• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    應(yīng)用AG490阻斷STAT3對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡Th17/Treg平衡的調(diào)控研究

    2019-01-15 04:16:26黃可可周春燕顏志婷葉海燕
    關(guān)鍵詞:紅斑狼瘡系統(tǒng)性分化

    黃可可 周春燕 顏志婷 葉海燕

    【摘要】 目的:研究應(yīng)用免疫抑制劑AG490阻斷信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子3(STAT3)對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE) 患者輔助性T細(xì)胞17(Th17)/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)平衡的調(diào)控。方法:選取本院于2018年10月-2019年6月收治的10例SLE(觀察組)以及10例體檢健康者(對(duì)照組),抽取所有受試者外周血約10 mL,采用免疫磁珠法提取CD4+T細(xì)胞,并用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)所有受試者Th17/Treg細(xì)胞亞群變化。用AG490(0、25、50、100 μM)處理患者CD4+T細(xì)胞,檢測(cè)Th17/Treg細(xì)胞亞群以及細(xì)胞因子變化,并采用Q-PCR了解STAT3、Foxp3、RORγt水平。結(jié)果:觀察組患者Th17顯著高于對(duì)照組,而Treg水平顯著低于對(duì)照組,兩組患者Th17/Treg比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。隨著AG490濃度的增加,Th17/Treg比值、IL-6、IL-17表達(dá)水平均逐漸降低,而IL-10、TGF-β水平均顯著增加,各組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。經(jīng)過不同濃度AG490處理后,STAT3、RORγt mRNA水平以及STAT3蛋白水平均顯著降低,其中100 μM劑量組蛋白水平顯著低于其他三組,而Foxp3 mRNA水平顯著增加,各組mRNA水平比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:通過阻斷STAT3信號(hào)通路,可誘導(dǎo)Treg分化以及抑制Th17分化,從而調(diào)控Th17/Treg平衡,可為系統(tǒng)性紅斑狼瘡的治療提供新方向。

    【關(guān)鍵詞】 信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子3 系統(tǒng)性紅斑狼瘡 輔助性T細(xì)胞17 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞

    [Abstract] Objective: To study the regulation of Th17/Treg balance in systemic lupus erythematosus by blocking STAT3. Method: A total of 10 cases of SLE (observation group) and 10 healthy persons undergoing physical examination (control group) were selected in our hospital from October 2018 to June 2019. All subjects were drawn with peripheral blood of about 10 mL, CD4+ T cells were extracted by immunomagnetic beads method and the changes of Th17/Treg cell subsets were detected by flow cytometry. CD4+ T cells were treated with AG490 (0, 25, 50, 100 μM), the changes of Th17/Treg cell subsets and cytokines were detected and the levels of STAT3, Foxp3, RORγt were detected by Q-PCR. Result: The level of Th17 in the observation group was significantly higher than that in the control group, but the level of Treg was significantly lower than that in the control group, there was significant difference in Th17/Treg between the two groups (P<0.05). With the increase of AG490 concentration, the expression level of Th17/Treg ratio and IL-6, IL-17 decreased gradually, while the level of IL-10, TGF-β increased significantly, with significant difference among the groups (P<0.05). After AG490 treatment, the levels of STAT3, RORγt mRNA and STAT3 protein were significantly decreased, the levels of 100 μM dose group were significantly lower than those of the other three groups, while the level of Foxp3 mRNA was significantly increased, and the level of mRNA in each group was significantly different (P<0.05). Conclusion: Blocking STAT3 signaling pathway can induce Treg differentiation and inhibit Th17 differentiation, thus regulating Th17/Treg balance, which can provide a new direction for the treatment of systemic lupus erythematosus.

    [Key words] Signal transduction and activator of transcription 3 Systemic lupus erythematosus Helper T cells Regulatory T cells

    First-authors address: Pingxiang Peoples Hospital, Pingxiang 337000, China

    doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2019.34.036

    系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)是一種累及多系統(tǒng)、多器官的自身免疫性疾病,其發(fā)病可能涉及環(huán)境因素、遺傳因素、藥物以及激素等多個(gè)方面[1]。盡管目前對(duì)于其的具體機(jī)制尚未明確,但越來越多研究表明T細(xì)胞功能過度活化在SLE發(fā)病機(jī)制中起著重要作用[2-3]。AG490(α-氰基-(3,4-羥基)N-芐苯乙烯胺)是JAK2(Janus蛋白酪氨酸激酶)的特異性拮抗劑,JAK2/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是Th細(xì)胞極化和增殖的重要通路,其中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3(signal transducer and activator of transcription 3, STAT3)是Th17細(xì)胞分化、增殖信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的核心,可調(diào)控輔助性T細(xì)胞17(T helper 17 cells, Th17)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulator T cells,Treg)的平衡[4]。研究表明SLE的發(fā)生發(fā)展與Th17/Treg平衡失調(diào),其中Th17可分泌IL-17,從而加強(qiáng)TNF-α的致炎作用,而Treg通過分泌負(fù)性調(diào)節(jié)因子(TGF-β、IL-10)發(fā)揮免疫抑制作用,從而降低機(jī)體炎癥反應(yīng)[5]。王慧蓮等[6]研究發(fā)現(xiàn)通過升高Treg、降低Th17細(xì)胞的比例可發(fā)揮SLE治療效果。目前針對(duì)細(xì)胞免疫異常的免疫干預(yù)治療逐漸成為SLE研究熱點(diǎn),本課題組結(jié)合免疫學(xué)領(lǐng)域最新研究成果,提出應(yīng)用AG490阻斷STAT3后對(duì)SLE Th17/Treg平衡的影響,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 選取本院于2018年10月-2019年6月收治的10例SLE患者(觀察組)以及10例體檢健康者(對(duì)照組),年齡18~60歲,男8例,女12例。該研究已獲得倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn):符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)分會(huì)頒布的關(guān)于SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)[7];年齡≥18歲,生命體征良好;對(duì)照組受試者均為同期于本院體檢合格者,且隨機(jī)選擇,病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):合并自身免疫性疾病、活動(dòng)期的結(jié)核性疾病、嚴(yán)重感染者(危及生命);嚴(yán)重心肺功能不全者,凝血功能障礙,精神疾病者;入組前半年使用免疫抑制劑。

    1.2 方法

    1.2.1 樣品收集 受試者入組后于清晨空腹抽取外周肘靜脈血約10 mL,置于肝素鈉抗凝管中,根據(jù)試劑盒操作步驟,采用免疫磁珠法分離,獲取受試者外周血中的CD4+T細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示細(xì)胞純度超過90%,并于CD4+T細(xì)胞中加入AIM-V Medium CTS培養(yǎng)基,置于飽和濕度培養(yǎng)箱(37 ℃×5% CO2)中培養(yǎng),便可進(jìn)行以下各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)操作。

    1.2.2 Th17與Treg細(xì)胞水平 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兩組受試者Th17、Treg水平,具體操作如下:分離得到CD4+T細(xì)胞后,加入表面染色FITC-IL-10或者FITC-IL-17,細(xì)胞經(jīng)過固定、破膜后,加入PE-RORγt進(jìn)行染色,于4 ℃溫孵育30 min,用PBS洗滌3次后并懸浮于PBS中,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)即可。

    1.2.3 AG490處理 觀察組10例患者CD4+T細(xì)胞等體積混勻后平行取4×5份混合細(xì)胞,分別加入不同濃度的AG490(0、25、50、100 μM),即每個(gè)濃度平行5次,于飽和濕度培養(yǎng)箱(37 ℃×5% CO2)中培養(yǎng)72 h后可依次檢測(cè)細(xì)胞活力、細(xì)胞因子水平以及STAT3 mRNA水平。

    1.2.4 細(xì)胞因子水平 觀察組10例患者CD4+T細(xì)胞等體積混勻后平行取4×5份混合細(xì)胞,分別加入不同濃度的AG490(0、25、50、100 μM),即每個(gè)濃度平行5次,取出經(jīng)不同濃度處理后的CD4+T細(xì)胞,按照ELISA試劑合說明書操作檢測(cè)IL-6、IL-10、IL-17和TGF-β的水平,采用多功能酶標(biāo)儀測(cè)量每孔OD值,λ為450 nm,平行5份。

    1.2.5 相關(guān)mRNA水平 觀察組10例患者CD4+T細(xì)胞等體積混勻后平行取4×5份混合細(xì)胞,分別加入不同濃度的AG490(0、25、50、100 μM),即每個(gè)濃度平行5次,取出經(jīng)不同濃度處理后的CD4+T細(xì)胞,采用Trizol提取細(xì)胞總RNA,取出2 μg反轉(zhuǎn)錄為cDNA,隨后對(duì)反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行PCR反應(yīng),以GAPDH為內(nèi)參基因,按照mRNA檢測(cè)試劑盒提示建立PCR反應(yīng)體系,具體條件:50 ℃、2 min;95 ℃、15 min;60 ℃、30 s;72 ℃、30 s,共40個(gè)循環(huán),用2-ΔΔCt計(jì)算表示表達(dá)水平。見表1。

    1.2.6 STAT3蛋白水平 采用Western blot測(cè)定STAT3蛋白水平。收集不同濃度處理后的CD4+T細(xì)胞,提取總蛋白,采用BCA法測(cè)定蛋白濃度。將待測(cè)蛋白液上樣到十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺(10%)凝膠電泳中,對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行電泳分離,隨即轉(zhuǎn)移至PVDF膜,脫脂奶粉(5%)封閉1 h,將膜取出,清洗,分別加入稀釋度為1︰1 000β-Actin、1︰1 000 STAT3的一抗孵育,4 ℃過夜,TBST洗滌3次,使用二抗辣根過氧化物酶標(biāo)記物(濃度1︰2 000) 37 ℃孵育2 h,TBST洗滌3次,最后滴加ECL進(jìn)行曝光顯影,檢測(cè)蛋白質(zhì)條帶,分析各條帶灰度值,STAT3與β-Actin條帶灰度值之比為蛋白相對(duì)表達(dá)量。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料采用(x±s)表示,比較采用t檢驗(yàn),多組間比較采用F檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料采用率(%)表示,比較采用字2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組基線資料比較 兩組受試者基本資料比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表2。

    2.2 兩組Th17與Treg細(xì)胞水平比較 觀察組患者Th17顯著高于對(duì)照組,而Treg水平顯著低于對(duì)照組,兩組患者Th17/Treg差異顯著,兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

    2.3 不同濃度AG490對(duì)兩組Th17/Treg細(xì)胞平衡的影響 給予不同濃度的AG490后Th17/Treg比值均顯著低于空白觀察組(未加AG490)的(1.45±0.48),AG490濃度分別為25、50、100 μM時(shí),Th17/Treg比值分別為(1.07±0.32)、(0.78±0.21)、(0.62±0.14),各組Th17/Treg水平比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=16.298,P=0.000)。

    2.4 不同濃度AG490對(duì)Th17與Treg細(xì)胞因子水平的影響 隨著AG490濃度的增加IL-6、IL-17表達(dá)水平均顯著降低,而IL-10、TGF-β水平均顯著增加(P<0.05),見表4。

    2.5 不同濃度AG490對(duì)相關(guān)mRNA水平的影響 經(jīng)過不同濃度AG490處理后,STAT3、RORγt mRNA水平均顯著降低,F(xiàn)oxp3 mRNA水平顯著增加,其中加入不同濃度(0、25、50、100 μM)的AG490后,各組mRNA水平比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表5。

    2.6 不同濃度AG490對(duì)STAT3蛋白水平的影響 經(jīng)過不同濃度AG490處理后,STAT3蛋白水平顯著低于未給予AG490組的(0.95±0.25),AG490濃度分別為25、50、100 μM時(shí),STAT3蛋白水平分別為(0.75±0.18)、(0.57±0.09)、(0.45±0.06),各組STAT3蛋白水平比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=8.931,P=0.000)。見圖1。

    3 討論

    SLE是臨床常見的免疫系統(tǒng)疾病,多發(fā)于女性,可累及中樞神經(jīng)、皮膚黏膜、骨骼肌肉、腎等[8]。

    T淋巴細(xì)胞是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞,可在特定環(huán)境中分化為Th1、Th2、Th17、Treg等細(xì)胞,共同調(diào)控機(jī)體免疫反應(yīng),其中Th17與Treg的分化發(fā)育相互制約,Treg細(xì)胞可分泌TGF-β和IL-10,從而抑制巨噬、淋巴細(xì)胞的免疫功能,維持機(jī)體免疫耐受,而Th17則分泌IL-17、IL-6,從而調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞向組織局部浸潤(rùn),引起系統(tǒng)損傷[9-10]。Th17/Treg平衡失調(diào),則可反映SLE進(jìn)展。此次研究結(jié)果顯示,觀察組患者Th17、Th17/Treg均顯著高于對(duì)照組,而Treg水平均顯著低于對(duì)照組(P<0.05),與胡偉等[11]報(bào)道一致,Th17/Treg的免疫平衡參與SLE的病理生理進(jìn)程,其中Th17水平的增加可加劇機(jī)體炎性反應(yīng),促進(jìn)SLE發(fā)展。

    目前SLE的治療通常采用以糖皮質(zhì)激素為基礎(chǔ)的免疫抑制劑聯(lián)合療法,但抑制不足導(dǎo)致病情遷延反復(fù),盡管西羅莫司、霉酚酸酯等新型免疫抑制劑不斷涌現(xiàn),但是療效欠佳,因此深入了解SLE的發(fā)病機(jī)制至關(guān)重要[12-13]。STAT3可通過調(diào)控JAK/STAT通路而參與細(xì)胞增殖、分化、免疫調(diào)節(jié)等過程,可與轉(zhuǎn)錄因子RORγt結(jié)合,調(diào)控Th17細(xì)胞分化增殖,還能與Treg細(xì)胞Foxp3基因轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子上特定部位結(jié)合抑制Foxp3的表達(dá),誘導(dǎo)Treg向Th17轉(zhuǎn)化,引起系膜細(xì)胞增殖、皮膚病變、瘙癢等[14-15]。陳曦等[16]報(bào)道顯示阻斷該信號(hào)通路可調(diào)控T細(xì)胞趨化活性,但具體作用機(jī)制并未明確。本次選用AG490作為JAK/STAT信號(hào)通路特異性阻斷劑,通過給予不同濃度(0、25、50、100 μM)的AG490后,發(fā)現(xiàn)隨著濃度的增加Th17/Treg比值逐漸降低,表明AG490抑制JAK/STAT信號(hào)通路后,Th17分化程度逐漸降低,而Treg分化程度逐漸增加,故而經(jīng)過AG490處理后IL-6、IL-17表達(dá)水平均顯著降低,而IL-10、TGF-β水平均顯著增加(P<0.05)。其中Th17分泌的IL-17可加強(qiáng)TNF-α的致炎作用,以及促進(jìn)機(jī)體中心粒細(xì)胞的增殖、分化以及趨化,從而發(fā)揮強(qiáng)大的促炎性作用,而IL6可誘導(dǎo)STAT3的活化,促進(jìn)STAT3作用于IL-17啟動(dòng)區(qū),誘導(dǎo)IL-17的分泌,兩者相互作用,共同加快了Th17的分化,加重疾病進(jìn)展[6,17]。IL-10、TGF-β是由Treg分泌的一類抑制性的細(xì)胞因子,通過加入AG490后使得Treg分化程度增加,故而IL-10、TGF-β表達(dá)水平顯著增加。

    RORγt、Foxp3分別為Th17、Treg細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子[18],通過AG490處理后,Th17/Treg平衡向Treg失衡,故而RORγt mRNA表達(dá)水平顯著降低,而Foxp3 mRNA水平顯著增加,與王慧蓮等[6]報(bào)道一致,即通過升高Treg以及降低Th17細(xì)胞的比例,可有效調(diào)控RORγt、Foxp3的水平,可為SLE治療提供新的切入點(diǎn)。Foxp3、RORγt相互拮抗,經(jīng)過AG490處理后,STAT3表達(dá)降低,F(xiàn)oxp3會(huì)優(yōu)先表達(dá),促進(jìn)Treg細(xì)胞的分化,一旦抑制解除,STAT3則高表達(dá),STAT3則會(huì)抑制Foxp3的表達(dá),從而促進(jìn)Treg向Th17轉(zhuǎn)化,誘導(dǎo)IL-17的分泌[19]。故而應(yīng)用AG490阻斷STAT3信號(hào)通路后,可抑制Th17的分化,從而使得Th17細(xì)胞相關(guān)因子表達(dá)水平降低,可緩解緩、炎性反應(yīng),解除STAT3對(duì)Foxp3的抑制,有利于Treg分化,Treg分化相關(guān)因子表達(dá)的增加,使得使Th17/Treg平衡向Treg傾斜,從而穩(wěn)定機(jī)體免疫應(yīng)答和誘導(dǎo)免疫耐受,發(fā)揮SLE的治療效果。

    綜上所述,通過阻斷STAT3信號(hào)通路,可誘導(dǎo)Treg分化以及抑制Th17分化,從而調(diào)控Th17/Treg平衡,可為系統(tǒng)性紅斑狼瘡的治療提供新方向。

    參考文獻(xiàn)

    [1] Weidenbusch M,Kulkarni O P,Anders H J.The innate immune system in human systemic lupus erythematosus[J].Clini Sci,2017,131(8):625-634.

    [2]李志,楊婷婷,李文哲,等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血Th17與Treg細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2015,19(2):253-255.

    [3]蔡小燕,羅敏,林小軍,等.Th17和Treg細(xì)胞在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血中的表達(dá)[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2012,92(7):460-463.

    [4]潘志鵬,倫永志.JAK/STAT信號(hào)通路在機(jī)體免疫及相關(guān)疾病中的作用機(jī)制[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志,2016,32(9):1395-1399.

    [5]郝慧琴,張少然,李小峰,等.外周血Th17細(xì)胞及Treg細(xì)胞檢測(cè)對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡病情的評(píng)估價(jià)值[J].中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志,2018,38(3):73-75.

    [6]王慧蓮,孟慶良,李松偉,等.茯苓多糖對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者Thl7/Treg平衡的影響[J].中國(guó)病理生理雜志,2017,33(8):1514-1519.

    [7]中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)分會(huì).系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷及治療指南中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)分會(huì)[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志,2010,14(5):342-346.

    [8] Dai C,Deng Y,Quinlan A,et al.Genetics of systemic lupus erythematosus: immune responses and end organ resistance to damage[J].Curr Opin Immunol,2014,31:87-96.

    [9] Wen Z,Xu L,Xu W,et al.Detection of dynamic frequencies of Th17 cells and their associations with clinical parameters in patients with systemic lupus erythematosus receiving standard therapy[J].Clin Rheumatol,2014,33(10):1451-1458.

    [10] Choi S C,Morel L.B cell contribution of the CD4+ T cell inflammatory phenotypes in systemic lupus erythematosus[J].Autoimmunity,2017,50(1):37-41.

    [11]胡偉,王森,王賢,等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血Th1/Th2/Th17/Treg的表達(dá)水平及其臨床意義[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2019,38(2):308-312.

    [12]陸前進(jìn),羅帥,寒天.系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診療進(jìn)展[J].中華皮膚科雜志,2018,51(1):1-4.

    [13]梁趙云,牛紅青,郝美華,等.雷帕霉素通過調(diào)節(jié)T輔助細(xì)胞17/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞平衡治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的進(jìn)展[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志,2018,22(6):423-426.

    [14]項(xiàng)海燕,潘峰,鄢巨振,等.過表達(dá)miR-498通過下調(diào)STAT3抑制類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者Th17細(xì)胞分化[J].生理學(xué)報(bào),2018,70(2):167-174.

    [15] Sun G,Wang Z,Ti Y,et al.STAT3 promotes bone fracture healing by enhancing the FOXP3 expression and the suppressive function of regulatory T cells[J].Apmis,2017,125(8):752-760.

    [16]陳曦,霍春波,陳廣山,等.消銀解毒方顆粒對(duì)Jurkat T細(xì)胞內(nèi)JAK1/STAT3信號(hào)通路作用機(jī)制的研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2017,40(2):119-124.

    [17] Ohl K,Tenbrock K.Regulatory T cells in systemic lupus erythematosus[J].Eur J Immunol,2015,45(2):344-355.

    [18]謝玉磊,劉坤鵬,喬孟晗,等.轉(zhuǎn)錄因子RORγt和Foxp3在玫瑰糠疹患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)[J].臨床皮膚科雜志,2017,46(1):8-11.

    [19] Li K,Bao H,Zhang P,et al.Inhibitory Effect of AG490 on STAT3 Signal Transduction Pathway in Nasopharyngeal Carcinoma Cells[J].J Coll Physicians Surg Pak,2017,27(11):699-702.

    (收稿日期:2019-08-26) (本文編輯:周亞杰)

    猜你喜歡
    紅斑狼瘡系統(tǒng)性分化
    兩次中美貨幣政策分化的比較及啟示
    系統(tǒng)性紅斑狼瘡臨床特點(diǎn)
    對(duì)于單身的偏見系統(tǒng)性地入侵了我們的生活?
    分化型甲狀腺癌切除術(shù)后多發(fā)骨轉(zhuǎn)移一例
    超聲引導(dǎo)經(jīng)直腸“10+X”點(diǎn)系統(tǒng)性穿刺前列腺的診療體會(huì)
    伴脫發(fā)的頭皮深在性紅斑狼瘡并發(fā)干燥綜合征一例
    系統(tǒng)性紅斑狼瘡并發(fā)帶狀皰疹的護(hù)理
    Cofilin與分化的研究進(jìn)展
    論《文心雕龍·體性》篇的系統(tǒng)性特征
    名作欣賞(2014年29期)2014-02-28 11:24:31
    系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并腦出血和腦梗死1例
    高清毛片免费观看视频网站| xxxwww97欧美| 国产欧美日韩一区二区精品| 99热这里只有精品一区 | 色综合欧美亚洲国产小说| 最新美女视频免费是黄的| 99国产精品一区二区三区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 美女免费视频网站| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 日本 欧美在线| 国产麻豆成人av免费视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 天堂av国产一区二区熟女人妻 | a级毛片a级免费在线| 日韩高清综合在线| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 好男人电影高清在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 最近最新免费中文字幕在线| 色av中文字幕| 一级毛片高清免费大全| 最近最新中文字幕大全电影3| 婷婷丁香在线五月| 亚洲一区高清亚洲精品| 麻豆av在线久日| 视频区欧美日本亚洲| 亚洲片人在线观看| 最好的美女福利视频网| 久久久久久免费高清国产稀缺| 欧美高清成人免费视频www| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 久9热在线精品视频| 男人的好看免费观看在线视频 | 午夜老司机福利片| 色精品久久人妻99蜜桃| 露出奶头的视频| 久久久国产欧美日韩av| 国产精品98久久久久久宅男小说| 久久精品国产综合久久久| 搞女人的毛片| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲成人精品中文字幕电影| 亚洲成av人片在线播放无| 99热只有精品国产| 熟女电影av网| 无限看片的www在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 中文字幕高清在线视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 1024香蕉在线观看| 男女视频在线观看网站免费 | 亚洲专区中文字幕在线| 免费高清视频大片| 久99久视频精品免费| 黄色丝袜av网址大全| 日日干狠狠操夜夜爽| 午夜成年电影在线免费观看| 身体一侧抽搐| 国产成+人综合+亚洲专区| 看免费av毛片| 久久久久精品国产欧美久久久| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲人成电影免费在线| 日本一本二区三区精品| 久久精品91蜜桃| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 露出奶头的视频| 男人的好看免费观看在线视频 | 亚洲欧美日韩东京热| 国产免费av片在线观看野外av| 精品国产亚洲在线| av免费在线观看网站| 亚洲av成人一区二区三| 人人妻人人看人人澡| 亚洲 欧美一区二区三区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产成人av激情在线播放| 欧美大码av| √禁漫天堂资源中文www| 欧美色欧美亚洲另类二区| 嫁个100分男人电影在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 黄色视频不卡| 香蕉av资源在线| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产视频一区二区在线看| 亚洲专区国产一区二区| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 真人做人爱边吃奶动态| 欧美一级a爱片免费观看看 | 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产高清激情床上av| 成人国产综合亚洲| 真人做人爱边吃奶动态| 国产精品野战在线观看| 成人三级做爰电影| 在线观看免费午夜福利视频| 国产高清有码在线观看视频 | 国产午夜精品久久久久久| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产又色又爽无遮挡免费看| www.999成人在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 窝窝影院91人妻| 国语自产精品视频在线第100页| 午夜免费成人在线视频| av在线天堂中文字幕| 久久午夜亚洲精品久久| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 成人国产综合亚洲| 色噜噜av男人的天堂激情| 欧美性猛交黑人性爽| 麻豆国产av国片精品| 日本在线视频免费播放| 国产精品99久久99久久久不卡| 美女免费视频网站| 国产成人精品无人区| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 黄色毛片三级朝国网站| 精品电影一区二区在线| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲成a人片在线一区二区| 午夜日韩欧美国产| 国产三级中文精品| 黄色视频,在线免费观看| 国产亚洲欧美98| 黑人操中国人逼视频| 日韩欧美 国产精品| 亚洲熟妇熟女久久| 桃红色精品国产亚洲av| 国产精品久久电影中文字幕| 日韩欧美国产在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 久久这里只有精品19| 一本一本综合久久| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 99精品久久久久人妻精品| 欧美色欧美亚洲另类二区| 中出人妻视频一区二区| 人妻久久中文字幕网| 亚洲天堂国产精品一区在线| 久久久久久久久免费视频了| 99久久精品国产亚洲精品| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 日韩欧美 国产精品| 亚洲精品色激情综合| 后天国语完整版免费观看| 国产成人av激情在线播放| 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲18禁久久av| 成人av在线播放网站| 国内精品久久久久精免费| av欧美777| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产av在哪里看| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 五月伊人婷婷丁香| 国产成人影院久久av| 国产成人啪精品午夜网站| 国语自产精品视频在线第100页| 香蕉av资源在线| 久久午夜亚洲精品久久| 成人精品一区二区免费| 国产真人三级小视频在线观看| 免费搜索国产男女视频| 91老司机精品| 无遮挡黄片免费观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 精品久久久久久成人av| 女同久久另类99精品国产91| 在线免费观看的www视频| 久久性视频一级片| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久精品影院6| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲av片天天在线观看| avwww免费| 大型av网站在线播放| 美女扒开内裤让男人捅视频| 999精品在线视频| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲专区字幕在线| 一级a爱片免费观看的视频| 日韩欧美免费精品| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产伦在线观看视频一区| 特级一级黄色大片| 99国产精品一区二区三区| 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲国产欧美网| 看片在线看免费视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 老汉色∧v一级毛片| 村上凉子中文字幕在线| 国内揄拍国产精品人妻在线| 午夜福利在线在线| 一a级毛片在线观看| 一a级毛片在线观看| 国产午夜精品久久久久久| 亚洲五月天丁香| 国产麻豆成人av免费视频| 色尼玛亚洲综合影院| 免费一级毛片在线播放高清视频| 一级毛片女人18水好多| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲在线自拍视频| 看免费av毛片| 亚洲熟女毛片儿| 免费电影在线观看免费观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产熟女xx| 欧美又色又爽又黄视频| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 亚洲一区二区三区不卡视频| 男女下面进入的视频免费午夜| 99久久无色码亚洲精品果冻| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产一级毛片七仙女欲春2| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产高清有码在线观看视频 | 真人做人爱边吃奶动态| 麻豆一二三区av精品| 香蕉久久夜色| 日本成人三级电影网站| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 老司机靠b影院| 人人妻人人澡欧美一区二区| 精华霜和精华液先用哪个| 精品国产美女av久久久久小说| 精品电影一区二区在线| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产成年人精品一区二区| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 黄频高清免费视频| 国产日本99.免费观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 男人舔奶头视频| 国产高清有码在线观看视频 | 亚洲全国av大片| 叶爱在线成人免费视频播放| 国内精品久久久久精免费| 国产三级中文精品| 日本一二三区视频观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲国产欧美人成| 成人三级做爰电影| 日韩欧美 国产精品| 最近最新中文字幕大全免费视频| 窝窝影院91人妻| 午夜福利欧美成人| 国产av又大| 91在线观看av| 精品乱码久久久久久99久播| 久久草成人影院| 在线观看舔阴道视频| 国产三级中文精品| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产欧美日韩一区二区精品| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 欧美精品啪啪一区二区三区| 97碰自拍视频| 亚洲美女视频黄频| 露出奶头的视频| 十八禁人妻一区二区| 日本一区二区免费在线视频| 久久精品91无色码中文字幕| 国产伦人伦偷精品视频| 在线观看日韩欧美| 两个人看的免费小视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 99久久精品热视频| 欧美色欧美亚洲另类二区| 一二三四在线观看免费中文在| 欧美一区二区国产精品久久精品 | 亚洲专区中文字幕在线| av超薄肉色丝袜交足视频| 一级毛片女人18水好多| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 在线观看免费午夜福利视频| 成人国产综合亚洲| 欧美午夜高清在线| 成熟少妇高潮喷水视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 一本久久中文字幕| 亚洲一区中文字幕在线| 丝袜美腿诱惑在线| 黑人欧美特级aaaaaa片| 成人特级黄色片久久久久久久| 两个人免费观看高清视频| a级毛片a级免费在线| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产成人精品久久二区二区免费| 一区二区三区国产精品乱码| 欧美精品亚洲一区二区| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲美女视频黄频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| www.www免费av| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 欧美丝袜亚洲另类 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久久 成人 亚洲| 少妇被粗大的猛进出69影院| 人妻久久中文字幕网| 一区二区三区高清视频在线| 又大又爽又粗| 成人国产综合亚洲| or卡值多少钱| 亚洲在线自拍视频| 精品国产美女av久久久久小说| 亚洲一区高清亚洲精品| 老司机靠b影院| 日本 欧美在线| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲片人在线观看| 中国美女看黄片| 国产人伦9x9x在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产私拍福利视频在线观看| 久久九九热精品免费| 欧美中文综合在线视频| 亚洲欧美日韩东京热| 五月伊人婷婷丁香| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 91在线观看av| 最好的美女福利视频网| 舔av片在线| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 精品久久久久久久久久久久久| 国产乱人伦免费视频| 久久99热这里只有精品18| 亚洲欧美日韩高清专用| 看片在线看免费视频| 国产av在哪里看| av视频在线观看入口| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲 国产 在线| 久久精品综合一区二区三区| 久久这里只有精品19| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 欧美在线黄色| 国产亚洲av嫩草精品影院| 日本熟妇午夜| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 午夜免费成人在线视频| a在线观看视频网站| 国内精品一区二区在线观看| 听说在线观看完整版免费高清| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲欧美日韩无卡精品| 免费在线观看亚洲国产| 日本免费一区二区三区高清不卡| 18美女黄网站色大片免费观看| netflix在线观看网站| 免费高清视频大片| 久久久国产成人精品二区| 妹子高潮喷水视频| 日本免费a在线| 精品久久久久久久久久免费视频| 精华霜和精华液先用哪个| 久久性视频一级片| 黑人操中国人逼视频| 免费av毛片视频| 日本一区二区免费在线视频| 国产黄片美女视频| 欧美日韩乱码在线| 波多野结衣巨乳人妻| 国产又色又爽无遮挡免费看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产在线观看jvid| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 韩国av一区二区三区四区| 最好的美女福利视频网| 露出奶头的视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产精品国产高清国产av| 一a级毛片在线观看| 一级片免费观看大全| 成人三级做爰电影| 精品人妻1区二区| 一级作爱视频免费观看| 999久久久精品免费观看国产| 国产成人精品无人区| 国产精品亚洲美女久久久| 九九热线精品视视频播放| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国内揄拍国产精品人妻在线| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 男女午夜视频在线观看| 午夜激情福利司机影院| 男人舔女人的私密视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产午夜福利久久久久久| 又大又爽又粗| 久久香蕉精品热| cao死你这个sao货| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 色综合站精品国产| 国产av麻豆久久久久久久| 在线免费观看的www视频| 久久伊人香网站| 国产一区二区在线观看日韩 | 国产蜜桃级精品一区二区三区| 精品欧美一区二区三区在线| 国产成人系列免费观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产精品,欧美在线| 99久久国产精品久久久| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 两个人免费观看高清视频| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 中文资源天堂在线| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 一本一本综合久久| 特级一级黄色大片| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 亚洲欧美精品综合久久99| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 99在线人妻在线中文字幕| 性欧美人与动物交配| 中文亚洲av片在线观看爽| 久久久久久大精品| 精品国产乱子伦一区二区三区| 在线免费观看的www视频| xxx96com| 亚洲熟妇熟女久久| 一区二区三区国产精品乱码| 国产精品精品国产色婷婷| 国产成人精品久久二区二区免费| 99国产综合亚洲精品| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 美女扒开内裤让男人捅视频| 在线观看一区二区三区| www.熟女人妻精品国产| 亚洲av美国av| 久久久精品大字幕| 亚洲中文av在线| 久久久久久久久中文| 舔av片在线| 国产伦一二天堂av在线观看| 成人午夜高清在线视频| 国产精品免费视频内射| 日本一二三区视频观看| 日韩欧美 国产精品| 女警被强在线播放| 男女午夜视频在线观看| 91麻豆av在线| 久久99热这里只有精品18| 午夜久久久久精精品| 亚洲男人天堂网一区| 免费在线观看日本一区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 搡老熟女国产l中国老女人| 一个人免费在线观看电影 | av在线播放免费不卡| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久香蕉国产精品| 国产亚洲精品一区二区www| 国产伦人伦偷精品视频| 国产精品99久久99久久久不卡| 久久久久国内视频| 身体一侧抽搐| x7x7x7水蜜桃| 欧美在线黄色| 欧美国产日韩亚洲一区| 午夜免费观看网址| 精品国内亚洲2022精品成人| 天天添夜夜摸| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 又大又爽又粗| 午夜视频精品福利| 亚洲人成伊人成综合网2020| 2021天堂中文幕一二区在线观| 中出人妻视频一区二区| 少妇被粗大的猛进出69影院| 午夜精品一区二区三区免费看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 免费在线观看日本一区| 国产一区二区在线av高清观看| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产一区在线观看成人免费| 悠悠久久av| 久久中文字幕一级| 少妇的丰满在线观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久久水蜜桃国产精品网| 日韩有码中文字幕| www日本在线高清视频| 啦啦啦免费观看视频1| 日韩欧美精品v在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 1024手机看黄色片| 淫妇啪啪啪对白视频| 99国产极品粉嫩在线观看| a在线观看视频网站| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲国产欧美人成| 久久热在线av| 人妻夜夜爽99麻豆av| 五月玫瑰六月丁香| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲欧美日韩高清在线视频| ponron亚洲| 久久亚洲真实| 女人被狂操c到高潮| 身体一侧抽搐| 黄频高清免费视频| 免费无遮挡裸体视频| 色综合站精品国产| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 欧美3d第一页| 亚洲国产精品sss在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| av天堂在线播放| 后天国语完整版免费观看| 欧美日韩黄片免| 免费搜索国产男女视频| 91大片在线观看| 波多野结衣高清无吗| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久亚洲真实| 欧美性长视频在线观看| 女同久久另类99精品国产91| 一区福利在线观看| 在线看三级毛片| 国产精品电影一区二区三区| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 久久香蕉激情| 2021天堂中文幕一二区在线观| 久99久视频精品免费| 亚洲精品在线观看二区| 性欧美人与动物交配| 国产爱豆传媒在线观看 | 成人永久免费在线观看视频| 男女视频在线观看网站免费 | 欧美日韩乱码在线| 亚洲色图av天堂| 88av欧美| 亚洲一区二区三区不卡视频| 中国美女看黄片| 国产精品98久久久久久宅男小说| 91国产中文字幕| 日韩免费av在线播放| 黄片大片在线免费观看| 好男人电影高清在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产成人欧美在线观看| 日本成人三级电影网站| 日韩有码中文字幕| 日本五十路高清| 免费在线观看成人毛片| 婷婷亚洲欧美| 两性夫妻黄色片| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 久久香蕉激情| 亚洲成人免费电影在线观看| 18美女黄网站色大片免费观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国内精品久久久久精免费| 久久婷婷成人综合色麻豆| 91国产中文字幕| 国产亚洲av高清不卡| 91av网站免费观看| 韩国av一区二区三区四区| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 欧美日韩福利视频一区二区| 久久精品国产综合久久久| a级毛片a级免费在线| 一级毛片精品| www日本黄色视频网| 热99re8久久精品国产| 757午夜福利合集在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 波多野结衣高清作品| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产精华一区二区三区| 久久香蕉精品热| 免费在线观看成人毛片| 久久天堂一区二区三区四区| 国产激情久久老熟女| 99热只有精品国产| 观看免费一级毛片| 精品电影一区二区在线| 又大又爽又粗| 久久人人精品亚洲av| 国产亚洲欧美98| 免费电影在线观看免费观看| 欧美极品一区二区三区四区| 少妇被粗大的猛进出69影院| 99久久99久久久精品蜜桃| 免费搜索国产男女视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 在线看三级毛片| 午夜视频精品福利|