百瑞口服液對阿霉素腎病大鼠綜合征的治療作用＊

宣偉東，唐大海，范正平

(中國人民解放軍第四一一醫(yī)院藥學(xué)科，上海 200081)

百瑞口服液為以中藥百蕊草 Thesium chinense Turcz為有效藥物的單方制劑。百蕊草為檀香科百蕊草屬植物，具有清熱解毒、補(bǔ)腎澀精之功效[1]，多用于治療急性乳腺炎、上呼吸道感染、淋巴結(jié)結(jié)核等疾病。近年來，江浙民間常用百蕊草治療慢性腎炎，效果良好[2]。初步藥理試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，百蕊草的水提取物具有利尿、消腫，降低尿蛋白、調(diào)血脂、提高血清蛋白水平等作用，對腎病綜合征大鼠有良好治療效果[3]。本研究在藥理試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用阿霉素(通用名注射用鹽酸多柔比星，ADR)腎病模型[4]，考察經(jīng)水提、醇沉等工藝步驟制成的成型制劑對阿霉素腎病綜合征大鼠的治療作用，為該制劑的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 動物與藥物

SD大鼠，CL級，雄性，體重(180±10)g，由海軍醫(yī)學(xué)研究所動物房提供，實(shí)驗(yàn)動物合格證號為SCXK(滬)2011－0005。分籠飼養(yǎng)，室溫為15～20℃，自由攝食、飲水。

百瑞口服液(中國人民解放軍第四一一醫(yī)院制劑室，批號為20110203，規(guī)格為每支10 mL，每支含5．0 g生藥)，為棕紅色澄清液體，氣微，味苦、微澀，依照該制劑的申報(bào)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，該批制劑各項(xiàng)指標(biāo)均合格;阿霉素(深圳萬樂藥業(yè)有限公司，批號為1011E1，規(guī)格為每支10 mg)，臨用前用生理鹽水配制;醋酸潑尼松片(上海信誼制藥集團(tuán)，批號為100702，規(guī)格為每片5 mg)，臨用前用生理鹽水配制成混懸液。

1．2 方法

百瑞口服液制備:取中藥百蕊草500 g，切成2～3 cm長的小段，洗凈，加純化水煎煮3次，第1次2 h，第2次1．5 h，第3次1 h。合并煎液，濾過，濃縮至約400 mL，冷卻，加適量乙醇，攪勻，靜置24 h，過濾，濾液減壓回收乙醇，加純化水稀釋至900 mL，冷藏24 h，濾過，加純化水至1 000 mL，攪勻，分裝，100℃滅菌30 min，即得百瑞口服液。

阿霉素腎病模型建立與動物分組:健康雄性SD大鼠60只，飼養(yǎng)7 d后，隨機(jī)抽取10只作為空白對照組(A組)，余下50只大鼠于試驗(yàn)開始當(dāng)天在非麻醉?xiàng)l件下一次性尾靜脈注射阿霉素6．0 mg/kg，并按體重隨機(jī)平均分為模型對照組(B組)，陽性對照組(C 組)，百瑞口服液低劑量組[D1組，0．5 mL/(kg·d)，相當(dāng)于0．25 g 生藥 /(kg·d)]、中劑量組[D2組，2 mL/(kg·d)，相當(dāng)于1．0 g 生藥 /(kg·d)]、高劑量組[D3組，10 mL/(kg·d)，相當(dāng)于5．0 g生藥/(kg·d)]。各組于造模次日起，每日灌胃，A組和B組給予生理鹽水，C組給予醋酸潑尼松混懸液(5．0 mg/kg)，百瑞口服液各劑量組給予相當(dāng)劑量的百瑞口服液，連續(xù)6周。

觀察指標(biāo)及檢測方法:各組每周稱重1次，記錄四肢、陰囊的浮腫情況及腹腔積液狀況，同時觀察毛色、浮腫與精神狀態(tài)。各組每周置代謝籠1次，收集24 h尿液，記錄尿量，采用考馬斯亮藍(lán)法測定尿蛋白濃度，計(jì)算24 h尿蛋白。試驗(yàn)結(jié)束時，腹主動脈取血，用全自動生化分析儀測定血清總蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、總膽固醇(TCH)、三酰甘油(TG)等血液生化指標(biāo)。另摘取腎臟，用10%福爾馬林液固定，石蠟包埋切片，蘇木素－伊紅(HE)染色，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。本試驗(yàn)血液生化指標(biāo)由我院檢驗(yàn)科測定，病理切片由我院病理科完成。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2．1 一般狀態(tài)

在整個試驗(yàn)過程中，A組大鼠毛色有光澤，飲食活動、精神狀態(tài)良好。模型組大鼠則精神萎靡，怠倦少動，消瘦，毛發(fā)無光澤，并有掉毛豎毛現(xiàn)象。大鼠在造模2周后，造模大鼠均出現(xiàn)飲水減少，四肢浮腫明顯及爛尾現(xiàn)象。與B組相比，給藥各組上述表現(xiàn)有所改善，在藥物干預(yù)4周后，C組、D2組、D3組大鼠的浮腫癥狀明顯輕于模型組，爛尾癥狀均痊愈。在試驗(yàn)過程中，B組有1只大鼠死亡。

2．2 檢測指標(biāo)

結(jié)果見表1及表2?？梢姡炷４笫篌w內(nèi)出現(xiàn)蛋白流失，脂質(zhì)代謝紊亂。百瑞口服液有助于阿霉素腎病綜合征大鼠各項(xiàng)生理指標(biāo)的恢復(fù)，中劑量給藥可提高阿霉素腎病綜合征大鼠血液蛋白濃度，而高劑量給藥可降低血脂水平。

表1 百瑞口服液對ADR大鼠24 h尿量的影響(，n=10)

表1 百瑞口服液對ADR大鼠24 h尿量的影響(，n=10)

注:與 A 組比較，△P＜0．05，▲P＜0．01;與 B組比較，□P＜0．05，■P＜0．01。下表同。

組別 24 h尿量(mL)24 h尿蛋白量(mg/kg)A組B組C組D1組D2組D3組造模前28．8 ±8．9 31．8 ±9．1 34．1 ±1．0 44．8 ±11．1 32．2 ±15．2 29．2 ±13．8造模第1周32．2 ±1．2 21．3 ±6．3▲29．6 ±11．1 22．1 ±6．8 23．2 ±7．7 27．6 ±11．9造模第2周34．7 ±6．6 19．6 ±9．6▲23．3 ±8．2 25．2 ±3．9 25．2 ±3．1 30．0 ±11．1造模第3周36．5 ±7．6 18．2 ±3．8▲28．1 ±6．7□26．8 ±10．9 25．8 ±6．2 28．1 ±3．8造模第4周37．5 ±5．4 20．4 ±4．1▲25．1 ±6．7□25．8 ±12．9□28．6 ±3．2□28．6 ±9．2＊造模第5周43．7 ±5．2 20．9 ±2．9▲25．2 ±7．9□28．0 ±8．9□31．1 ±4．9■33．7 ±3．9■造模第6周42．2 ± 12．2 20．8 ± 5．1▲24．8 ± 4．5□27．7 ± 6．6□35．7 ± 3．3■34．5 ± 7．2■造模前4．2 ±1．1 4．6 ±1．3 4．1 ±1．0 4．3 ±0．7 3．8 ±0．8 3．9 ±0．6造模第1周4．5 ±0．3 27．4 ±10．7▲29．6 ±11．1 28．5 ±7．9 30．4 ±13．8 29．8 ±12．0造模第2周2．8 ±0．7 31．7 ±7．5▲43．3 ±8．8□44．4 ±6．6□42．5 ±7．9□43．3 ±8．8■造模第3周2．5 ±0．6 36．2 ±10．3△38．1 ±6．7 45．2 ±13．2 41．5 ±7．8 36．0 ±9．3造模第4周3．0 ± 0．2 55．3 ± 4．8▲45．1 ± 6．7□52．4 ± 27．2 47．4 ± 5．1□53．9 ± 12．8造模第5周4．2 ±1．2 58．4 ±12．4▲45．2 ±5．9■58．1 ±20．1 46．2 ±5．7■48．8 ±5．2□造模第6周3．2 ±1．2 43．6 ±9．4▲24．8 ±4．5■44．1 ±9．4 27．9 ±7．1■39．2 ±8．7□

表2 百瑞口服液對阿霉素腎病綜合征大鼠血液生化指標(biāo)的影響(，n=10)

表2 百瑞口服液對阿霉素腎病綜合征大鼠血液生化指標(biāo)的影響(，n=10)

TG(mmol/L)2．35 ± 0．94 3．06 ± 0．12△2．72 ± 1．52□3．25 ± 1．27 2．85 ± 0．13 2．64 ± 0．72□組別A組B組C組D1組D2組D3組TP(g/L)66．22 ± 4．18 45．86 ± 3．54▲48．14 ± 6．13 40．02 ± 3．71 52．77 ± 4．2□49．58 ± 3．37 ALB(g/L)37．28 ± 3．11 23．45 ± 4．16▲28．33 ± 2．58□26．95 ± 4．26 28．09 ± 5．82□22．95 ± 4．66 TCH(mmol/L)3．21 ± 0．48 4．74 ± 1．15△3．85 ± 1．25□3．56 ± 0．84□4．16 ± 2．88 3．61 ± 0．75□

2．3 腎臟病理組織學(xué)

A組大鼠腎小球及腎小管形態(tài)與結(jié)構(gòu)無明顯病理變化，見圖1 A。B組大鼠可見腎小管擴(kuò)張、炎細(xì)胞浸潤及間質(zhì)纖維化，腎小球內(nèi)皮細(xì)胞減少、球囊腔顯著擴(kuò)張、囊壁增厚，有的可見腎小球萎縮，腎小管管型，見圖1 B。D3組大鼠可見腎小球囊腔不同程度擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞有輕度變性，管腔略有變窄，個別有管型生成，見圖1 C。D2組大鼠腎小球囊腔擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞變性，管腔變窄，有管型，見圖1 D。D1組大鼠腎小球囊腔擴(kuò)張，腎小管上皮變性，管腔擴(kuò)張，周圍間質(zhì)細(xì)胞增生，見圖1 E。C組大鼠腎小球囊腔輕度擴(kuò)張，腎小管上皮腫脹、管腔輕度狹窄，見圖1 F。病理學(xué)檢查結(jié)果提示，百瑞口服液及陽性藥對阿霉素腎病綜合征的發(fā)生與發(fā)展均有一定減輕作用，主要表現(xiàn)在各藥物組腎小球及腎小管上皮的病變程度較模型對照組輕。其中，高劑量百瑞口服液有與陽性藥有相似的作用效果，中、低劑量百瑞口服液作用相似。

3 討論

阿霉素腎病綜合征屬中醫(yī)“水腫”病范疇，其發(fā)生與水液代謝及肺、脾、腎三臟器功能失調(diào)有關(guān)，臨床以大量蛋白尿、低蛋白血癥、高脂血癥及不同程度水腫為特征。阿霉素誘導(dǎo)的大鼠腎病綜合征模型，基本類似人類微小病變型腎病，已被廣泛應(yīng)用于中藥及中草藥成分對腎臟保護(hù)作用的藥物篩選與藥效學(xué)評價[5]。本試驗(yàn)中對大鼠1次尾靜脈注射阿霉素6．0 mg/kg，大鼠均出現(xiàn)不同程度的浮腫癥狀，24 h尿量顯著減少，尿蛋白顯著增加，血液中TP與ALB水平顯著下降，TCH與TG水平升高。結(jié)果表明，本次試驗(yàn)成功地建立了阿霉素大鼠腎病模型。

百蕊草作為一種廣譜抗菌中草藥，有良好的消炎鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳及抗腫瘤作用。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，治療組大鼠的一般狀態(tài)均好于模型對照組，表明百蕊草可有效防治阿霉素腎病綜合征大鼠的感染，改善其生存狀態(tài)。本試驗(yàn)依據(jù)百蕊草提取物在1．0 g/(kg·d)劑量下，可對腎病綜合征大鼠產(chǎn)生較好的治療作用[3]，將受試藥物的給藥劑量設(shè)置為低劑量[0．25 g/(kg·d)生藥]、中劑量[1．0 g/(kg·d)生藥]、高劑量[5．0 g/(kg·d)生藥]3 組。試驗(yàn)結(jié)果顯示，百瑞口服液治療4周以上，中、高劑量組阿霉素腎病綜合征大鼠24 h尿量顯著增加，水腫癥狀消除，24 h尿蛋白降低，血液中總蛋白、血清蛋白含量水平提升，血脂代謝紊亂改善，病理組織分析也證實(shí)百瑞口服液對阿霉素腎病綜合征大鼠的腎臟具有明顯的保護(hù)作用。由此表明，百蕊草經(jīng)過加工制成成品制劑，仍保持了其對腎病綜合征大鼠良好的治療效果，并在劑量為1．0 g/(kg·d)生藥時，即顯示出較好的療效。該劑量與民間治療慢性腎病的常用劑量相似(每日20 g)。

圖1 各組大鼠腎臟組織HE染色病理切片圖(×400)

本研究結(jié)果可為該制劑在慢性腎病臨床治療提供一定的藥效學(xué)依據(jù)和劑量參考?；诼阅I炎臨床治療的復(fù)雜性，該制劑對慢性腎病的適應(yīng)證、作用機(jī)制及腎毒性等還有待進(jìn)一步研究。

[1]國家中醫(yī)藥管理局，中華本草編委會．中華本草[M]．上海:上?？萍汲霭嫔?，1999:595．

[2]王 崢，劉近明，李紹順．百蕊草的研究進(jìn)展[J]．中國藥師，2006，9(11):1 059．

[3]宣偉東，唐大海，卞 俊，等．百蕊草對阿霉素腎病大鼠治療作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]．藥學(xué)實(shí)踐雜志，2012，30(6):443．

[4]李保春，崔若蘭，張曉英．大鼠阿霉素腎病模型的建立[J]．第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1992，13(5):485．

[5]Bertani T，Poggi A，Pozzoni R，et al．Adriamycin －induced nephritic syndrome in rats[J]．Lab Invest，1982，46(1):16．