反相液相色譜法測(cè)定鹽酸去氧腎上腺素注射液中依地酸二鈉的含量

蔣宇丹 施建國

( 上海禾豐制藥有限公司 上海 201206)

鹽酸去氧腎上腺素為腎上腺素受體激動(dòng)藥，具有收縮血管的作用。臨床上用于治療休克及維持血壓。鹽酸去氧腎上腺素具有酚羥基結(jié)構(gòu)，易被氧化，故制成注射液需加入依地酸二鈉作為穩(wěn)定劑[1]。常用的依地酸二鈉的濃度一般為0.005%～0.1%（W/V）[2]。依地酸二鈉大量吸收時(shí)將引起鈣的減少而出現(xiàn)低血鈣癥狀[3]。因此，控制依地酸二鈉的加入量是非常必要的。目前該注射液現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)尚未對(duì)依地酸二鈉的含量進(jìn)行控制，也未有相關(guān)報(bào)道。依地酸二鈉在中國藥典現(xiàn)行版中雖有收載，但含量測(cè)定方法為容量分析法[4]，無法對(duì)微量依地酸二鈉進(jìn)行測(cè)定，也無法消除注射液中其他成分的干擾，不適合注射液中依地酸二鈉的檢測(cè)。本文參考文獻(xiàn)[5]建立了反相液相色譜法測(cè)定鹽酸腎上腺素注射液中依地酸二鈉的含量。

1 儀器與試藥

Agilent L1260液相色譜儀，VWD檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器（安捷倫科技中國有限公司）。Sartorius CPA225D電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）。依地酸二鈉對(duì)照品（批號(hào)：20110601，含量100.2%，湖南爾康制藥股份有限公司）。鹽酸去氧腎上腺素注射液（1 ml：10 mg）由本公司提供。甲醇、10%四丁基氫氧化銨為色譜純，水為超純水，甲酸及其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Kromasil C8色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-10%四丁基氫氧化銨-98%甲酸-水( 125：12：0.5：875)，檢測(cè)波長254 nm，柱溫40 ℃，流速1.5 ml/min，進(jìn)樣量 20 μl。

2.2 依地酸二鈉對(duì)照品溶液的配制

取依地酸二鈉對(duì)照品適量，加水溶解并稀釋制成1 mg/ml的溶液。測(cè)定前，精密量取1 ml置100 ml量瓶中，加水20 ml，再加0.1 mol/L的三氯化鐵溶液2.0 ml，搖勻，超聲15 min；加水至刻度搖勻，備用。

2.3 供試品溶液的配制

取鹽酸去氧腎上腺素注射液10 ml置100 ml量瓶中，加水20 ml，再加0.1 mol/L的三氯化鐵溶液2.0 ml，搖勻，超聲15 min，加水稀釋至刻度，搖勻。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 專屬性試驗(yàn)

按處方量，不加依地酸二鈉，配制空白輔料溶液，按2.3項(xiàng)下方法配制溶液，結(jié)果顯示鹽酸去氧腎上腺素注射液中鹽酸去氧腎上腺素及其他輔料對(duì)本方法中依地酸二鈉的測(cè)定均無干擾，該方法具有較強(qiáng)專屬性（圖1）。2.4.2 線性范圍

B：含依地酸二鈉峰（1為依地酸二鈉峰）圖1 依地酸二鈉的RP-HPLC圖譜

分別精密量取依地酸二鈉對(duì)照品溶液0.5、0.8、1.0、1.5、2.0、3.0 和 5.0 ml置 100 ml量瓶中，加水 20 ml， 加0.1 mol/L的三氯化鐵溶液2.0 ml，搖勻，超聲15 min，加水稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為5.06，8.09，10.11，15.16，20.22，30.33，50.55 μg/ml的溶液。分別精密量取上述溶液20 μl，按2.1項(xiàng)下方法測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，做線性回歸，回歸方程（n=7）為：Y=20.27 X-17.08，r=0.999。結(jié)果表明，依地酸二鈉在5.06~50.55 μg/ml 濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4.3 精密度試驗(yàn)

取同一批供試品，分別按2.3配制6 份供試品溶液并測(cè)定，測(cè)得依地酸二鈉平均含量為0.010 0%（W/V），RSD為0.96% （n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.4.4 回收率試驗(yàn)

分別按處方量配制含依地酸二鈉80%、100%、120%的鹽酸去氧腎上腺素注射液各3份，按2.3配制供試品溶液，測(cè)定并計(jì)算回收率，平均回收率為101.0%，RSD=0.31%（表1）。

表1 樣品的回收試驗(yàn)

2.5 供試品測(cè)定

取2.2對(duì)照品溶液和2.3供試品溶液各20 μl注入液相色譜儀分析，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。測(cè)定三批鹽酸去氧腎上腺素注射液中依地酸二鈉的含量分別為0.009 3%，0.009 1%，0.010 0%（W/V）。

3 討論

3.1 依地酸二鈉與三氯化鐵反應(yīng)時(shí)間的確定

將依地酸二鈉與三氯化鐵溶液分別于超聲儀超聲5、10、15、20、25、30 min 后配制溶液，分別精密量取20μl注入液相色譜儀分析，結(jié)果表明測(cè)定樣品在超聲10 min時(shí)反應(yīng)已基本完全，為減少對(duì)照品與供試品的反應(yīng)誤差，將反應(yīng)時(shí)間定為15 min。

3.2 色譜柱的選擇

文獻(xiàn)[6]采用苯乙烯-二乙烯苯柱對(duì)依地酸二鈉進(jìn)行測(cè)定?？紤]到色譜柱的通用性，本法采用三根不同品牌的C8柱進(jìn)行試驗(yàn)，其對(duì)依地酸二鈉的測(cè)定無差異，峰形與分離效果均好，因此選用C8柱建立檢驗(yàn)方法。

3.3 結(jié)論

經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，本文所建立的反相液相色譜法操作簡(jiǎn)單、專屬性強(qiáng)，能準(zhǔn)確測(cè)定鹽酸去氧腎上腺素注射液中依地酸二鈉的含量。

[1] Smith G, Hasson K, Clements JA. Effects of ascorbic acid and disodium edetate on the stability of isoprenaline hydrochloride injection [J]. Pharm Sci, 1984, 9(3): 209-215.

[2] 羅RC，舍斯基PJ，韋勒PJ. 藥用輔料手冊(cè)[M]. 鄭俊民,譯. 4版. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2005: 263.

[3] 蕭三貫. 最新國家藥用輔料標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)[M]. 北京: 中國醫(yī)藥科技電子出版社, 2006: 50-52.

[4] 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典: 2010年版（二部）[M]. 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 2010: 1206.

[5] 盧京光, 裴琳, 周景岳, 等. 反相離子對(duì)色譜法測(cè)定硫普羅寧注射液中乙二胺四醋酸鹽的含量[J]. 藥物分析雜志,2011, 31(4): 772-775.

[6] Hall L, Takahashi L. Quantitative determination of disodium edetate in ophthalmic and contact lens care solutions by reversed-phase high-performance liquid chromatography [J].Pharm Sci, 1988, 77(3): 247-250.