苗藥雙腎草提取物對(duì)腎陽(yáng)虛小鼠的影響△

陸翔恩，羅春麗,2*，趙致,2，周?chē)?guó)化，李金玲,2，黃明進(jìn),2，羅夫來(lái),2，劉紅昌,2，王華磊,2

(1.貴州大學(xué) 農(nóng)學(xué)院 中藥材研究所,貴州 貴陽(yáng) 550025;2.貴州省藥用植物繁育與種植重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550025)

貴州大學(xué)自然科學(xué)青年基金——雙腎草生藥學(xué)研究([2007]056)；貴州省發(fā)展和改革委員會(huì)高技術(shù)產(chǎn)業(yè)化示范工程項(xiàng)目(黔發(fā)改高技[2009]2805)；貴州省科技廳創(chuàng)新人才團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目(黔科合人才團(tuán)隊(duì)[2010]4006)；貴州省科技廳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室計(jì)劃項(xiàng)目(黔科合計(jì)Z字[2010]4015)；貴州省藥用植物繁育與種植人才基地(黔人領(lǐng)發(fā)[2013]15號(hào))

*

羅春麗，副教授，研究方向： 苗藥的開(kāi)發(fā)與利用，中藥材采收加工及炮制技術(shù)；E-mail： lilyluo310@126.com

苗藥雙腎草提取物對(duì)腎陽(yáng)虛小鼠的影響△

陸翔恩1，羅春麗1,2*，趙致1,2，周?chē)?guó)化1，李金玲1,2，黃明進(jìn)1,2，羅夫來(lái)1,2，劉紅昌1,2，王華磊1,2

(1.貴州大學(xué) 農(nóng)學(xué)院 中藥材研究所,貴州 貴陽(yáng) 550025;2.貴州省藥用植物繁育與種植重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550025)

目的探究苗藥雙腎草水提液、醇提液對(duì)腎陽(yáng)虛癥小鼠主要性器官和免疫器官的影響。方法以小鼠主要性器官睪丸、前列腺、精囊、腎臟和免疫器官胸腺、脾臟等的濕重作為測(cè)定指標(biāo)，測(cè)定各指標(biāo)濕重體重比指數(shù)。結(jié)果雙腎草水提組、55%醇提組、95%醇提組的體重增長(zhǎng)率都高于模型組，低于空白對(duì)照組；水提組性器官精囊濕重體重比、睪丸濕重體重比、前列腺濕重體重比與模型組比較差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，醇提各組也有不同程度的差異，免疫器官胸腺濕重、脾臟濕重體重比與模型組比較差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論雙腎草水提液對(duì)大劑量氫化可的松所致的小鼠主要性器官萎縮有明顯改善作用，對(duì)免疫器官無(wú)顯著影響。

雙腎草；腎陽(yáng)虛模型；氫化可的松；性器官；免疫器官

雙腎草始載于《海南藥用植物志》，為蘭科植物角盤(pán)蘭屬條葉角盤(pán)蘭Herminiumballeyi(Rolfe)Tang et Wang的塊莖或全草[1]。味甘，性溫，入腎經(jīng)。具有溫補(bǔ)腎陽(yáng)的功能。用于腎虛陽(yáng)痿遺泄，腎陽(yáng)不足，精關(guān)不固，常治陽(yáng)痿、遺精、滑泄、血不養(yǎng)筋、精不生髓及腰膝酸軟等癥[2]，民間常將其用水煎服或泡酒服[3]。雙腎草是貴州苗族人民的習(xí)用藥材之一[4-5]，故列入苗藥。因其在民間用藥效果顯著，而且目前對(duì)苗藥雙腎草的藥理研究還是空白，所以加強(qiáng)對(duì)苗藥雙腎草基礎(chǔ)藥理研究具有重要的科研意義和社會(huì)價(jià)值。通過(guò)用水和不同濃度的醇溶液為提取溶劑，建立小鼠腎陽(yáng)虛模型，以小鼠主要性器官睪丸、前列腺、精囊、腎臟和免疫器官胸腺、脾臟等作為測(cè)定指標(biāo)，測(cè)定濕重體重比等指標(biāo)的變化情況，探究苗藥雙腎草對(duì)小鼠腎陽(yáng)虛的影響。

1 材料及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

1.1 試藥

雙腎草采自貴州省龍里縣，經(jīng)貴州大學(xué)中藥材研究所鑒定為蘭科植物角盤(pán)蘭屬條葉角盤(pán)蘭Herminiumbulleyi(Rolfe)Tang et Wang的干燥根莖。氫化可的松[上?，F(xiàn)代哈森(商丘)藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20110923]。

1.2 動(dòng)物

SPF級(jí)，雄性KM小鼠，(24±2)g，許可證號(hào)：SCXK(渝)2012-0006，質(zhì)量檢測(cè)單位：重慶市動(dòng)物質(zhì)量檢測(cè)中心。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的準(zhǔn)備和處理

昆明種小鼠適應(yīng)環(huán)境3 d后，從中選擇健康、精神狀態(tài)好的72只。隨機(jī)分成6組：空白對(duì)照組、模型組、水提組、55%醇提組、75%醇提組、95%醇提組。每天每只進(jìn)食5 g，蒸餾水足量。再適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，分別稱(chēng)定體重后，標(biāo)記備用。

2.2 供試液制備

氫化可的松現(xiàn)配現(xiàn)用，臨用前用同等體積0.9%氯化鈉稀釋后使用。

雙腎草水提液的制備：取雙腎草干燥塊莖，粉碎，過(guò)1號(hào)篩，稱(chēng)取20.0 g，用20倍量蒸餾水浸泡3 h，85 ℃回流提取2 h，同時(shí)收集揮發(fā)油成分及水提液，回收濾液，濾渣中加入12倍量蒸餾水再提取2 h。合并兩次濾液，濃縮至60 mL。合并濃縮液和揮發(fā)成分，置于100 mL容量瓶中，用蒸餾水定容到100 mL，相當(dāng)于0.2 g生藥·mL-1，放在4 ℃冰箱中備用。

雙腎草不同醇提取液的制備：用95%、75%、55%乙醇溶液回流提取，濾液揮盡溶劑后，用蒸餾水定容到100 mL，相當(dāng)于0.2 g生藥·mL-1，4 ℃冰箱中備用。

2.3 模型的建立及給藥

實(shí)驗(yàn)小鼠除空白對(duì)照組外，其余5組腹腔注射氫化可的松25 mg·kg-1·d-1。另外水提組、55%醇提組、75%醇提組、95%醇提組分別灌胃4 g生藥·kg-1·d-1(1mL含生藥0.2 g)雙腎草提取液。同時(shí)空白對(duì)照組腹腔注射等量的0.9%氯化鈉溶液和灌胃等體積的蒸餾水，模型組灌胃等體積的蒸餾水。灌胃和注射同時(shí)進(jìn)行，連續(xù)給藥28 d后開(kāi)始進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定。

2.4 雙腎草不同提取液對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)率的影響

末次給藥4 h后，稱(chēng)體重。以造模前小鼠體重均數(shù)為基數(shù)，計(jì)算各組小鼠用藥后體重增長(zhǎng)率。

2.5 雙腎草不同提取液對(duì)小鼠性器官及免疫器官的影響

取小鼠睪丸、前列腺、精囊、腎臟、脾臟、胸腺，精密稱(chēng)定其濕重，計(jì)算睪丸、前列腺、精囊、腎臟、脾臟、胸腺等臟器指數(shù)，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)采用Excel 2003和DPS 2012統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行完全隨機(jī)單因素試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。

3 結(jié)果

3.1 雙腎草不同提取液對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)率的影響

組間比較F值為0.939。表1數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，除了75%醇提組外，空白對(duì)照組、水提組、55%醇提組、95%醇提組均明顯高于模型組；模型組和75%醇提組體重增長(zhǎng)率無(wú)顯著變化?？瞻讓?duì)照組、水提組、55%醇提組、95%醇提組體重增長(zhǎng)率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.2 雙腎草不同提取液對(duì)小鼠主要性器官的影響

3.2.1 雙腎草不同提取液對(duì)小鼠睪丸濕重的影響 組間比較F值為3.238。表2數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，55%醇提組、模型組與空白對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其他組與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各處理組與模型組的比較：水提組、75%醇提組與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，55%醇提組、95%醇提組與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。另外從實(shí)驗(yàn)解剖結(jié)果發(fā)現(xiàn)，水提組和3個(gè)醇提處理組的附睪明顯大于模型組和空白組。

3.2.2 雙腎草不同提取液對(duì)小鼠前列腺濕重的影響 組間比較F值為5.784。表2數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，模型組與空白對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；95%醇提組、75%醇提組與空白對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；水提組、55%醇提組與空白對(duì)照組比較差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。水提組、55%醇提組與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；75%醇提組、95%醇提組與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。從解剖直觀結(jié)果上也證實(shí)了數(shù)據(jù)分析結(jié)果，給藥組比模型組的前列腺普遍偏大。

3.2.3 雙腎草不同提取液對(duì)小鼠精囊濕重的影響 組間比較F值為9.277。表2數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，模型組與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；水提組與空白對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；55%醇提組、75%醇提組、95%醇提組與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。水提組、55%醇提組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；95%醇提組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。從實(shí)驗(yàn)解剖結(jié)果可以看出，水提組和3個(gè)醇提處理組的精囊普遍大于模型組，水提組最突出。

3.2.4 雙腎草不同提取液對(duì)小鼠腎臟濕重的影響 組間比較F值為2.593。表2數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，模型組與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與空白組比較，所有處理和空白組差異都無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。55%醇提組與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；75%醇提組與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 雙腎草不同提取液對(duì)小鼠體重的影響

表2 雙腎草不同提取液對(duì)小鼠睪丸、前列腺、精囊、腎臟濕重的影響

注：與空白組比較，★P<0.05，★★P<0.01；與模型組比較，☆P<0.05，☆☆P<0.01；下同

3.3 雙腎草不同提取液對(duì)小鼠免疫器官的影響

3.3.1 雙腎草不同提取液對(duì)小鼠脾臟濕重的影響 組間比較F值為3.41。表3數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，模型組、95%醇提組與空白對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；75%醇提組與空白對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而水提組、55%醇提組與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。雙腎草各提取組與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示用氫化可的松造小鼠腎陽(yáng)虛模型可導(dǎo)致脾指數(shù)降低，而雙腎草不同提取液對(duì)于此種情況無(wú)明顯改善作用。

3.3.2 雙腎草不同提取液對(duì)小鼠胸腺濕重的影響 組間比較F值為42.61。表3數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，模型組、水提組、55%醇提組、75%醇提組、95%醇提組與空白對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；而水提組、55%醇提組、75%醇提組、95%醇提組與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從解剖的結(jié)果也證實(shí)了分析結(jié)果，空白對(duì)照組的胸腺明顯大于模型組、水提組、55%醇提組、75%醇提組、95%醇提組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示用氫化可的松造小鼠腎陽(yáng)虛模型可導(dǎo)致胸腺指數(shù)明顯降低，而雙腎草不同提取液對(duì)于此種情況無(wú)明顯改善作用。

表3 雙腎草不同提取液對(duì)小鼠脾、胸腺濕重的影響

4 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，雙腎草不同提取液對(duì)大劑量氫化可的松所致的腎陽(yáng)虛小鼠主要性器官萎縮有明顯的改善作用；對(duì)小鼠免疫器官無(wú)明顯調(diào)節(jié)作用。這與文獻(xiàn)報(bào)道氫化可的松模型是較為經(jīng)典的腎陽(yáng)虛證動(dòng)物模型[6]，同時(shí)也是小鼠免疫抑制劑[7-9]一致。筆者對(duì)比水提液組及不同濃度醇提液組結(jié)果，顯示水提組對(duì)前列腺和精囊的作用最為顯著，其次是55%醇提組、75%醇提組，可推測(cè)其改善雄性小鼠性腺器官作用有效部位主要為極性成分，臨床可考慮采用水提及低濃度乙醇提取為主。雙腎草作為苗族人民補(bǔ)腎壯陽(yáng)習(xí)用藥材，具有良好開(kāi)發(fā)前景，其相關(guān)藥效及毒理學(xué)研究有待進(jìn)一步深入開(kāi)展。

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TheEffectofAqueousandEthanolExtractsofHerminiumballeyi(Rolfe)TangetWangtoKidneyDeficiency-YangMice

LUXiang’en1，LUOChunli1,2﹡，ZHAOZhi1,2，ZHOUGuohua1,2,LIJinling1,2，HUANGMingjin1,2，LUOFulai1,2，LIUHongchang1,2，WANGHualei1,2

(1.CollegeofAgriculture，InstituteofTraditionnalChineseMedicinalMaterials，GuizhouUniversity，Guiyang550025，China;2.GuizhouLaboratoryforBreedingandPlantingEngineeringofTraditionnalChineseMedicinalMaterials，Guiyang550025，China)

Objective：This paper aims to explore the function of aqueous and ethanol extract liquid of Miao ethnomedicineHerminiumballeyi(Rolfe)Tanget Wang on the main sexual organs of experimental kidney-insufficient mice.MethodsThe measure indexes are based on the mice’s sexual organs：testicle，prostate，spermatophore，and the immune organs：thymus，spleen，etc.to measure the ratios of the natural weight of the indexes.ResultsThe weight growth rates of the aqueous extract group，the 55% ethanol extract group，95% ethanol extract are higher than the model group，lower than the bland contrast group.There are obvious differences of the aqueous extract group in the natural weight ratios of spermatophore，testicle and prostate compared to the model group；the ethanol extract groups also different in varying degrees.The natural weight ratios of the immune organs：thymus and spleen，do not have obvious difference compared to the modelgroup.ConclusionAqueous extract liquid ofH.balleyihas obvious effect on the mains sexual organ atrophy of small mice caused by high dose of hydrocortisone，but the effect to immune organs is not so obvious.

Herminiumballeyi(Rolfe)Tanget Wang；Deficiency of kidney-yang，Hydrocortisone；Sexual organ；Immune organ

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.05.008

2013-12-03)