化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測丙型肝炎抗體的臨床評價

萬大朋++++劉勝武

[摘要] 目的 分析化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法在丙肝病毒抗體檢測中的應(yīng)用價值。方法 同時應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測60例丙肝確診感染者和100例健康體檢者的抗丙型肝炎病毒抗體，計算其陰性符合率、陽性符合率以及總符合率，用Kappa檢驗計算待評價診斷一致性。選取化學(xué)發(fā)光法初檢驗結(jié)果為陽性的標(biāo)本100例，按照S/CO.值分為低值組（1

[關(guān)鍵詞] 丙型肝炎；抗體；化學(xué)發(fā)光；ELISA

[中圖分類號] R446.6 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）07（b）-0193-02

丙型肝炎（簡稱丙肝）是嚴重威脅人類健康的傳染病之一，主要通過血液傳染，我國平均感染率為3.2%，由此估算感染人數(shù)約3 700萬。輸血是丙型肝炎病毒（HCV）的主要傳播途徑，目前研究發(fā)現(xiàn)，除丙型肝炎病毒（HCV）急、慢性期患者外，輸血后許多無癥狀的受血者中也可發(fā)現(xiàn)HCV抗體[1]。當(dāng)前抗-HCV抗體檢測多采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），結(jié)果受抗原、抗體的變異影響較大，且國內(nèi)各類抗-HCV檢測試劑的檢測性能存在較大差異。近期采用化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）檢測抗-HCV抗體的試劑已進入我國市場，為分析化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法在丙肝病毒抗體檢測中的應(yīng)用價值?，F(xiàn)分析2012年1月—2013年12月間該院收治的同時應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測60例丙肝確診感染者的臨床資料，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

60例HCV確診感染者血清標(biāo)本來自該院的門診和住院患者，其診斷符合2004年中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會聯(lián)合修訂的《丙型肝炎防治指南》的有關(guān)標(biāo)準[1]，其中男性33例，女性27例，年齡18～82歲，平均年齡（39.8±4.3）歲，病程3個月～21年，平均病程（6.5±2.1）年。所有患者均知情同意，簽署知情同意書。100例正常血清標(biāo)本來自該院自愿參與研究的健康體檢者，其中男性36例，女性24例，年齡18～81歲，平均年齡（39.4±3.9）歲。

1.2 儀器與試劑

ELISA法儀器為瑞士FAME全自動酶標(biāo)分析系統(tǒng)，采用廈門新創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn)的抗-HCV試劑盒；CLIA法儀器為美國強生Vitros 3600化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，試劑盒為相配套試劑。確認試劑（重組免疫印跡法）使用Chiton RIBA-3.0 SIA，Cop Emeryville，CA。

1.3 檢測結(jié)果判斷

ELISA法：以（0.1×陽性對照平均A 值+陰性對照平均A值）確定Cut-off值，以檢測值≥Cut-off值為陽性。CLIA法： S/CO.值≥1為陽性。確認試驗：出現(xiàn)2條以上HCV蛋白條帶為陽性。

1.4 方法

同時用ELISA法和CLIA法對160份樣本進行抗HCV抗體檢測，按說明書進行操作。另選取100份化學(xué)發(fā)光法初檢結(jié)果陽性的標(biāo)本，分為兩組：低值組（1

1.5 統(tǒng)計方法

用四格表統(tǒng)計臨床數(shù)據(jù)，并計算陰性、陽性以及總符合率，所得數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS17.0處理，樣本率以χ2檢驗。用Kappa檢驗計算發(fā)光法試劑與ELISA試劑的診斷一致性，按照Kappa系數(shù)大小以極差、微弱、弱、中度、高度和極強對診斷一致性強度進行判斷，極差：Kappa系數(shù)<0；微弱：Kappa系數(shù)0～0.2；弱：Kappa系數(shù)0.21～0.4；中度：Kappa系數(shù)0.41～0.6；高度：Kappa系數(shù)0.61～0.8；極強：Kappa系數(shù)0.81～1.0[2]。

2 結(jié)果

2.1 ELISA和CLIA方法檢測丙型肝炎病毒抗體結(jié)果的符合性

結(jié)果顯示使用傳統(tǒng)ELISA試劑與化學(xué)發(fā)光方法試劑檢測抗HCV抗體的診斷一致性較高，臨床檢測中差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩種方法檢測抗HCV抗體結(jié)果的符合性

注： 陽性符合率：87.7%，陰性符合率：91.3%，總符合率：90.0%，χ2檢驗：χ2=280.000，P=0.000。

2.2 化學(xué)發(fā)光法抗-HCV初檢陽性標(biāo)本的RIBA確認試驗結(jié)果

見表2。

表2 化學(xué)發(fā)光法抗-HCV初檢陽性標(biāo)本的RIBA確認試驗結(jié)果

3 討論

目前廣泛使用的第三代HCV抗體ELISA試劑增加了HCV Ns5區(qū)表達的蛋白作為抗原，大增加了靈敏度和特異性。但臨床使用該類試劑篩檢HCV感染者，仍存在一定數(shù)量的假陽性和假陰性結(jié)果[3]，特別是在HCV低流行率人群中，如無償獻血者，假陽性問題一直比較突出。此外，國內(nèi)常用的HCV抗體酶免試劑皆沒有灰區(qū)的設(shè)定，試劑盒cutoff值計算方法各廠家也都不一致，導(dǎo)致國產(chǎn)試劑盒之間的檢測性能存在較大的異質(zhì)性，亦是假陽性比較多的原因 [4-5]。

在臨床實驗室中檢驗中，需先對使用的方法和程程序進行評估，確定其符合要求后才可正式使用。Kappa檢驗是用于分析計數(shù)資料和等級分組資料一致性檢驗中的一種方法，在肝炎病毒血清標(biāo)志物等二分變量（陰性、陽性）檢測中，一般選擇使用使用檢驗法，以判斷不同方法學(xué)是否存在一致性及相關(guān)程度。該文結(jié)果顯示化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法在丙型肝炎病毒抗體檢測中的Kappa系數(shù)達到0.76，具有高度一致性，與同類研究報道結(jié)果基本一致[4]，結(jié)果表明兩種試劑均可用于血源篩查、臨床術(shù)前初篩。ELISA試劑的特異性較好，發(fā)光試劑的靈敏度較高，兩種試劑均存在漏檢現(xiàn)象，實際工作中如能聯(lián)合應(yīng)用可提高檢出率[6]。

另外該研究參照美國CDC丙型肝炎實驗導(dǎo)則[7]，使用S/CO.≥8可判斷為陽性作為分組依據(jù)，對發(fā)光法初篩陽性的標(biāo)本再進行RIBA確認試驗，發(fā)現(xiàn)低值組的陽性率為24%，而高值組的陽性率為88%，提示中國人群的抗HCV陽性預(yù)測值與美國有一定的差異，目前的抗-HCV 診斷試劑盒均采用基因工程或合成多肽抗原，而由于HCV基因易發(fā)生變異，其基因呈現(xiàn)高度異質(zhì)性，編碼氨基酸序列明顯改變，可引起抗原性的改變，現(xiàn)階段試劑的檢測抗原多為2型抗原，而以往的研究發(fā)現(xiàn)，我國HCV患者多為1型，因此當(dāng)前的試劑并不適用于中國所有地區(qū)[4]。提示實驗室應(yīng)對抗HCV試劑的S/CO.比值設(shè)定進行評估，使用在所有人群中經(jīng)過驗證的能夠預(yù)測確認試驗≥95%陽性率的S/CO.比值作為是否進行確認試驗的依據(jù)，并設(shè)立一定范圍內(nèi)的灰區(qū)，以達到靈敏度和特異性的最佳平衡[8]，該研究還提示對初檢呈弱反應(yīng)者有必要進行確認試驗，跟蹤觀察。

[參考文獻]

[1] 中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會，中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分學(xué).丙型肝炎防治指南[Z]，2004.

[2] 楊凡，萬海英，單詠梅，等.應(yīng)用Kappa檢驗對乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物和丙型肝炎病毒抗體檢測方法的評估[J].中華實驗和臨床感染病雜志：電子版，2010，4（1）：52-55.

[3] 李新建.酶聯(lián)免疫法檢測血清丙肝抗體的測量不確定度的評估[J].中國輸血雜志，2013，26（7）：630-632.

[4] 張旋，裴元元，宋世軍，等.4種國產(chǎn)丙型肝炎病毒抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑的檢測結(jié)果分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2012（22）：2869-2870.

[5] 吳軍，蔣理，謝而付，等.三種國產(chǎn)抗-HCV酶聯(lián)免疫診斷試劑檢測結(jié)果與電化學(xué)發(fā)光法比較[J].中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2013（20）：9056-9058.

[6] 王燕，尹秋霞，竇恒利，等.化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法作為篩選試驗測定丙肝抗體的評價[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2013，20（4）：246-250.

[7] Alter MJ，Kuhnert WL，F(xiàn)inelli L. Guidelines for laboratory testingand result reporting of antibody to hepatitis C virus.NNWR Reomm Rep[J].2003，52 （1）：13-16.

[8] 林益振，謝尚陣.臨界值影響丙型肝炎抗體檢查結(jié)果的分析[J].中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志， 2009，10（6）：518-519.

（收稿日期：2014-04-05）endprint

在臨床實驗室中檢驗中，需先對使用的方法和程程序進行評估，確定其符合要求后才可正式使用。Kappa檢驗是用于分析計數(shù)資料和等級分組資料一致性檢驗中的一種方法，在肝炎病毒血清標(biāo)志物等二分變量（陰性、陽性）檢測中，一般選擇使用使用檢驗法，以判斷不同方法學(xué)是否存在一致性及相關(guān)程度。該文結(jié)果顯示化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法在丙型肝炎病毒抗體檢測中的Kappa系數(shù)達到0.76，具有高度一致性，與同類研究報道結(jié)果基本一致[4]，結(jié)果表明兩種試劑均可用于血源篩查、臨床術(shù)前初篩。ELISA試劑的特異性較好，發(fā)光試劑的靈敏度較高，兩種試劑均存在漏檢現(xiàn)象，實際工作中如能聯(lián)合應(yīng)用可提高檢出率[6]。

另外該研究參照美國CDC丙型肝炎實驗導(dǎo)則[7]，使用S/CO.≥8可判斷為陽性作為分組依據(jù)，對發(fā)光法初篩陽性的標(biāo)本再進行RIBA確認試驗，發(fā)現(xiàn)低值組的陽性率為24%，而高值組的陽性率為88%，提示中國人群的抗HCV陽性預(yù)測值與美國有一定的差異，目前的抗-HCV 診斷試劑盒均采用基因工程或合成多肽抗原，而由于HCV基因易發(fā)生變異，其基因呈現(xiàn)高度異質(zhì)性，編碼氨基酸序列明顯改變，可引起抗原性的改變，現(xiàn)階段試劑的檢測抗原多為2型抗原，而以往的研究發(fā)現(xiàn)，我國HCV患者多為1型，因此當(dāng)前的試劑并不適用于中國所有地區(qū)[4]。提示實驗室應(yīng)對抗HCV試劑的S/CO.比值設(shè)定進行評估，使用在所有人群中經(jīng)過驗證的能夠預(yù)測確認試驗≥95%陽性率的S/CO.比值作為是否進行確認試驗的依據(jù)，并設(shè)立一定范圍內(nèi)的灰區(qū)，以達到靈敏度和特異性的最佳平衡[8]，該研究還提示對初檢呈弱反應(yīng)者有必要進行確認試驗，跟蹤觀察。

[參考文獻]

[1] 中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會，中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分學(xué).丙型肝炎防治指南[Z]，2004.

[2] 楊凡，萬海英，單詠梅，等.應(yīng)用Kappa檢驗對乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物和丙型肝炎病毒抗體檢測方法的評估[J].中華實驗和臨床感染病雜志：電子版，2010，4（1）：52-55.

[3] 李新建.酶聯(lián)免疫法檢測血清丙肝抗體的測量不確定度的評估[J].中國輸血雜志，2013，26（7）：630-632.

[4] 張旋，裴元元，宋世軍，等.4種國產(chǎn)丙型肝炎病毒抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑的檢測結(jié)果分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2012（22）：2869-2870.

[5] 吳軍，蔣理，謝而付，等.三種國產(chǎn)抗-HCV酶聯(lián)免疫診斷試劑檢測結(jié)果與電化學(xué)發(fā)光法比較[J].中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2013（20）：9056-9058.

[6] 王燕，尹秋霞，竇恒利，等.化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法作為篩選試驗測定丙肝抗體的評價[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2013，20（4）：246-250.

[7] Alter MJ，Kuhnert WL，F(xiàn)inelli L. Guidelines for laboratory testingand result reporting of antibody to hepatitis C virus.NNWR Reomm Rep[J].2003，52 （1）：13-16.

[8] 林益振，謝尚陣.臨界值影響丙型肝炎抗體檢查結(jié)果的分析[J].中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志， 2009，10（6）：518-519.

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在臨床實驗室中檢驗中，需先對使用的方法和程程序進行評估，確定其符合要求后才可正式使用。Kappa檢驗是用于分析計數(shù)資料和等級分組資料一致性檢驗中的一種方法，在肝炎病毒血清標(biāo)志物等二分變量（陰性、陽性）檢測中，一般選擇使用使用檢驗法，以判斷不同方法學(xué)是否存在一致性及相關(guān)程度。該文結(jié)果顯示化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法在丙型肝炎病毒抗體檢測中的Kappa系數(shù)達到0.76，具有高度一致性，與同類研究報道結(jié)果基本一致[4]，結(jié)果表明兩種試劑均可用于血源篩查、臨床術(shù)前初篩。ELISA試劑的特異性較好，發(fā)光試劑的靈敏度較高，兩種試劑均存在漏檢現(xiàn)象，實際工作中如能聯(lián)合應(yīng)用可提高檢出率[6]。

另外該研究參照美國CDC丙型肝炎實驗導(dǎo)則[7]，使用S/CO.≥8可判斷為陽性作為分組依據(jù)，對發(fā)光法初篩陽性的標(biāo)本再進行RIBA確認試驗，發(fā)現(xiàn)低值組的陽性率為24%，而高值組的陽性率為88%，提示中國人群的抗HCV陽性預(yù)測值與美國有一定的差異，目前的抗-HCV 診斷試劑盒均采用基因工程或合成多肽抗原，而由于HCV基因易發(fā)生變異，其基因呈現(xiàn)高度異質(zhì)性，編碼氨基酸序列明顯改變，可引起抗原性的改變，現(xiàn)階段試劑的檢測抗原多為2型抗原，而以往的研究發(fā)現(xiàn)，我國HCV患者多為1型，因此當(dāng)前的試劑并不適用于中國所有地區(qū)[4]。提示實驗室應(yīng)對抗HCV試劑的S/CO.比值設(shè)定進行評估，使用在所有人群中經(jīng)過驗證的能夠預(yù)測確認試驗≥95%陽性率的S/CO.比值作為是否進行確認試驗的依據(jù)，并設(shè)立一定范圍內(nèi)的灰區(qū)，以達到靈敏度和特異性的最佳平衡[8]，該研究還提示對初檢呈弱反應(yīng)者有必要進行確認試驗，跟蹤觀察。

[參考文獻]

[1] 中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會，中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分學(xué).丙型肝炎防治指南[Z]，2004.

[2] 楊凡，萬海英，單詠梅，等.應(yīng)用Kappa檢驗對乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物和丙型肝炎病毒抗體檢測方法的評估[J].中華實驗和臨床感染病雜志：電子版，2010，4（1）：52-55.

[3] 李新建.酶聯(lián)免疫法檢測血清丙肝抗體的測量不確定度的評估[J].中國輸血雜志，2013，26（7）：630-632.

[4] 張旋，裴元元，宋世軍，等.4種國產(chǎn)丙型肝炎病毒抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑的檢測結(jié)果分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2012（22）：2869-2870.

[5] 吳軍，蔣理，謝而付，等.三種國產(chǎn)抗-HCV酶聯(lián)免疫診斷試劑檢測結(jié)果與電化學(xué)發(fā)光法比較[J].中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2013（20）：9056-9058.

[6] 王燕，尹秋霞，竇恒利，等.化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法作為篩選試驗測定丙肝抗體的評價[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2013，20（4）：246-250.

[7] Alter MJ，Kuhnert WL，F(xiàn)inelli L. Guidelines for laboratory testingand result reporting of antibody to hepatitis C virus.NNWR Reomm Rep[J].2003，52 （1）：13-16.

[8] 林益振，謝尚陣.臨界值影響丙型肝炎抗體檢查結(jié)果的分析[J].中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志， 2009，10（6）：518-519.

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