苦蕎茶中黃曲霉毒素B1的風(fēng)險評估研究

◎ 林 巧，盧朝婷，肖詩明，鞏發(fā)永，劉曉燕

（西昌學(xué)院苦蕎麥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 西昌 615000）

黃曲霉毒素B1（AFB1）被公認(rèn)為是目前致癌力最強(qiáng)的天然物質(zhì)，它進(jìn)入人體后與DNA形成AFB1-DNA加合物，可引起DNA的損傷與堿基空缺，抑制抑癌基因p53的表達(dá)，并且與HBV病毒協(xié)同致癌，大大提高了肝癌的發(fā)病率。莊振宏等的實(shí)驗(yàn)證明，HBV轉(zhuǎn)基因小鼠受HBV和AFB1雙重攻擊后，肝組織的DNA修復(fù)基因及藥物代謝酶基因表達(dá)水平明顯降低[1]。KwakM.K等人也通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，HBV病毒本身并不會引起DNA的損傷，也不會導(dǎo)致肝細(xì)胞癌變，而且DNA修復(fù)系統(tǒng)能修復(fù)由AFB1-DNA加合物引起的DNA損傷。但是HBV病毒造成了潛在缺陷，使機(jī)體抵御外來侵略的能力降低，增加了機(jī)體對外來化合物的敏感性，一旦AFB1及其代謝產(chǎn)物攻擊DNA，肝癌的發(fā)病率明顯增加[2]。因此，可根據(jù)肝炎發(fā)病率以及苦蕎茶中黃曲霉毒素的檢出率對苦蕎茶中黃曲霉毒素污染的暴露情況進(jìn)行風(fēng)險評估。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

采用Bootstrap抽樣技術(shù)采集了213份涼山州苦蕎茶樣品，采集的樣品涵蓋苦蕎茶的全胚芽、全麥、全株等9種不同類型以及不同生產(chǎn)日期和產(chǎn)地等不同影響因素，使采樣區(qū)域能夠覆蓋涼山州不同地區(qū)、飲食類型和經(jīng)濟(jì)社會類型。

2010年1月至12月由涼山州第一人民醫(yī)院提供的普格縣1 643份健康體檢人員乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)本報告。

1.2 檢測方法

苦蕎樣本：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）雙抗夾心法檢測樣品中的黃曲霉毒素，所用試劑由北京華安麥科生物技術(shù)有限公司提供的ELISA試劑盒HEM0396。該方法對苦蕎樣品中黃曲霉毒素的回收率為85%～98%，最低檢測限為 0.01μg/kg。

血清樣本：采用由上?？迫A生物技術(shù)有限公司提供的ELISA檢測試劑對血清學(xué)標(biāo)志物（HBsAg、HBeAg、抗-HBe、抗-HBs、抗-HBc五項(xiàng)指標(biāo)）進(jìn)行檢測。

1.3 數(shù)據(jù)分析方法

Ridasoft.win軟件：ELISA方法結(jié)果數(shù)據(jù)分析軟件，由北京華安麥科生物技術(shù)有限公司提供。采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，部分?jǐn)?shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±S）表示，數(shù)據(jù)采用x2檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 乙肝發(fā)病率與AFB1暴露水平的相關(guān)性

涼山州普格疾病預(yù)防中心對該縣的1 643名健康體檢人員進(jìn)行靜脈采血，分離血清作HBV感染標(biāo)志物檢測[3]。涼山州第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科采用ELISA方法對這1643例健康體檢者的乙肝五項(xiàng)血清學(xué)標(biāo)志物進(jìn)行檢測，結(jié)果見表1。

表1 不同人群中HBV感染率分布情況表

以涼山州中較為偏遠(yuǎn)的普格縣為例，當(dāng)?shù)鼐用褚酝炼购涂嗍w為主食，全縣的苦蕎種植面積達(dá)到了1 080 hm2，且普格縣的出入人口量小，認(rèn)為此次調(diào)查的人群對HBV的感染基本上屬于自然感染，可作為評估苦蕎中黃曲霉毒素暴露的較好目標(biāo)。在被檢測的1643人中，有720人血清HBV標(biāo)志物呈陽性，且陽性率達(dá)到了43.82%，并與年齡分布存在一定的相關(guān)性（x2=2.34，P＜0.05），年齡越大患病率越高。HBV感染物呈陽性可能是以下4種情況：HBsAg、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc呈陽性。HBV感染血清學(xué)標(biāo)記物檢測中的HBsAg為乙肝表面抗原，即乙肝病毒的外殼蛋白。免疫學(xué)中認(rèn)為它常伴隨HBV存在，即HBsAg呈陽性表面，表明機(jī)體感染了HBV病毒。但HBsAg本身并不具有傳染性，即該病毒不會在體內(nèi)復(fù)制，在無類似于AFB1等使機(jī)體敏感的外來化合物的刺激下，一般不會引發(fā)乙癌。HBeAg呈陽性是病毒復(fù)制的指標(biāo)；抗-HBe陽性說明乙肝病毒脫氧核糖核酸HBV-DNA和肝細(xì)胞DNA發(fā)生了整合，進(jìn)一步發(fā)展成肝癌的可能性較高。抗-HBs是指乙肝表面抗體，呈陽性時說明存在HBV抵抗力，不攜帶HBV病毒；抗-HBc表示體內(nèi)攜帶有HBV病毒，但機(jī)體仍然能夠免疫。

表2 HBV病毒感染5項(xiàng)指標(biāo)的檢出情況表

通過表2中數(shù)據(jù)可以看出，5項(xiàng)指標(biāo)全陰923例，表面抗體陽性720例，患有或曾經(jīng)患有乙肝478例，患病率為29.10%，HBsAg攜帶率4.14%。

基于AFB1與HBV共同作用才能導(dǎo)致乙肝發(fā)病的基礎(chǔ)，根據(jù)公式計(jì)算出AFB1的暴露水平：

S（AFB1暴露水平）=A（乙肝發(fā)病率）-B（HBsAg）+C（抗 -HBc）

檢測中，A（乙肝發(fā)病率）=D（HBeAg）+E（抗-HBe）+F（抗-HBc）=1.4%+3.6%+29.10%=34.10%,

S（AFB1暴露水平）=A（乙肝發(fā)病率）-B（HBsAg）+C（抗-HBc）=34.10%-4.14%+39.92%=59.06%。

則AFB1的暴露水平與乙肝發(fā)病率呈59.06%的關(guān)系，由此對乙肝發(fā)病率對苦蕎中AFB1的暴露水平進(jìn)行模擬。

2.2 苦蕎樣本中黃曲霉毒素的檢測結(jié)果

在213份苦蕎樣品中，有150份樣品被檢測出受到不同程度的AFB1的污染，檢出率為70.42%，結(jié)果見表3。AFB1檢測出樣品中最高檢測值為14.61μg/kg，平均值為6.148 μg/kg，標(biāo)準(zhǔn)偏差為 3.2981。

表3 苦蕎茶樣本中黃曲霉毒素B1的檢測結(jié)果表

目前，苦蕎食品的加工中都有去殼這一步驟，是利用苦蕎胚部和乳胚部的比重不同，將苦蕎籽粒碾碎后，去除浮在水面上的胚部或表皮。李建輝利用此法去除玉米中黃曲霉毒素，平均脫毒率達(dá)到了81.3%[4]。由此，苦蕎經(jīng)加工處理后，能進(jìn)入人體的AFB1含量已經(jīng)十分微小。這里可簡單將人體對苦蕎中黃曲霉毒素攝入量進(jìn)行大概計(jì)算：

苦蕎食品中AFB1含量（μg/kg）=苦蕎中AFB1平均含量（μg/kg）×檢出率（%）×去除率（%）=6.148 μg/kg×70.42%×81.3%=3.52 μg/kg

此外，AFB1要對機(jī)體造成損傷，除了與攝入的劑量密切相關(guān)外，也與持續(xù)時間有不可分離的關(guān)系。

膳食AFB1累積攝入量（μg/kg）=平均膳食AFB1攝入量（μg/kg）×接觸年數(shù)×365/1 000

患病率（%）=AFB1累積攝入量（μg/kg）×59.06%

2.3 苦蕎茶中AFB1導(dǎo)致乙肝患病率模擬分析

通過以上兩項(xiàng)調(diào)查，運(yùn)用MATLLB（Monte Carlo simulation）模擬分析不同水平人群通過每日攝入的苦蕎茶而導(dǎo)致乙肝患病的情況。根據(jù)不同的消費(fèi)水平，將消費(fèi)人群分為高消費(fèi)人群（每日苦蕎平均攝入量高達(dá)200g）、一般水平攝入人群（每日苦蕎平均攝入量5.0g）與低水平攝入人群（每日苦蕎平均攝入量為0.01g），其黃曲霉毒素暴露水平與乙肝患病率見表4。

表4 不同消費(fèi)人群黃曲霉毒素暴露與乙肝患病率的對比表

由于是普格縣居民一直以苦蕎作為主食，平均以每天攝入200 g苦蕎標(biāo)準(zhǔn)，而一般水平攝入人群僅通過市面上的苦蕎制品攝入苦蕎，以苦蕎茶為例，即使每天沖泡一包5 g的苦蕎茶。由于黃曲霉毒素不溶于水，茶中的黃曲霉毒素微乎其微，即使將AFB1結(jié)晶體在70 ℃水中加熱分散，靜置一夜后，再在97 ℃的沸水中煮沸2 h，其溶解率也只有0.000 7%[5]，則實(shí)際攝入AFB1的量只有1.232×10-7μg。而低水平攝入人群每日攝入量不足于0.1 g，而由此攝入的AFB1的量也會不超過為4.497×10-6mg，所以不必?fù)?dān)心會因目前苦蕎茶中含有黃曲霉毒素而不敢食用。對于中等攝入水平的一般人群來說，即使每天使用5 g的苦蕎食品，連續(xù)食用10年，由AFB1引起乙肝患病的概率也只有3.792×10-6，所以一般情況下，食用苦蕎食品對人體造成的危害是非常小的，食用者可放心食用合格的苦蕎食品。

JECFA第49次會議[6]綜合世界各地對黃曲霉毒素在多種動物和人類研究的結(jié)果，推導(dǎo)出黃曲霉毒素致肝癌的能力，即當(dāng)AFB1暴露量為1 ng/kg bw/d時，HBsAg陽性患者中肝癌的年發(fā)生率為0.3例/10萬人口，HBsAg陰性患者中肝癌的年發(fā)生率為0.01例/10萬人口[7]?？嗍w中AFB1的暴露量（ng/kg bw/d）=AFB1每日攝入量（μg/kg）×體重（kg）。體重以50kg計(jì)算，由此可根據(jù)黃曲霉毒素的暴露水平模擬出不同攝入水平人群通過攝入苦蕎茶而患病的概率，結(jié)果見表5。

表5 不同消費(fèi)人群通過攝入苦蕎而患病的風(fēng)險表

從表5可知，即使在高攝入水平下HBsAg陽性率（%）也只有2.112×10-3例/10萬人口，HBsAg陰性率（%）只有7.04×10-3例/10萬人口，與2007年的117萬（發(fā)病率89.00例/10萬人）[8]病毒性肝炎分型報告相比，表明目前苦蕎中的黃曲霉毒素對我國居民產(chǎn)生的健康風(fēng)險較低。目前，全國約有9 300萬人攜帶乙肝病毒，其中乙肝患者中大約有3 000萬人死于肝細(xì)胞癌（HCC），排我國腫瘤死因的第二位[9]，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于由苦蕎中黃曲霉毒素帶來的危害。

3 結(jié)論

對比以上數(shù)據(jù)我國乙肝病發(fā)病數(shù)據(jù)，可見以苦蕎中黃曲霉毒素攝入量最高的高攝入人群對黃曲霉毒素暴露引發(fā)乙肝的風(fēng)險為0.001 518，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于涼山州目前的43.82%的乙肝發(fā)病率，肝癌的風(fēng)險為9.152×10-3例/10萬人口遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于全國目前每年89.00例/10萬人的肝癌發(fā)病率[10]，表明目前苦蕎中的黃曲霉毒素對我國居民產(chǎn)生的健康風(fēng)險是較低的。

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