KMnO4-熒光素化學(xué)發(fā)光體系的研究

陳 素 萍

（渭南職業(yè)技術(shù)學(xué)院， 陜西 渭南 714000）

甲睪酮為人工合成的雄激素，在臨床上應(yīng)用廣泛。能促使紅細(xì)胞和血狀紅蛋白增加，從而增強(qiáng)運(yùn)動能力。國家體育總局規(guī)定，甲睪酮屬一類興奮劑，是國內(nèi)外體育機(jī)構(gòu)嚴(yán)禁的藥物[1]。長期大劑量應(yīng)用易致膽汁郁積性肝炎，肝功能異常，表現(xiàn)為疼痛。女性：可能引起痤瘡，聲音變粗，月經(jīng)紊亂；男性：睪丸萎縮,精液減少。目前有關(guān)甲睪酮檢測的方法有紫外分光光度法[2]，色譜法[3]，免疫法[4]和高效液相法[5]等。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

IFFM-E型流動注射化學(xué)發(fā)光分析儀(西安瑞邁電子科技有限公司)；TU-1901 紫外可見分光光度計(jì) (北京普析通用儀器有限公司)。

甲睪酮 (中國藥品生物制品檢定所) 標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.0×10-3g/mL)：準(zhǔn)確稱量0.050 0 g 甲睪酮對照品，用乙醇溶解并定容于50 mL 容量瓶中，冷藏備用；

熒光素(1.0×10-3mol/L)，使用時準(zhǔn)確稱取0.0332 g 熒光素于燒杯中加少量水溶解，轉(zhuǎn)移至100 mL 容量瓶中用蒸餾水定容；

KMnO4(5.0×10-2mol/L)：稱取 0.3900 g KMnO4，用水溶解定容于50 mL 容量瓶中；

其它試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

按圖1所示，按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)連接好流路。通過蠕動泵P1將a和b溶液混合作為載流， d和c混合溶液通過進(jìn)樣閥注入到載流液中產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。

圖1 流動注射化學(xué)發(fā)光分析流路圖Fig.1 Schematic diagram of flow injection chemiluminescence analyzer

2 結(jié)果與討論

2.1 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)條件的選擇

2.1.1 高錳酸鉀濃度

試驗(yàn)選取濃度為2 mol/L硫酸作為反應(yīng)介質(zhì)，考察了KMnO4濃度在5.0×10-5～5.0×10-3mol/L范圍內(nèi)對體系化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響（圖2）。選擇KMnO4的濃度為5.0×10-4mol/L。

圖2 KMnO4對化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響Fig.2 Influence of concentration of KMnO4 solution on the CL intensity

2.1.2 熒光素濃度影響

分別試驗(yàn)了甲醛、亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、羅丹明B、羅丹明6G、核黃素、棚皮素和熒光素[6]對甲睪酮與酸性KMnO4化學(xué)發(fā)光體系的影響，選擇熒光素為增敏劑?？疾炝藷晒馑貪舛葘w系化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響，熒光素的濃度為1.0×l0-3mol /L。

2.1.3 流速影響

流速太慢或太快均會導(dǎo)致無法獲取最大發(fā)光信號。故試驗(yàn)最終選擇流速為3.0 mL/min時，化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度最大。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線、精密度與檢出限

在優(yōu)化試驗(yàn)條件下，化學(xué)發(fā)光信號強(qiáng)度與甲睪酮在8.0×10-8～1.0×10-5g/mL 范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。線性方程為：I=0.25C+10.3 (r=0.999 0) 。根據(jù)

IUPAC 規(guī)定，該方法的檢出限為3×10-8g/mL。對6.0×10-6g/mL甲睪酮溶液進(jìn)行了11次平行測定，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.6%。

2.3 干擾試驗(yàn)

在選擇的實(shí)驗(yàn)條件下，對6.0×10-6g/mL 甲睪酮進(jìn)行干擾試驗(yàn)，見表1。

表1 干擾試驗(yàn)結(jié)果Table 1 Result of interference

2.4 樣品分析

分別取市售不同廠家的甲睪酮片劑各10片、研細(xì)，稱取適量( 約含甲睪酮20 mg) , 依據(jù)文獻(xiàn)[7]處理樣品，按照實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行甲睪酮含量測定，并與紫外分光光度法[2]進(jìn)行了對照，結(jié)果列于表2。

表2 藥物制劑中甲睪酮的測定Table 2 Determination of methyltestosterone in samples

3 結(jié) 論

本文發(fā)現(xiàn)，甲睪酮與濃硫酸的反應(yīng)產(chǎn)物可以與酸性 KMnO4反應(yīng)產(chǎn)生弱的化學(xué)發(fā)光信號[8-10]；熒光素的存在能顯著增強(qiáng)該體系的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度。基于此，建立了測定甲睪酮的流動注射化學(xué)發(fā)光新方法。

［1］《2004年興奮劑目錄》[M].

［2］《中華人民共和國藥典》二部[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 1990: 162.

［3］毛向群. TLC法快速檢測補(bǔ)腎壯陽類中成藥中非法添加的甲睪[J].臨床合理用藥, 2012, 5(9B): 124.

［4］姜金慶,張海棠,王自良.19-去甲睪酮免疫學(xué)檢測方法的篩選和化[J].生物技術(shù), 2010, 20(5): 57-59.

［5］林曉輝,張雪原,陳璉,丁紅嬰. RP- HPLC測定甲睪酮片中甲睪 酮的含量[J]. 廣東藥學(xué), 2005, 15(6): 15-16.

［6］ 朱金枝.性激素類獸藥的化學(xué)發(fā)光分析研究[D].西安:陜西師范大學(xué)2008.

［7］馬紅燕. 膠束增敏紫外吸光光度法測定甲睪酮[J]. 分析分析科學(xué)學(xué)報 1998, 14(3): 225-227.

［8］范順利,李薇,林金明,等.反相流動注射-化學(xué)發(fā)光法測定氫化可的松[J].藥物分析化學(xué),2004,32(11):1421-1425.

［9］H Kubo,A Toribd.Chemiluminescence Flow Injection Analysis of Re ducing Agents Based on the Luminol Reaction[J].Anal.Chim.Aeta.,1997,353(2-3):345-359.

［10］聶峰,寧光輝, 吳迎春, NaIO4-H2O2-腎上腺素 -Cu2+化學(xué)發(fā)光新體系測定尿中腎上腺素[J].分析實(shí)驗(yàn)室,2006，25（11）:58-61.