HPLC法測定卡托普利片含量不確定度分析

北京市大興區(qū)食品藥品安全監(jiān)控中心（102600）苗立紅

卡托普利片為血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制藥，其適用于各型高血壓，是治療輕、中度原發(fā)性或腎性高血壓的首選藥物之一?？ㄍ衅绽慕祲禾攸c是能降低高血壓患者的外周血管阻力，預(yù)防和逆轉(zhuǎn)血管平滑肌增殖及左心室肥厚，顯著改善高血壓患者的生活質(zhì)量。為《中國藥典》2010版二部[1]收載的品種。采用高效液相色譜法測定其含量，根據(jù)《測定不確定度評定與表示》（JJF1059-1999）, 本文對HPLC法測定不確定度進(jìn)行計算和評定，最終給出檢測結(jié)果、置信區(qū)間；和置信水平，建立適合于HPLC法測定含量的不確定度方法，以提高HPLC法含量測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 儀器與試藥

島津LC-20AT 高效液相色譜儀；AE-100電子天平；賽多利斯CP225D電子天平；卡托普利對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號100318-2006含量為99.5%）。

2 溶液的制備

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取卡托普利對照品約10.55mg、10.53mg兩份，分別置100ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備 取卡托普利片20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉0.0581g、0.0578g兩份樣品，分別置100ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

3 測定方法

3.1 色譜條件 用十八烷基鍵和硅膠為填充劑；以0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液-甲醇-乙腈（70∶25∶5）（用磷酸調(diào)pH值至3.0）為流動相；檢測波長為215nm；柱溫為40℃。

3.2 方法 分別精密吸取上述溶液各20μl，注入液相色譜儀測定，按外標(biāo)法計算，即為卡托普利（C9H15NO3S）的含量。

4 數(shù)據(jù)

20片總片重2.8313g;平均片重0.1416g。

5 測定不確定度

6 不確定度來源

卡托普利片含量測定不確定度的來源由對照品和供試品兩方面所構(gòu)成，對照品的不確定度包括：對照品的稱量引入的不確定度，對照品稀釋引入的不確定度，對照品色譜峰面積引入的不確定度。同理，供試品的不確定度也包括在稱量、稀釋和色譜峰面積三個方面。

6.1 對照品稱量引入的不確定度

6.1.1 對照品稱量引入的不確定度由對照品質(zhì)量和純度構(gòu)成。

賽多利斯CP225D電子天平分辨率為0.01mg，按矩形分布，取包含因子則天平稱量不確定度U=0.0058mg,天平稱量重復(fù)性的不確定度：檢定證書給出的重復(fù)性誤差為±0.02mg,按矩形分布，則不確定度U(M2)=0.02/=0.0115mg,由于稱量使用減重法，則U對照品稱樣分別為10.55mg、10.53mg,樣1為U(W1)=0.0182/10.55=0.00173，樣2為U(W2)=0.0182/10.53=0.00173，即合成

對照品純度的不確定度：卡托普利對照品純度為99.5%，未給出限度標(biāo)識，假定其分布區(qū)間為±0.05%，按矩形分布，其不確定度U（P純）=0.05%/=0.000289。

6.1.2 對照品定容不確定度U(VS) 校準(zhǔn)：因A級100ml容量瓶的允值為（100±0.1）ml，按矩形分布，取包含因子K=,則100ml容量瓶引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度U(容

環(huán)境溫度：實驗室環(huán)境溫度在空調(diào)調(diào)節(jié)下，設(shè)置（20±5）℃，水的體積膨脹系數(shù)為2.1×10-4℃-1按矩形分布，取包含因子K=，標(biāo)準(zhǔn)不確定度：5×2.1×10-4/=0.000606ml。

6.1.3 對照品溶液濃度引入的合成相對不確定度U(CS)

6.1.4 對照品溶液色譜峰面積引入的不確定度 試驗中對照品S1 S2,分別進(jìn)樣5次、2次，取峰面積平均值計算。

第一份對照品溶液測量5次，峰面積分別為2906480、2904908、2904464、2899933、2899596。平均峰面積為2903076，標(biāo)準(zhǔn)差為3117，RSD(%)為0.1%，其引入的不確定度U×2903076）=0.000480。第二份對照品溶液測量2次，峰面積分別為2887773、2890410，平均峰面積為2889092，標(biāo)準(zhǔn)差為1864 ，RSD(%)為0.06%，采用極差法計算，n=2,C=1.13，其引入的不確定度U(AS2)=S1-2/(C×(AS)平）=(2890410-2887773)/(1.13×2889092)=0.000807。對照品溶液峰面積引入相對不確定度：

6.2 供試品引入的不確定度

6.2.1 供試品溶液峰面積引入的不確定度試驗中供試品R1 R2,分別進(jìn)樣2次，取峰面積平均值計算。

第一份供試品溶液峰面積為2833625、2832697，平均峰面積為2833161，RSD(%)為0.02%,采用極差法計算，n=2,C=1.13，其引入的不確定度U(AR1)=R1-2/(C×(AS)平）=0.000290。 第二份供試品溶液峰面積為2847930、2845111，平均峰面積為2846520，RSD(%)為0.07%,采用極差法計算，n=2,C=1.13，其引入的不確定度U(AR2)=R1-2/(C×(AS)平）=0.000876。供試品溶液峰面積引入的相對不確定度：

6.2.2 供試品溶液濃度引入的合成相對不確定度包括：對照品溶液的濃度、對照品溶液峰面積、供試品溶液峰面積，U（CR）==0.00285。

6.2.3 供試品稱量引入的不確定度U(WR)，供試品稱量分別為0.0581g、0.0578g。使用電子天平AE100，檢定證書給出的最大允值為±0.2mg,按矩形分布，則不確定度為：天平稱量重復(fù)性的不確定度，檢定證書給出的重復(fù)性誤差為±0.1mg，按矩形分布，則不確定度為則合成：供試品稱樣分別為0.0581g、0.0578g,樣1為U(W1)=0.1833/0.0581×103=0.00315，樣2為U(W2)=0.1833/0.0578×103=0.00317，即合成U(WR)=

6.2.4 供試品定容引入不確定度 校準(zhǔn)：因A級100ml容量瓶的允值為（100±0.1）ml,按矩形分布，取包含因子K=,則100ml容量瓶引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度U(容100)=0.1/=0.0577。

環(huán)境溫度：實驗室環(huán)境溫度在空調(diào)調(diào)節(jié)下，設(shè)置（20±5）℃，水得體積膨脹系數(shù)為2.1×10-4℃-1，按矩形分布，取包含因子K=，標(biāo)準(zhǔn)不確定度：5×2.1×10-4/

6.3 平均片重0.1416g,使用電子天平AE100，檢定證書給出的最大允值為±0.2mg,按矩形分布，則不確定度為：天平稱量重復(fù)性的不確定度，檢定證書給出的重復(fù)性誤差為±0.1mg，按矩形分布，則不確定度為則合成：U(WR)=U(W平)=0.1833/0.1416×103=0.00129。

6.4 合成不確定度 供試品溶液濃度，供試品稱樣量，供試品的定容，平均片重等影響因素合成不確定度為U(X供)試驗測得X=100.5%,則標(biāo)準(zhǔn)不確定度U(X)=U(X供)×X=0.00549×100.5%=0.55%

6.5 擴(kuò)展不確定度 取包含因子K=2，則含量測定結(jié)果的擴(kuò)展不確定度為U(X)=K×U(X)=1.10%。

6.6 報告 卡托普利片含量測定結(jié)果：標(biāo)示含量（%）=（100.5±1.1）%（P=95%,K=2）。

7 討論

本方法測定結(jié)果不確定度主要來源色譜峰面積因素、溶液的定容及稱量。由于高效液相色譜儀本身影響因素很多，可通過加強(qiáng)對儀器的保養(yǎng)維修，保持其穩(wěn)定的工作狀態(tài)，選用較大的定容體積，嚴(yán)格控制實驗條件，規(guī)范其操作。