dòng)脈粥樣硬化的“感染學(xué)說(shuō)”受到醫(yī)學(xué)界的關(guān)注[7]。炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)分泌多種炎性反應(yīng)因子和脂質(zhì)過(guò)氧化物，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞大量分泌MMP-2、MMP-9，而MMP-2和MMP-9降解內(nèi)皮細(xì)胞基底膜參，加速低密度脂蛋白滲透，有利于單核細(xì)胞入侵，并且與內(nèi)皮細(xì)胞黏附，使內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞，這是動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)這一[8]。此外，在泡沫化過(guò)程中，多種細(xì)胞因子調(diào)節(jié)其他細(xì)胞分泌大量的MMP-2和MMP-9，進(jìn)一步降解細(xì)胞外基質(zhì)，促使脂質(zhì)條紋的形成，并且加速動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)展[9]。本研究結(jié)果顯示，Hp輕度感染CI、Hp重度感染CI組的MMP-2、MMP-9均明顯高于Hp陰性對(duì)照組（P<0.01）；Hp重度感染CI組與Hp輕度感染CI組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），說(shuō)明Hp感染在CI的發(fā)生、發(fā)展中可能起更重要的作用。大量深入地研究Hp-CagA-IgG菌株感染與炎性反應(yīng)及MMP-2和MMP-9的濃度與CI的發(fā)生、發(fā)展之間的內(nèi)在聯(lián)系必定會(huì)為CI的防治策略開(kāi)拓更新的思路。

[參考文獻(xiàn)]

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[4] 許先進(jìn)，金立軍.幽門螺桿菌感染與冠心病相關(guān)性的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2010，16（2）：244-248.

[5] 李唯瓊.幽門螺桿菌與腦梗塞相關(guān)性的探討[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2009，15（30）：17-18.

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[7] 王騰玉，彭成海，田野.基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系研究進(jìn)展[J].中國(guó)綜合臨床，2012，28（9）：997-999.

[8] 周波，劉利慧.冠心病患者血清炎癥因子水平測(cè)定及其臨床意義[J].實(shí)用醫(yī)藥，2014，31（2）：121-122.

[9] Macin SM，Perna FR，F(xiàn)arías EF，et al.Atorvastation has an important acute anti-inflammatory effect in patients with acute coronary syndrome：results of a randomized，double blind，placebo-controlled study[J].Am Heart J，2005，149（7）：451-457.

（收稿日期：2014-08-01 本文編輯：許俊琴）endprint

基質(zhì)金屬蛋白酶是一個(gè)大家族，因其需要Ca2+、Zn2+等金屬離子作為輔助因子而得名，是主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分離鑒別出26個(gè)成員，編號(hào)分別為MMP-1～26。根據(jù)作用底物以及片斷同源性，將MMPs分為6類，為膠原酶、明膠酶、基質(zhì)降解素、基質(zhì)溶解素、furin活化的MMP和其他分泌型MMP。

膠原酶為其中重要的一類，它主要有兩種形式，一種被糖化，分子量為92 kD，命名為MMP-9；另一種非糖化，分子量為72 kD，被稱為MMP-2。

近年來(lái)，動(dòng)脈粥樣硬化的“感染學(xué)說(shuō)”受到醫(yī)學(xué)界的關(guān)注[7]。炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)分泌多種炎性反應(yīng)因子和脂質(zhì)過(guò)氧化物，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞大量分泌MMP-2、MMP-9，而MMP-2和MMP-9降解內(nèi)皮細(xì)胞基底膜參，加速低密度脂蛋白滲透，有利于單核細(xì)胞入侵，并且與內(nèi)皮細(xì)胞黏附，使內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞，這是動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)這一[8]。此外，在泡沫化過(guò)程中，多種細(xì)胞因子調(diào)節(jié)其他細(xì)胞分泌大量的MMP-2和MMP-9，進(jìn)一步降解細(xì)胞外基質(zhì)，促使脂質(zhì)條紋的形成，并且加速動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)展[9]。本研究結(jié)果顯示，Hp輕度感染CI、Hp重度感染CI組的MMP-2、MMP-9均明顯高于Hp陰性對(duì)照組（P<0.01）；Hp重度感染CI組與Hp輕度感染CI組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），說(shuō)明Hp感染在CI的發(fā)生、發(fā)展中可能起更重要的作用。大量深入地研究Hp-CagA-IgG菌株感染與炎性反應(yīng)及MMP-2和MMP-9的濃度與CI的發(fā)生、發(fā)展之間的內(nèi)在聯(lián)系必定會(huì)為CI的防治策略開(kāi)拓更新的思路。

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[3] 王玉梅，白彩琴.慢性產(chǎn)細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A幽門螺桿菌感染與動(dòng)脈硬化性腦梗死的發(fā)病關(guān)系探討[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志，2004，33（9）：779-781.

[4] 許先進(jìn)，金立軍.幽門螺桿菌感染與冠心病相關(guān)性的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2010，16（2）：244-248.

[5] 李唯瓊.幽門螺桿菌與腦梗塞相關(guān)性的探討[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2009，15（30）：17-18.

[6] Diomedi M，Pietroiusti A，Silvestrini M，et al.CagA positve Helicobacrer pylori strains may influence the natural history of atherosclerotic stroke[J].Neurology，2004，63（5）：800-804.

[7] 王騰玉，彭成海，田野.基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系研究進(jìn)展[J].中國(guó)綜合臨床，2012，28（9）：997-999.

[8] 周波，劉利慧.冠心病患者血清炎癥因子水平測(cè)定及其臨床意義[J].實(shí)用醫(yī)藥，2014，31（2）：121-122.

[9] Macin SM，Perna FR，F(xiàn)arías EF，et al.Atorvastation has an important acute anti-inflammatory effect in patients with acute coronary syndrome：results of a randomized，double blind，placebo-controlled study[J].Am Heart J，2005，149（7）：451-457.

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