不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)乙醇氧化損傷模型小鼠的抗氧化作用比較

白銀花，劉婧，李曉，張立實(shí)

（四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院，四川成都610041）

蘆薈（Aloe）是百合科多年生常綠肉質(zhì)草本植物，富含多糖、有機(jī)酸、蛋白質(zhì)以及多種礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和多酚類還原性物質(zhì)，被譽(yù)為“21世紀(jì)最佳保健食品”和純天然抗氧化劑[1]。 銀杏（Ginkgo biloba L.）葉、果和外種皮等皆具有藥用價(jià)值，被稱為“全身都是寶的活化石”[2-3]。國(guó)內(nèi)外研究表明，銀杏葉所含的黃酮化合物具有明顯抗氧化活性和抗自由基活性[4-6]。擬用大劑量乙醇造小鼠氧化損傷模型，對(duì)不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑的抗氧化作用進(jìn)行比較。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蘆薈銀杏復(fù)合制劑：XX生物科技有限公司；清潔級(jí)雄性KM小鼠，60只，體質(zhì)量25 g～30 g，8周齡，成都達(dá)碩生物科技有限公司。

GSH試劑盒、T-SOD試劑盒、GSH-Px試劑盒、MDA試劑盒、蛋白質(zhì)羰基含量試劑盒：南京建成生物工程研究所；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-2800型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)：尤尼柯（上海）儀器有限公司；BIO-RAD680酶標(biāo)儀：上海普林斯頓生物科技發(fā)展有限公司；AU400生化分析儀：奧林巴斯中國(guó)有限公司；DY89-IDI電動(dòng)玻璃勻漿器：寧波新芝科技有限公司；Thermo ST16低溫高速離心機(jī)：Thermo Scientific；L530高速臺(tái)式離心機(jī)：長(zhǎng)沙湘儀儀器公司；HHSYZL-Ni電熱恒溫水浴箱：北京長(zhǎng)風(fēng)儀器公司。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物分組

實(shí)驗(yàn)小鼠飼養(yǎng)溫度18℃～22℃，濕度55%～75%，自然光照，自由采食和飲水。小鼠在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下給予基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，按體質(zhì)量隨機(jī)分成6組，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、2A組、1A組、1B組和2B組。

1.3.2 造模及給藥方法

實(shí)驗(yàn)組按1 000 mg/kg·bw·d的劑量灌胃給予不同配方的受試樣品，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予同體積雙蒸水，連續(xù)灌胃30 d，末次灌胃后，模型對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組禁食16 h（過(guò)夜），然后1次性灌胃給予50%乙醇12 mL/kg·bw，正常對(duì)照組不作處理。

1.3.3 測(cè)試樣品的制備和檢測(cè)

模型對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組灌胃乙醇6 h后，股動(dòng)脈取血處死，1.5 mL EP管收集血液，3 000 r/min離心10 min，取上清液備用。解剖小鼠，取肝臟，稱取0.4 g～0.5 g和0.1g～0.2g肝臟組織，分別加入9倍體積的生理鹽水（用于測(cè)肝臟GSH、T-SOD、GSH-Px和MDA含量）和蛋白質(zhì)羰基含量測(cè)試盒試劑一（用于測(cè)肝臟蛋白質(zhì)羰基含量），于勻漿器中制成10%的組織勻漿液，2 500 r/min離心10 min，取上清液備用。

采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒檢測(cè)血清和肝組織抗氧化物質(zhì)GSH含量、抗氧化酶TSOD和GSH-Px活力、脂質(zhì)氧化產(chǎn)物MDA含量以及蛋白質(zhì)羰基含量；采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定肝組織蛋白含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠一般情況的影響

不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠一般情況的影響見(jiàn)表1。

表1 蘆薈銀杏復(fù)方制劑對(duì)小鼠體重的影響（x±s）Table 1 Aloe gingko compound preparation effect on body weight in mice（±s）

表1 蘆薈銀杏復(fù)方制劑對(duì)小鼠體重的影響（x±s）Table 1 Aloe gingko compound preparation effect on body weight in mice（±s）

注：A為蘆薈全凝膠凍干粉；B為200：1蘆薈凝膠凍干粉；1為配方1；2 為配方 2。

組別 劑量/（g/kg·bw）動(dòng)物數(shù) 0 d體重/g 15 d體重/g 30 d體重/g正常對(duì)照 0.00 10 27.70±1.42 39.00±3.16 45.50±2.55模型對(duì)照 0.00 10 28.30±1.83 42.30±3.30 46.10±2.96 2A 0.38 10 28.70±2.54 39.50±2.91 46.90±1.73 1A 0.30 10 28.70±1.83 41.90±3.14 47.80±2.66 1B 0.30 10 28.20±1.99 41.00±2.63 48.20±2.62 2B 0.38 10 28.50±1.37 39.80±2.74 47.90±2.28

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，模型對(duì)照組與正常對(duì)照組比較體重略有增加但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），各受試配方組動(dòng)物體重與模型對(duì)照組比較亦無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。各組動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中活動(dòng)正常，無(wú)異常表現(xiàn)，表明各配方對(duì)小鼠生長(zhǎng)發(fā)育和一般健康情況均無(wú)不良影響。

2.2 不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠血清抗氧化能力的影響

不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠血清抗氧化能力的影響見(jiàn)表2。

表2 蘆薈銀杏復(fù)方制劑對(duì)小鼠血清GSH、SOD、GSH-Px和MDA的影響（X±S，N=10）Table 2 Aloe gingko compound preparation in mice serum GSH ，SOD，GSH-Px and MDA（X±S，N=10）

給予大劑量乙醇造模，模型對(duì)照組與正常對(duì)照組比較，小鼠血清 GSH、SOD 水平下降（P＜0.01），GSH-Px水平降低（P＜0.05），MDA 水平升高（P＜0.01）。說(shuō)明乙醇氧化損傷模型造模成功。

給予不同配方的蘆薈銀杏復(fù)方制劑30d后，經(jīng)大劑量乙醇造模，實(shí)驗(yàn)組與模型對(duì)照組比較，小鼠血清GSH、SOD 水平升高（P＜0.01）；1A組 GSH-Px水平升高（P＜0.01）；MDA 水平降低（P＜0.01）。不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑血清抗氧化能力順序?yàn)椋?A＞2B＞1A＞1B。即蘆薈全凝膠凍干粉配方2＞200：1蘆薈凝膠凍干粉配方2＞蘆薈全凝膠凍干粉配方1＞200：1蘆薈凝膠凍干粉配方1。

2.3 不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠肝組織抗氧化能力的影響

不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠肝組織抗氧化能力的影響見(jiàn)表3。

表3 蘆薈銀杏復(fù)方制劑對(duì)小鼠肝組織GSH、SOD、GSH-Px、MDA和蛋白質(zhì)羰基的影響（X±S，N=10）Table 3 Aloe gingko compound preparation in mice liver tissue GSH，SOD，GSH-Px，MDA and the Effects of Protein Carbonyl（X±S，N=10）

給予大劑量乙醇造模，模型對(duì)照組與溶劑對(duì)照組比較，小鼠肝組織GSH和GSH-Px水平下降（P＜0.05），SOD 水平下降（P＜0.01），MDA和蛋白質(zhì)羰基水平升高（P＜0.01）。說(shuō)明乙醇氧化損傷模型造模成功。

給予不同配方的蘆薈銀杏復(fù)方制劑30 d后，經(jīng)大劑量乙醇造模，各實(shí)驗(yàn)組與模型對(duì)照組比較，小鼠肝組織GSH水平升高（P＜0.01）；SOD和GSH-Px水平升高（P＜0.01）；MDA 和蛋白質(zhì)羰基水平降低（P＜0.01）。不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑肝組織抗氧化能力順序?yàn)椋?A＞2B＞1A＞1B。 即蘆薈全凝膠凍干粉配方 2＞200：1蘆薈凝膠凍干粉配方2＞蘆薈全凝膠凍干粉配方1＞200：1蘆薈凝膠凍干粉配方1。

3 結(jié)論

乙醇大量攝入，可激活氧分子產(chǎn)生自由基，導(dǎo)致組織細(xì)胞過(guò)氧化效應(yīng)及體內(nèi)還原性谷胱甘肽的耗竭。灌胃大劑量乙醇后，SOD活性下降，MDA含量升高[7-8]。本實(shí)驗(yàn)中，給予50%乙醇12 mL/（kg·bw）造模，模型對(duì)照組與溶劑對(duì)照組比較，小鼠血清和肝組織GSH、SOD、GSH-Px水平均降低，MDA和蛋白質(zhì)羰基水平均升高。說(shuō)明乙醇氧化損傷模型造模成功。

機(jī)體防御體系的抗氧化能力的強(qiáng)弱與健康程度存在著密切聯(lián)系[9-10]。GSH的主要生理作用是清除體內(nèi)的自由基，做為體內(nèi)一種重要的抗氧化劑，保護(hù)蛋白質(zhì)和酶等分子中的巰基。GSH-Px和SOD是機(jī)體內(nèi)兩種重要的抗氧化酶。GSH-Px能催化過(guò)氧化氫的分解，SOD能夠清除超氧陰離子自由基，這兩種酶活力的變化能反映機(jī)體氧化損傷的程度；MDA和蛋白質(zhì)羰基分別是脂質(zhì)和蛋白質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，它們的變化可以反映細(xì)胞損傷的程度[11-12]。大量研究表明，當(dāng)機(jī)體遭受自由基攻擊而被氧化時(shí)，抗氧化劑的注入和使用，使抗氧化物質(zhì)GSH含量增加，血清和肝組織中抗氧化酶類SOD和GSH-Px活性等酶活性提高，MDA和蛋白質(zhì)羰基含量下降，從而使機(jī)體的抗氧化能力增強(qiáng)[13-17]。

本實(shí)驗(yàn)中，給予不同配方的蘆薈銀杏復(fù)合制劑30 d后，經(jīng)大劑量乙醇造模，實(shí)驗(yàn)組與模型對(duì)照組比較，小鼠血清和肝組織GSH、SOD、GSH-Px水平升高，MDA和蛋白質(zhì)羰基水平降低。說(shuō)明不同配方的蘆薈銀杏復(fù)合制劑均能夠使乙醇氧化損傷模型小鼠抗氧化作用增強(qiáng)。不同配方蘆薈銀杏復(fù)合制劑抗氧化能力順序?yàn)椋?A＞2B＞1A＞1B。即蘆薈全凝膠凍干粉配方2＞200∶1蘆薈凝膠凍干粉配方2＞蘆薈全凝膠凍干粉配方1＞200∶1蘆薈凝膠凍干粉配方1。