頂空氣相色譜法測定鹽酸倍他洛爾中6種有機(jī)溶劑殘留量

黃宇玫，羅文艷（.南昌大學(xué)科學(xué)技術(shù)學(xué)院，南昌 33009；.南昌大學(xué)第四附屬醫(yī)院藥劑科，南昌 330003）

鹽酸倍他洛爾屬于心臟選擇性β1－受體阻滯劑，無內(nèi)在擬交感活性及膜穩(wěn)定作用，臨床主要用于中度高血壓、心絞痛［1－2］，另外還可用于治療眼內(nèi)壓增高和開角型青光眼［3－5］。鹽酸倍他洛爾在合成與制備工藝中使用了第二類溶劑乙腈、甲苯和二甲基甲酰胺，第三類溶劑丙酮、乙酸乙酯、異丙醇等，在成品中可能會(huì)有一定量的殘留，為了控制有機(jī)溶劑，提高藥品的安全性和可靠性，本文建立了氣相色譜法測定鹽酸倍他洛爾中6種殘留溶劑。該方法簡便靈敏，準(zhǔn)確可靠。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 6890N型氣相色譜儀。氫火焰離子化檢測器（FID，南京科捷分析儀器有限公司）；Sartorius BP211D精密電子天平（Sartorius Corporation）。

1.2 試藥 鹽酸倍他洛爾原料（山東海山藥業(yè)有限公司）；丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、乙腈、甲苯和二甲基甲酰胺均為色譜純（上海德正化工有限公司）；其余為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件［6］色譜柱：DB－WAX石英毛細(xì)管柱（30m×0.53mm×1.0μm）；柱溫：50℃保持5min，以15℃·min－1的升溫速率升至200℃，保持6min；進(jìn)樣口溫度：250℃，檢測器溫度：280℃；FID檢測器；載氣為N2；恒流流速：1.0mL·min－1；H2：30mL·min－1；Air：400mL·min－1；分流比10∶1，進(jìn)樣體積1.0μL。

2.2 溶液的配制 精密稱取丙酮50mg、乙酸乙酯50mg、異丙醇50mg、乙腈4.1mg、甲苯8.9mg、N，N－二甲基甲酰胺8.8mg，置于50mL量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，作為對照品儲(chǔ)備溶液；精密量取對照品儲(chǔ)備液5mL，置于100mL量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取本品約0.1g，精密稱定，置于10mL量瓶中，加二甲基亞砜溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 取對照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測定理論板數(shù)及分離度。結(jié)果丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺色譜峰的理論板數(shù)均大于5 000，峰之間的分離度均大于3.0，空白溶劑二甲基亞砜對測定無干擾，如圖1所示。

圖1 氣相色譜圖A.對照品；B.樣品1.丙酮；2.乙酸乙酯；3.異丙醇；4.乙腈；5.甲苯；6.N，N－二甲基甲酰胺Fig.1 GC chromatogramsA.reference substance solution；B.sample solution；1.acetone；2.ethyl acetate；3.iso－propanol；4.acetonitrile；5.toluene；6.N，N－dimethylformamide

2.3.2 線性關(guān)系及檢測限 精密量取對照品儲(chǔ)備液0.5，1.0，2.5，5，10和25mL，分別置于50mL量瓶中，用二甲基亞砜稀釋至刻度。按2.1項(xiàng)下色譜條件測定，以各自測得的峰面積Y為縱坐標(biāo)、相應(yīng)質(zhì)量濃度X為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，取對照品溶液，采用逐步稀釋法，按上述色譜條件測定，檢測限以S／N＝3計(jì)算。結(jié)果如表1所示。

表1 線性關(guān)系與檢測限Tab.1 Linear ranges and limits of detection （n＝6）

2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn) 取對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。結(jié)果丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺的RSD在0.21%～0.76%之間。

2.3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取對照品溶液，經(jīng)0，3，6，12和24h分別進(jìn)樣，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，6種殘留有機(jī)溶劑的RSD在0.23%～1.14%之間。結(jié)果表明，24h內(nèi)上述6種殘留溶劑穩(wěn)定性良好。

2.3.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取鹽酸倍他洛爾原料9份，每份約0.1g，精密稱定，置于10mL量瓶中，分為3組，各3份。每組分別精密加入對照品溶液4，5和6mL，用二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)行回收率測定。結(jié)果丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺的平均回收率（n＝9）分別為100.5%，99.8%，98.2%，99.1%，99.2%和99.13%；RSD分別為0.43%，0.52%，0.78%，0.64%，1.28%和1.03%。

2.4 樣品測定 取對照品溶液及供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，以外標(biāo)法按峰面積計(jì)算，結(jié)果：鹽酸倍他洛爾原料中檢出乙醚和乙酸乙酯，含量分別為0.08%和0.02%，其余有機(jī)溶劑均未檢出。

3 討論

3.1 色譜柱選擇 本品控制的丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺6種殘留溶劑均為極性溶劑，按照相似相溶的原理，考察了DB－624、DB－WAX、DB－1、DB－1701不同極性毛細(xì)管柱，結(jié)果DB－WAX毛細(xì)管柱對這6種有機(jī)溶劑峰形和分離效果最佳。

3.2 柱溫選擇 通過對升溫程序的比較發(fā)現(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)采用程序升溫時(shí)，對丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺6種有機(jī)溶劑分離度與峰形均較好。

3.3 殘留溶劑限度 丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺均為鹽酸倍他洛爾在合成和制備過程中引入的有機(jī)溶劑。根據(jù)“藥品注冊的國際技術(shù)要求（ICH）［7］”和《中國藥典》（2010年版二部）［8］關(guān)于藥品中有機(jī)溶劑殘留量指導(dǎo)原則的規(guī)定，其中丙酮、乙酸乙酯、異丙醇為第二類應(yīng)該限制使用的溶劑，乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺為第三類藥品GMP或其他質(zhì)量要求限制使用的溶劑，應(yīng)按藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP）或其他質(zhì)量要求加以限制使用，即指導(dǎo)原則規(guī)定，乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺限度分別為0.041%，0.089%和0.088%，其余均為0.5%。本次研究的樣品中，檢出了部分殘留溶劑，但所測結(jié)果均在藥典規(guī)定的范圍內(nèi)。

本實(shí)驗(yàn)方法簡便、快捷，結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高，適用于鹽酸倍他洛爾中6種有機(jī)溶劑殘留量的檢測。

［1］Frishman W H.長效β1受體阻滯劑倍他洛爾［J］.國外醫(yī)藥合成藥生化藥制劑分冊，1991，12（4）：218－220.

［2］陳捷，張亞臣，呂寶經(jīng)，等.倍他洛爾對高血壓性心肌肥厚和鈣超載的影響［J］.國外醫(yī)學(xué)心血管疾病分冊，2000，27（6）：345－347.

［3］Sharif N A，Xu S X.Binding affinities of ocular hypotensive beta－blockers levobetaxolol，levobunolol，and timolol at endogenous guinea pig beta－adrenoceptors［J］.J Ocul Pharmacol Ther，2004，20（2）：93－99.

［4］Buskirk E M，Weinreb R N，Berry D P，et al.Betaxolol in patients with glaucoma and asthma［J］.Am J Ophthalmol，1986，101（5）：531－534.

［5］吳彤，張紅，劉麗娟.倍他洛爾對缺氧視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞鈣通道的作用［J］.中國老年學(xué)雜志，2006，26（3）：353－356.

［6］尤園.頂空毛細(xì)管氣相色譜法測定4－雄烯二酮中的殘留溶劑［J］.西北藥學(xué)雜志，2014，29（2）：142－145.

［7］周海鈞.藥品注冊的國際技術(shù)要求：質(zhì)量部分［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：343.

［8］國家藥典委員會(huì).中國藥典2010年版［S］.二部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄63.