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    腎虛型自然流產(chǎn)模型大鼠不同干預(yù)方法對其子代生長發(fā)育及行為學(xué)的影響

    2014-11-15 22:34:51趙靜等
    中外醫(yī)療 2014年19期

    趙靜等

    [摘要] 目的 探究低劑量助孕丸、高劑量助孕丸和達芙通對腎虛型自然流產(chǎn)模型大鼠其子代生長發(fā)育及行為學(xué)的影響。 方法將14只SPF級母鼠隨機分成5組,模型組、低劑量助孕丸組、高劑量助孕丸組、達芙通組、空白組,繁殖出子代小鼠,記錄子鼠第1、7、13、19天的體重并繪制出生長曲線圖,觀測初生子鼠翻身試驗、3周時平行爬桿實驗爬行距離及跌落次數(shù)。結(jié)果 ①不同干預(yù)組對子鼠D7、D13、D19的體重影響差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),②不同干預(yù)組對子鼠初生翻身試驗的影響差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),③不同干預(yù)組對子鼠平行爬桿實驗爬行距離、跌落次數(shù)的影響差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論 腎虛型自然流產(chǎn)模型大鼠對其子代的體重、平行爬桿距離及跌落次數(shù)均有影響,達芙通、助孕丸能對該類子鼠的體重、平行爬桿距離及跌落次數(shù)產(chǎn)生積極的影響,助孕丸的影響與其劑量有關(guān),達芙通、助孕丸對子鼠生長發(fā)育的影響會隨著子鼠的生長而改變。

    [關(guān)鍵詞] 腎虛型自然流產(chǎn)模型;子代生長發(fā)育;子代行為學(xué)

    [中圖分類號] R114 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742(2014)07(a)-0041-02

    目前,大量的研究證實,母鼠妊娠期間暴露于一些特殊環(huán)境,接觸一些特殊物質(zhì),會對其子代生長發(fā)育及行為學(xué)產(chǎn)生影響。如劉艷華等[1]、劉婉華等[2]、丁淑瑾等[3]等均證實了這一點?;谝陨险J(rèn)識,該研究2011—2013年從中醫(yī)角度,腎虛型自然流產(chǎn)模型大鼠進行不同干預(yù)處理,從而觀察其子代生長發(fā)育及行為學(xué)的影響,現(xiàn)報道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    羥基脲(規(guī)格:10 mg×20片/盒,國藥準(zhǔn)字:H37021289);助孕丸(規(guī)格:36 g/瓶;達芙通地屈孕酮片,規(guī)格:10 mg×20片/盒,批準(zhǔn)文號:H20090470)。

    1.2 動物

    SPF級雄性SD大鼠5只,購自中山大學(xué)實驗動物中心,合格證號:0112829;SPF級雌性SD大鼠14只,購自廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心,合格證號:0116331;飼養(yǎng)于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院SPF級實驗中心,檢疫合格后于標(biāo)準(zhǔn)條件(22~25 ℃,14 h照明)下飼養(yǎng)。

    2 方法

    2.1 分組

    按隨機數(shù)字表將雌性大鼠分為5組,模型組(3只)、低劑量助孕丸組(3只)、高劑量助孕丸組(3只)、達芙通組(3只),空白組(2只)。

    2.2 確定妊娠

    將雌鼠與雄鼠按2∶1的比例于每晚7點至次日早上7點合籠交配,第2天7:30—8:30行陰道涂片檢查,以涂片中發(fā)現(xiàn)大量精子確定為妊娠第1天。連續(xù)合籠7 d未見大量精子則停止合籠,14 d后再次合籠。

    2.3 造模模型組

    妊娠第2~8天早上9點以羥基脲450 mg/(kg·d)灌胃,下午4點以生理鹽水灌胃;低劑量助孕丸組:妊娠第2~8天上午以羥基脲450 mg/(kg·d)灌胃,下午4點以助孕丸3號濃縮干粉3.54 g/(kg·d)(成人等效劑量)灌胃;高劑量助孕丸組:妊娠第2~8天早上8點以羥基脲450 mg/(kg·d)灌胃,下午4點以助孕丸3號濃縮干粉7.08 g/(kg·d)(成人等效劑量2倍)灌胃;達芙通組:妊娠第2~8天早上8點以羥基脲450 mg/(kg·d)灌胃,下午4點以達芙通3 mg/(kg·d)灌胃;空白組:妊娠第2~8天早上8點及下午4點均以生理鹽水450 mg/(kg·d)灌胃。

    造模完成后妊娠母鼠于孕18 d獨立分籠,于孕(21±2)d產(chǎn)下子鼠,產(chǎn)下子鼠當(dāng)天確定為出生第1天。

    2.4 指標(biāo)監(jiān)測

    ①母鼠懷孕及產(chǎn)子情況;②子鼠體重:對子鼠出生第1、7、13、19天分別稱重;③初生鼠翻身實驗:對子代初生鼠于當(dāng)天做翻身實驗,方法是將初生鼠四腳朝天,背于實驗臺,觀察在10 s內(nèi)能翻身者,四腳著地者為翻身成功,否則為失??;④平行爬桿距離及跌落次數(shù):將3周子鼠置于直徑約2 cm 的鋼管上,用秒表計算1 min內(nèi)爬行距離及跌落次數(shù)。

    2.5 統(tǒng)計方法

    所有計量數(shù)據(jù)均以(x±s)表示,運用SPSS15.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析,組間比較采用ANOVA分析。

    3 實驗結(jié)果

    3.1 不同干預(yù)組產(chǎn)子情況

    模型組產(chǎn)子(7.50±0.500),低劑量助孕丸組(12.00±1.000),高劑量助孕丸組(10.00±1.000),達芙通組(5.00±1.000),空白組(9.00±0.000)。

    3.2 子鼠體重

    經(jīng)統(tǒng)計,不同干預(yù)組子鼠在D1平均體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.500 >0.05),D7、D13、D19差異有統(tǒng)計學(xué)意義。與模型組比較,D7,達芙通組高于模型組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.003 <0.01),空白組高于模型組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002 <0.01),D13,空白組高于模型組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.006 <0.01),達芙通組高于模型組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000 <0.01),D19,空白組高于模型組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.005 <0.01),高劑量助孕丸組高于模型組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.030 <0.05),達芙通組高于模型組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000 <0.01)。與空白組相比較,D7,空白組高于模型組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002 <0.01),空白組高于高助孕丸組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001 <0.01);D13,達芙通組高于空白組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000 <0.01),高助孕丸組高于空白組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000 <0.01),低助孕丸組高于空白組(P=0.001 <0.01),D19,達芙通組高于空白組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001 <0.01),空白組高于低劑量助孕丸組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001 <0.01)。見表1。endprint

    3.3 子鼠行為學(xué)實驗及比較

    3.3.1 初生鼠翻身實驗 成功率:模型組(0.60±0.507),低劑量助孕丸組(0.52±0.511),高劑量助孕丸組(0.78±0.411),達芙通組(0.00±0.000),空白組(0.44±0.527)。經(jīng)統(tǒng)計,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=2.237,P=0.076),不同干預(yù)組初生翻身實驗結(jié)果無顯著差異。

    3.3.2 子鼠平行爬桿實驗爬行距離 模型組(35.00±25.386),低劑量助孕丸組(67.86±42.416),高劑量助孕丸組(32.44±19.648),達芙通組(122.40±38.017),空白組(86.67±43.116)。經(jīng)統(tǒng)計,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=8.380,P=0.000),不同干預(yù)組平行爬桿實驗爬行距離有顯著差異。達芙通組高于模型組(P=0.000),空白組高于模型組(P=0.001),低劑量助孕丸組高于模型組(P=0.008),空白組高于高劑量助孕丸組(P=0.002)。

    3.3.3 子鼠平行爬桿實驗跌落次數(shù) 模型組(2.33±1.345),低劑量助孕丸組(1.61±1.469),高劑量助孕丸組(1.33±1.323),達芙通組(0.00±0.000),空白組(0.11±0.333)。經(jīng)統(tǒng)計,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=6.203,P=0.000),不同干預(yù)組平行爬桿實驗跌落次數(shù)有顯著性差異??瞻捉M低于模型組(P=0.000),達芙通組低于模型組(P=0.001),空白組低于低劑量助孕丸組(P=0.004)。

    3 討論

    體重是反映子鼠生理變化的基本指標(biāo),而初生翻身試驗、平行爬桿距離、跌落次數(shù)是反映子鼠行為癥狀的基本指標(biāo)[4]。這些指標(biāo)一起可以用來評價子鼠生長發(fā)育及行為學(xué)的情況。邢志強[5]、丁瑜等[6]、張婧等[7]、李學(xué)偉[8]的實驗發(fā)現(xiàn)母鼠妊娠期暴露于一些特殊的物質(zhì),如:氟西汀、鄰苯二甲酸、雙酚A、氰戊菊酯、會對子鼠的行為學(xué)產(chǎn)生影響。張先庚等[9]的實驗發(fā)現(xiàn)優(yōu)裕環(huán)境母鼠胎教可以增加子鼠的體重、身長,從而促進子鼠的生長發(fā)育;母代的地震恐懼影響可以遺傳到子代,并降低體重和身長,延緩子代的生長發(fā)育:金匱腎氣丸可糾正地震恐懼導(dǎo)致的子鼠發(fā)育遲緩。王米渠等[10]通過貓嚇孕鼠造?!翱謧I”的實驗方法,對第二代初生鼠、青年鼠、成年鼠的諸種行為遺傳測試,其結(jié)果表明受驚恐的子代鼠在“作強”(體力、心力、性力)行為的活動水平降低。

    該實驗以羅頌平教授研究團隊病證結(jié)合腎虛型先兆流產(chǎn)模型為基礎(chǔ),探索不同干預(yù)方法對其子代行為學(xué)的影響。該實驗的結(jié)果提示:母鼠腎虛會影響到子鼠生長發(fā)育及行為學(xué),達芙通、助孕丸能對腎虛型母鼠產(chǎn)下的子鼠的生長發(fā)育和行為學(xué)起到積極的作用,這一點與其他實驗結(jié)果相同,但助孕丸的劑量仍需斟酌。該實驗未從細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等角度進入深入研究探討分析,這一點也是作者將來進一步研究的方向。

    [參考文獻]

    [1] 劉艷華,劉秋芳.鄰苯二甲酸二( 2-乙基) 己酯( DEHP) 胚胎期暴露對子代大鼠神經(jīng)行為發(fā)育的影響[J].毒理學(xué)雜志,2011,25(6):414-416

    [2] 劉婉華,郝紅軍.不同劑量的He-Ne激光對妊娠母鼠子代的生長及行為的影響[J].激光雜志,2003,24(5):96-97.

    [3] 丁淑瑾,王志新.母源性十溴聯(lián)苯醚胃灌后對出生子鼠數(shù)量及體重的影響[J].實用醫(yī)學(xué)雜志,2010,24(12):2056-2057.

    [4] 王米渠.中國遺傳學(xué)[M].西寧:青海人民出版社,1997.

    [5] 邢志強.母鼠孕前慢性應(yīng)激和氟西汀治療對母鼠及其子代行為學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)的影響[D].汕頭:汕頭大學(xué),2011.

    [6] 丁瑜,高宇.妊娠中末期鄰苯二甲酸(2-乙基己基)酯暴露對母鼠妊娠結(jié)局及子鼠生長發(fā)育的影響[J].上海交通大學(xué)學(xué)報,2011(31):225-227.

    [7] 張婧,徐曉紅.圍生期雙酚 A 暴露對不同性別子代小鼠行為的影響[J].心理學(xué)報,2009(9):832-841.

    [8] 李學(xué)偉.胚胎期母體暴露氰戊菊酯加速CD-1小鼠年齡相關(guān)性行為改變[D].合肥:安徽醫(yī)科大學(xué),2011.

    [9] 張先庚,張輝.優(yōu)裕環(huán)境胎教與地震恐懼胎損的SD 大鼠母子兩代行為遺傳學(xué)研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2012,39(7):1403-1404.

    [10] 王米渠,駱永珍.”腎主生殖”母鼠與子代行為遺傳的免疫學(xué)研究[J].貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1997,19(1):53-54.

    (收稿日期:2014-03-24)endprint

    3.3 子鼠行為學(xué)實驗及比較

    3.3.1 初生鼠翻身實驗 成功率:模型組(0.60±0.507),低劑量助孕丸組(0.52±0.511),高劑量助孕丸組(0.78±0.411),達芙通組(0.00±0.000),空白組(0.44±0.527)。經(jīng)統(tǒng)計,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=2.237,P=0.076),不同干預(yù)組初生翻身實驗結(jié)果無顯著差異。

    3.3.2 子鼠平行爬桿實驗爬行距離 模型組(35.00±25.386),低劑量助孕丸組(67.86±42.416),高劑量助孕丸組(32.44±19.648),達芙通組(122.40±38.017),空白組(86.67±43.116)。經(jīng)統(tǒng)計,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=8.380,P=0.000),不同干預(yù)組平行爬桿實驗爬行距離有顯著差異。達芙通組高于模型組(P=0.000),空白組高于模型組(P=0.001),低劑量助孕丸組高于模型組(P=0.008),空白組高于高劑量助孕丸組(P=0.002)。

    3.3.3 子鼠平行爬桿實驗跌落次數(shù) 模型組(2.33±1.345),低劑量助孕丸組(1.61±1.469),高劑量助孕丸組(1.33±1.323),達芙通組(0.00±0.000),空白組(0.11±0.333)。經(jīng)統(tǒng)計,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=6.203,P=0.000),不同干預(yù)組平行爬桿實驗跌落次數(shù)有顯著性差異。空白組低于模型組(P=0.000),達芙通組低于模型組(P=0.001),空白組低于低劑量助孕丸組(P=0.004)。

    3 討論

    體重是反映子鼠生理變化的基本指標(biāo),而初生翻身試驗、平行爬桿距離、跌落次數(shù)是反映子鼠行為癥狀的基本指標(biāo)[4]。這些指標(biāo)一起可以用來評價子鼠生長發(fā)育及行為學(xué)的情況。邢志強[5]、丁瑜等[6]、張婧等[7]、李學(xué)偉[8]的實驗發(fā)現(xiàn)母鼠妊娠期暴露于一些特殊的物質(zhì),如:氟西汀、鄰苯二甲酸、雙酚A、氰戊菊酯、會對子鼠的行為學(xué)產(chǎn)生影響。張先庚等[9]的實驗發(fā)現(xiàn)優(yōu)裕環(huán)境母鼠胎教可以增加子鼠的體重、身長,從而促進子鼠的生長發(fā)育;母代的地震恐懼影響可以遺傳到子代,并降低體重和身長,延緩子代的生長發(fā)育:金匱腎氣丸可糾正地震恐懼導(dǎo)致的子鼠發(fā)育遲緩。王米渠等[10]通過貓嚇孕鼠造?!翱謧I”的實驗方法,對第二代初生鼠、青年鼠、成年鼠的諸種行為遺傳測試,其結(jié)果表明受驚恐的子代鼠在“作強”(體力、心力、性力)行為的活動水平降低。

    該實驗以羅頌平教授研究團隊病證結(jié)合腎虛型先兆流產(chǎn)模型為基礎(chǔ),探索不同干預(yù)方法對其子代行為學(xué)的影響。該實驗的結(jié)果提示:母鼠腎虛會影響到子鼠生長發(fā)育及行為學(xué),達芙通、助孕丸能對腎虛型母鼠產(chǎn)下的子鼠的生長發(fā)育和行為學(xué)起到積極的作用,這一點與其他實驗結(jié)果相同,但助孕丸的劑量仍需斟酌。該實驗未從細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等角度進入深入研究探討分析,這一點也是作者將來進一步研究的方向。

    [參考文獻]

    [1] 劉艷華,劉秋芳.鄰苯二甲酸二( 2-乙基) 己酯( DEHP) 胚胎期暴露對子代大鼠神經(jīng)行為發(fā)育的影響[J].毒理學(xué)雜志,2011,25(6):414-416

    [2] 劉婉華,郝紅軍.不同劑量的He-Ne激光對妊娠母鼠子代的生長及行為的影響[J].激光雜志,2003,24(5):96-97.

    [3] 丁淑瑾,王志新.母源性十溴聯(lián)苯醚胃灌后對出生子鼠數(shù)量及體重的影響[J].實用醫(yī)學(xué)雜志,2010,24(12):2056-2057.

    [4] 王米渠.中國遺傳學(xué)[M].西寧:青海人民出版社,1997.

    [5] 邢志強.母鼠孕前慢性應(yīng)激和氟西汀治療對母鼠及其子代行為學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)的影響[D].汕頭:汕頭大學(xué),2011.

    [6] 丁瑜,高宇.妊娠中末期鄰苯二甲酸(2-乙基己基)酯暴露對母鼠妊娠結(jié)局及子鼠生長發(fā)育的影響[J].上海交通大學(xué)學(xué)報,2011(31):225-227.

    [7] 張婧,徐曉紅.圍生期雙酚 A 暴露對不同性別子代小鼠行為的影響[J].心理學(xué)報,2009(9):832-841.

    [8] 李學(xué)偉.胚胎期母體暴露氰戊菊酯加速CD-1小鼠年齡相關(guān)性行為改變[D].合肥:安徽醫(yī)科大學(xué),2011.

    [9] 張先庚,張輝.優(yōu)裕環(huán)境胎教與地震恐懼胎損的SD 大鼠母子兩代行為遺傳學(xué)研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2012,39(7):1403-1404.

    [10] 王米渠,駱永珍.”腎主生殖”母鼠與子代行為遺傳的免疫學(xué)研究[J].貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1997,19(1):53-54.

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    3.3 子鼠行為學(xué)實驗及比較

    3.3.1 初生鼠翻身實驗 成功率:模型組(0.60±0.507),低劑量助孕丸組(0.52±0.511),高劑量助孕丸組(0.78±0.411),達芙通組(0.00±0.000),空白組(0.44±0.527)。經(jīng)統(tǒng)計,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=2.237,P=0.076),不同干預(yù)組初生翻身實驗結(jié)果無顯著差異。

    3.3.2 子鼠平行爬桿實驗爬行距離 模型組(35.00±25.386),低劑量助孕丸組(67.86±42.416),高劑量助孕丸組(32.44±19.648),達芙通組(122.40±38.017),空白組(86.67±43.116)。經(jīng)統(tǒng)計,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=8.380,P=0.000),不同干預(yù)組平行爬桿實驗爬行距離有顯著差異。達芙通組高于模型組(P=0.000),空白組高于模型組(P=0.001),低劑量助孕丸組高于模型組(P=0.008),空白組高于高劑量助孕丸組(P=0.002)。

    3.3.3 子鼠平行爬桿實驗跌落次數(shù) 模型組(2.33±1.345),低劑量助孕丸組(1.61±1.469),高劑量助孕丸組(1.33±1.323),達芙通組(0.00±0.000),空白組(0.11±0.333)。經(jīng)統(tǒng)計,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=6.203,P=0.000),不同干預(yù)組平行爬桿實驗跌落次數(shù)有顯著性差異。空白組低于模型組(P=0.000),達芙通組低于模型組(P=0.001),空白組低于低劑量助孕丸組(P=0.004)。

    3 討論

    體重是反映子鼠生理變化的基本指標(biāo),而初生翻身試驗、平行爬桿距離、跌落次數(shù)是反映子鼠行為癥狀的基本指標(biāo)[4]。這些指標(biāo)一起可以用來評價子鼠生長發(fā)育及行為學(xué)的情況。邢志強[5]、丁瑜等[6]、張婧等[7]、李學(xué)偉[8]的實驗發(fā)現(xiàn)母鼠妊娠期暴露于一些特殊的物質(zhì),如:氟西汀、鄰苯二甲酸、雙酚A、氰戊菊酯、會對子鼠的行為學(xué)產(chǎn)生影響。張先庚等[9]的實驗發(fā)現(xiàn)優(yōu)裕環(huán)境母鼠胎教可以增加子鼠的體重、身長,從而促進子鼠的生長發(fā)育;母代的地震恐懼影響可以遺傳到子代,并降低體重和身長,延緩子代的生長發(fā)育:金匱腎氣丸可糾正地震恐懼導(dǎo)致的子鼠發(fā)育遲緩。王米渠等[10]通過貓嚇孕鼠造?!翱謧I”的實驗方法,對第二代初生鼠、青年鼠、成年鼠的諸種行為遺傳測試,其結(jié)果表明受驚恐的子代鼠在“作強”(體力、心力、性力)行為的活動水平降低。

    該實驗以羅頌平教授研究團隊病證結(jié)合腎虛型先兆流產(chǎn)模型為基礎(chǔ),探索不同干預(yù)方法對其子代行為學(xué)的影響。該實驗的結(jié)果提示:母鼠腎虛會影響到子鼠生長發(fā)育及行為學(xué),達芙通、助孕丸能對腎虛型母鼠產(chǎn)下的子鼠的生長發(fā)育和行為學(xué)起到積極的作用,這一點與其他實驗結(jié)果相同,但助孕丸的劑量仍需斟酌。該實驗未從細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等角度進入深入研究探討分析,這一點也是作者將來進一步研究的方向。

    [參考文獻]

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    [4] 王米渠.中國遺傳學(xué)[M].西寧:青海人民出版社,1997.

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    [7] 張婧,徐曉紅.圍生期雙酚 A 暴露對不同性別子代小鼠行為的影響[J].心理學(xué)報,2009(9):832-841.

    [8] 李學(xué)偉.胚胎期母體暴露氰戊菊酯加速CD-1小鼠年齡相關(guān)性行為改變[D].合肥:安徽醫(yī)科大學(xué),2011.

    [9] 張先庚,張輝.優(yōu)裕環(huán)境胎教與地震恐懼胎損的SD 大鼠母子兩代行為遺傳學(xué)研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2012,39(7):1403-1404.

    [10] 王米渠,駱永珍.”腎主生殖”母鼠與子代行為遺傳的免疫學(xué)研究[J].貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1997,19(1):53-54.

    (收稿日期:2014-03-24)endprint

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