DNA-PKcs蛋白在食管癌組織中的表達(dá)及臨床病理相關(guān)性研究

王昆侖，徐曉霞，張忠獻(xiàn)，劉 楊，任景麗，袁 翎

(1.鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院放療科 河南鄭州 450008;2.鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院病理科 河南鄭州 450014)

DNA雙鍵斷裂是細(xì)胞發(fā)生癌變和死亡的重要原因。DNA-PKcs是修復(fù)DNA雙鍵斷裂、維護(hù)生物體基因組穩(wěn)定的關(guān)鍵酶。有研究顯示DNA-PKcs蛋白的分布和腫瘤的易感性、預(yù)后以及抗腫瘤治療的敏感性密切相關(guān)［1］，但和食管癌關(guān)系的報道較少見，因此了解DNA-PKcs在食管癌組織中的表達(dá)及其和臨床病理的關(guān)系對食管癌風(fēng)險評估、預(yù)后判斷有現(xiàn)實的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料 收集河南省腫瘤醫(yī)院2009年1月至2011年12月病理診斷確診并手術(shù)切除食管癌患者共41例，分別采集患者的食管癌組織、癌旁組織(距腫瘤邊緣約1～2 cm組織)以及正常組織(距腫瘤邊緣＞5 cm組織)。患者年齡 32～76歲，平均(51.27±7.19)歲，其中男性23例，女性18例，所有病例均有完整的臨床資料及完好的存檔蠟塊。病理類型為鱗狀細(xì)胞癌者28例，腺癌4例，其他病理類型9例(腺鱗癌3例，未分化癌2例，肉瘤1例，癌3例);低分化12例，中分化12例，高分化23例;病理分期為Ⅰ期5例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例。

1.2 方法和主要試劑 實驗采用免疫組化SP法，使用的主要試劑包括:DNA-PKcs濃縮型單克隆抗體、SP超敏試劑盒(鼠/兔抗)、胰酶消化試劑盒，DAB顯色液等。

1.3 免疫組化結(jié)果的評定 DNA-PKcs為核蛋白，細(xì)胞核被染色呈棕黃色即為陽性表達(dá)細(xì)胞。顯微鏡下觀察免疫組化染色后的病理切片，對每1張病理切片計數(shù)5個高倍視野(40×10)中細(xì)胞陽性表達(dá)數(shù)，以視野中陽性表達(dá)數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的百分比來表示DNA-PKcs蛋白表達(dá)水平?！埃睘殛栃约?xì)胞表達(dá)率小于5%、“+”為5%～50%之間、“++”為50%～90%之間、“+++”為陽性表達(dá)細(xì)胞率大于90%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析，定性資料采用χ2檢驗或Fisher精確概率法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌組織、癌旁組織和正常組織中DNA-PKcs蛋白表達(dá)情況 癌組織DNA-PKcs蛋白表達(dá)陽性率最高(87.8%)，其次為癌旁組織(63.4%)，正常組織 DNAPKcs表達(dá)陽性率最低(51.2%)。癌組織、癌旁組織和正常組織3組比較DNA-PKcs蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，癌組織與癌旁組織和正常組織DNAPKcs表達(dá)兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);而癌旁組織陽性率高于正常組織，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 癌組織、癌旁組織和正常組織中DNA-PKcs蛋白表達(dá)情況［n，(%)］

2.2 DNA-PKcs蛋白表達(dá)臨床病理特征的關(guān)系 DNA-PKcs蛋白表達(dá)在高分化組中陽性率為100%，在中分化組中陽性率為50%，在低分化組中陽性率為75%，3組間差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);DNA-PKcs蛋白表達(dá)3組間兩兩比較高分化組與中分化組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而其他兩兩比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。DNA-PKcs蛋白表達(dá)與患者性別、年齡、病例類型和pTNM分期無關(guān)。見表2。

3 討論

DNA依賴蛋白激酶催化單位(DNA-PKcs)是DNA雙鏈損傷修復(fù)中關(guān)鍵酶。當(dāng)各種因素引起DNA雙鏈斷裂時，DNA蛋白激酶的亞單位Ku70和Ku80迅速形成異源二聚體，與受損的DNA末端結(jié)合，通過非同源性末端接合(NHEJ)途徑激活DNA-PKcs組成DNA依賴蛋白激酶，在DNA修復(fù)中發(fā)揮重要作用。

研究結(jié)果表明，食管癌癌組織DNA-PKcs蛋白表達(dá)陽性率高于癌旁組織和正常組織，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義，這與胡航榮［2］對食管癌不同組織之間 DNAPKcs蛋白表達(dá)陽性率研究結(jié)果一致，也與其在肺癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌患者中不同組織表達(dá)情況一致［3-4］，提示 DNA-PKcs蛋白表達(dá)可能參與了食管正常細(xì)胞向惡性細(xì)胞轉(zhuǎn)變的過程。黃梅芳等［3］發(fā)現(xiàn)DNA-PKcs蛋白表達(dá)與肺癌病理類型和病理分期有關(guān)，病理分期越晚，其表達(dá)越強(qiáng)，細(xì)支氣管肺泡癌表達(dá)高于其它肺腺癌，且均高于肺腺鱗癌，而本研究結(jié)果顯示，食管癌DNA-PKcs蛋白表達(dá)與病理類型和病理分期無關(guān)，提示DNA-PKcs蛋白表達(dá)情況與癌癥類型有關(guān)。有研究［2］發(fā)現(xiàn)DNA-PKcs蛋白表達(dá)隨腫瘤分化程度增高而增高，本研究結(jié)果也顯示DNA-PKcs蛋白表達(dá)與食管癌組織的分化程度有關(guān)，高分化組表達(dá)強(qiáng)于中分化組和低分化組，且與中分化組差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示DNA-PKcs可能是預(yù)測食管癌分化程度的一項重要指標(biāo)，有可能成為食管癌指示食管癌放療預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物。同時食管癌低分化組DNA-PKcs蛋白表達(dá)要高于中分化組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，可能與分化程度各組樣本例數(shù)較少，產(chǎn)生統(tǒng)計學(xué)偏倚有關(guān)。

表2 DNA-PKcs蛋白表達(dá)臨床病理特征的關(guān)系［n，(%)］

綜上所述，DNA-PKcs蛋白表達(dá)與性別、年齡、病理類型和病理分期無關(guān)，與腫瘤分化程度有關(guān)，高分化組高于中分化組和低分化組，且癌組織表達(dá)高于癌旁組織和正常組織。這一結(jié)論可為食管癌的放療個體化治療方案的制定和預(yù)后判斷提供依據(jù)。

［1］蔡榮，張麗珍.DNA依賴蛋白激酶的研究新進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)綜述，2013，19(7):1182-1185.

［2］胡航榮.DNA-PK在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義［D］.重慶醫(yī)科大學(xué)，2007:11-12.

［3］黃梅芳，李文輝，楊振峰，等.DNA-PKcs在云南宣威富源肺腺癌組織中的表達(dá)與分期及病理相關(guān)性探討［J］.云南醫(yī)藥，2009，30(4):407-410.

［4］王萬鵬，宋德霸，趙龍栓.DNA-PKcs蛋白和MGMT蛋白在肝癌組織中的表達(dá)及意義［J］.山東醫(yī)藥，2010，50(7):70-71.