柴胡注射液中揮發(fā)性化學成分GC-MS分析

袁其堂，仲 英，麥 曦*，程奇珍，易路遙，馮麗華

(1.南昌大學藥學院，江西南昌 330006;2.江西省藥品審評中心，江西南昌 330046;3.江西省食品藥品檢驗所，江西南昌 330000)

傘形科柴胡屬植物柴胡Bupleurum chinense DC.，其根作為中醫(yī)藥方中的常用中藥在中國已沿用了近千年。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。具有疏散退熱、疏肝、升陽的功能，中醫(yī)主要用其治療胸肋脹痛、子宮脫垂、脫肛、流感及感冒所引起的發(fā)熱等病癥［1］?！吨袊幍洹?010年版收載的正品柴胡藥材來源為柴胡Bupleurum chinense DC.或狹葉柴胡Bupleurum scorzonerifolium chinense Willd.的干燥根，按性狀不同，分別習稱“北柴胡”及“南柴胡”［2］?，F(xiàn)代藥理學研究［3-5］表明柴胡揮發(fā)油具有解熱、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗肝損傷、抗腫瘤［6］、降低血壓、減緩心律和免疫增強［7］等作用，在臨床廣泛應用于外感發(fā)熱。

柴胡注射液是柴胡干燥根經(jīng)水蒸氣蒸餾制成的含有揮發(fā)油的滅菌水溶液，有較好的退熱、解表效果，用于治療感冒、流行性感冒及瘧疾等的發(fā)熱，療效確切。但隨著柴胡注射液的廣泛使用它的不良反應也逐漸被人們所重視。目前國內(nèi)已報道過的不良反應有過敏性皮膚反應、過敏性休克、暈厥、眩暈、腎衰竭、皰性表皮松解型藥疹、急性肺水腫、過敏性哮喘［8］。劉群［9］曾嘗試采用GC-MS聯(lián)用技術對臨床所用的柴胡注射液進行揮發(fā)油成分的分析，結(jié)果只檢出呋喃甲醛和5-甲基呋喃甲醛兩個成分，張麗等［10］通過GC-MS將藥典法、硫酸氯化鈉提取法、石油醚萃取法提取的柴胡原藥材揮發(fā)油成分與柴胡注射液的有效成分檢測對比研究，在柴胡注射液檢測中也得到了與劉群一致的結(jié)果。近年來對柴胡注射液等中藥注射劑引發(fā)的不良反應的報道，不僅對中藥注射液行業(yè)造成了巨大的沖擊，同時也波及到了整個中醫(yī)藥領域，使人們對中藥注射劑的使用產(chǎn)生了疑慮［9］。

本實驗通過對來自3家醫(yī)藥企業(yè)的3個不同批次的柴胡注射液采用頂空氣相色譜-質(zhì)譜-數(shù)據(jù)庫 (GC-MS-DS)聯(lián)用技術分析其揮發(fā)性化學成分，結(jié)合質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫NIST11及對照品比較法對分離的化合物進行鑒定，選擇匹配度較高的的檢索物質(zhì)，并通過總離子流色譜圖的面積歸一化法計算出各揮發(fā)性化學成分在每批柴胡注射液中的相對含有量，為建立柴胡注射液中揮發(fā)性成分特征指紋圖譜，控制注射液質(zhì)量及減少不良反應的發(fā)生提供重要的科學依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent7697A型Headspace sampler，Agilent 7890A5975C-GCMSD，HP-5MS(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm)彈性石英毛細管柱，1701E02系列工作站。

1.2 材料 樣品1(開開援生制藥股份有限公司，批號1211061);樣品2(河南潤弘制藥股份有限公司，批號1209221);樣品3(河南省康華藥業(yè)股份有限公司，批號12091901)。3批柴胡注射液均為市售藥品。對照品正戊醛(分析純，純度98%)、正己醛 (色譜純，純度≥99.0%)、正庚醛 (色譜純，純度≥98.0%)、正辛醛 (分析純，純度99%)、壬醛 (分析純，純度96%)均購于上海阿拉丁試劑公司。0.9%氯化鈉注射液 (回音必基團 (江西)東亞制藥有限公司)，吐溫－80(分析純，上海大眾藥業(yè)有限公司)。

2 方法

2.1 對照品的制備 分別取正戊醛、正己醛、正庚醛、正辛醛、壬醛對照品適量，精密稱定，制成每1 mL含25 mg的溶液，再用含0.3%吐溫－80與0.9%氯化鈉的溶液稀釋至每1 mL含25 μg的溶液。將上述制備的5種溶液分別精密量取2 mL，置20 mL頂空瓶中，軋蓋密封瓶口，制備成混合對照品溶液。

2.2 樣品的制備 分別從3批樣品中精密量取10 mL柴胡注射液依次置入3個20 mL頂空進樣瓶中，按序標記，軋蓋密封瓶口，即得。

2.3 GC-MS分析 柱溫:起始溫度40℃，保持5 min，以5℃/min速率升至50℃，保持0 min，以20℃/min速率升至250℃，保持6 min。載氣氦氣，進樣口溫度250℃。進樣方式:分流進樣，分流比5∶1。柱體積流量1 mL/min。頂空進樣，頂空瓶平衡溫度90℃，平衡時間20 min，進樣閥溫度100℃，傳輸線溫度110℃，頂空瓶充壓時間0.2 min，定量環(huán)填充時間 0.2 min，定量環(huán)平衡時間0.5 min，進樣時間1 min。溶劑延遲3 min。掃描范圍30～500 amu。

3 結(jié)果

采用頂空氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀結(jié)合質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫NIST11分析出對照品溶液在tR=3.341，tR=6.101，tR=8.964，tR=10.510，tR=11.618處出現(xiàn)5個對照峰;3個廠家及批次的柴胡注射液分析出匹配度較高 (大于85%)的揮發(fā)性化學成分共計28種 (其色譜-質(zhì)譜總離子流圖見圖1)，28種揮發(fā)性化學成分的鑒定及在每個批次中的相對量結(jié)果見表1。在這3個不同廠家的柴胡注射液中揮發(fā)性化學成分含量較高的有戊醛、己醛、呋喃甲醛、庚醛、正己醇、正辛醛、反-2-辛烯醛、壬醛、反-2-壬烯醛、桉葉油醇、十一烷、芳樟醇、4-萜烯醇、左旋乙酸冰片酯等。其中戊醛、己醛、庚醛、正辛醛、壬醛、反式-2-辛烯醛、反式-2-壬烯醛、2-異丙基-5-甲基茴香醚是共有成分。

圖1 對照品及樣品的GC-MS總離子流色譜圖

表1 3個不同廠家的柴胡注射液樣品揮發(fā)性化學成分結(jié)果鑒定

續(xù)表1

4 討論

結(jié)果表明，3家企業(yè)的3批柴胡注射液其揮發(fā)性成分中共檢出28種化合物。其中戊醛、己醛、庚醛、正辛醛、壬醛、反式-2-辛烯醛、反式-2-壬烯醛、2-異丙基-5-甲基茴香醚，這8種化合物是3批柴胡注射液樣品中揮發(fā)性物質(zhì)的共有化學成分。已有文獻報道，正己醛、正庚醛、α-蒎烯、桉葉油醇等成分為柴胡揮發(fā)油解熱、抗炎、抗菌的藥效物質(zhì)基礎［11-15］。亦有文獻報道，呋喃甲醛是柴胡在酸鹽條件下柴胡纖維的水解產(chǎn)物，5-甲基呋喃醛初步認定是柴胡皂苷中糖部分的水解產(chǎn)物，含有這些已降解的成分的揮發(fā)油制成的注射液是有害物質(zhì)［16］，這些都是引起柴胡注射液不良反應的首要化學成分。另外，引起不良反應的首要化學成分呋喃甲醛的產(chǎn)生也可能與市售藥品目前的有效期長短有很大關系，亦可能與不同廠家所用不同地區(qū)的柴胡原料及提取工藝有關，其來源還有待進一步研究。

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