• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定飼料中3種氯丙那林異構(gòu)體和巴氯芬

    2014-10-24 21:30:29李陽等
    分析化學(xué) 2014年4期
    關(guān)鍵詞:異構(gòu)體飼料

    李陽等

    摘要:以溶劑提取固相萃取為前處理方式,建立了超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測飼料中3種氯丙那林異構(gòu)體和巴氯芬的新方法。試樣用0.1 mol/L HCl甲醇(4∶1, V/V)溶劑振蕩提取20 min,離心去雜質(zhì)后由MCX柱凈化、濃縮,經(jīng)Waters BEH C18色譜柱梯度洗脫分離,串聯(lián)質(zhì)譜法測定,正離子掃描,并以外標(biāo)法計算結(jié)果。方法檢出限為20 μg/kg,定量限為50 μg/kg。4種目標(biāo)化合物在3個添加水平上進行回收實驗,回收率均在80%~110%之間;相對標(biāo)準偏差均小于或等于10.2%。

    關(guān)鍵詞:飼料; 氯丙那林; 異構(gòu)體; 巴氯芬; 超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜

    1引言

    氯丙那林(Clorprenaline)屬于β2受體激動劑類藥物,醫(yī)學(xué)上主要用于擴張支氣管和增加肺通氣量,可治療哮喘和肺炎。將其添加到飼料或動物飲用水中飼喂動物能夠起到提高酮體瘦肉率,促進動物生長的作用[1],是近年來發(fā)現(xiàn)的新型“瘦肉精”替代品[2]。巴氯芬(Baclofen)屬于鎮(zhèn)靜劑類藥物,主要用于骨骼肌松馳,緩解痙攣及外傷等[3],在畜牧養(yǎng)殖過程中使用能夠抗驚厥、減少動物營養(yǎng)消耗、增加體重,該藥物也是近些年在動物產(chǎn)品安全監(jiān)管中新發(fā)現(xiàn)的違禁添加物。食用含有氯丙那林和巴氯芬的動物產(chǎn)品易出現(xiàn)毒副作用,對人體健康造成一定程度損害。2002年,我國農(nóng)業(yè)部已發(fā)布176號公告明令禁止在畜牧養(yǎng)殖過程中使用β2受體激動劑和鎮(zhèn)靜劑類藥物。但是,仍有一些新型藥物被違法添加使用的現(xiàn)象出現(xiàn)。因此,建立相應(yīng)檢測方法是很有必要的。

    目前,關(guān)于氯丙那林和巴氯芬的檢測方法已有報道,實驗樣品主要有飼料[4]、血清[5]、尿液[6]、組織[7]、原料藥[8]、牛奶[9]等。色譜法是主要的分離方法,包括反相液相色譜法[1,2,5,8,9]、離子色譜法[10]、氣相色譜法[11]以及毛細管電泳法[12]等。常用的檢測器包括熒光檢測器[12,13]、紫外檢測器[1,8,13]、電導(dǎo)檢測器[10]及質(zhì)譜[5~7,9,11,14]等。在飼料中違禁藥物監(jiān)測過程中,經(jīng)常應(yīng)用單四級桿質(zhì)譜進行非針對性篩查,以發(fā)現(xiàn)違禁添加物。由于氯丙那林和巴氯芬的理論分子量分別為213.7069和213.6635(由Waters Masslynx 4.1 Molecular calculator計算得到),二者數(shù)值接近,如果應(yīng)用一級質(zhì)譜篩查,則難以對二者進行準確定性。此外,氯丙那林含有苯環(huán)一氯取代結(jié)構(gòu),存在鄰、間、對位置異構(gòu)體,在色譜分離上有不同保留時間的差異,如果只應(yīng)用其中一種異構(gòu)體的保留時間進行確證,容易將異構(gòu)體判定為非目標(biāo)化合物,給違禁藥物監(jiān)管帶來漏洞。圖1為巴氯芬和3種氯丙那林異構(gòu)體結(jié)構(gòu)式。本研究采用溶劑提取后,經(jīng)固相萃取凈化、濃縮,反相液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定,通過優(yōu)化前處理方法以及儀器檢測參數(shù),建立了針對巴氯芬和3種氯丙那林異構(gòu)體的檢測方法。本方法適用于飼料實際樣品分析,結(jié)果準確、靈敏。

    3結(jié)果與討論

    3.1質(zhì)譜和色譜條件優(yōu)化

    氯丙那林為β2受體激動劑類藥物,屬于堿性化合物,pKa>7[15];巴氯芬為酸堿兩性化合物,在水中pKa值為3.87和9.62[16]。4種目標(biāo)化合物均可采用正離子電離模式和反相液相色譜分離。通常向流動相中添加適量甲酸將有助于堿性物質(zhì)電離,并使目標(biāo)化合物色譜柱保留時間提前。在此基礎(chǔ)上,本研究分別采用乙腈0.1%甲酸、乙腈水、甲醇0.1%甲酸、甲醇水作為流動相,考察Acquity Uplc BEH C18和Acquity Uplc shield RP 18色譜柱對目標(biāo)化合物色譜分離及質(zhì)譜電離的影響。結(jié)果表明,流動相中添加甲酸后待測物質(zhì)的信號強度明顯提高,甲醇和乙腈作為流動相對信號強度影響并不顯著。但使用乙腈時,間位氯丙那林和對位氯丙那林異構(gòu)體分離度較差(圖2A)。Acquity Uplc BEH C18和Acquity Uplc shield RP 18色譜柱對4種化合物均能實現(xiàn)基線分離,與后者相比,4種化合物在Acquity Uplc BEH C18上保留時間相對較長,巴氯芬與3種氯丙那林異構(gòu)體更好地實現(xiàn)分離,去雜能力更強。圖2C為使用Acquity Uplc BEH C18的分離效果圖,圖2B為使用Acquity Uplc shield RP 18色譜柱分離效果圖。綜合考慮檢測時間、分離效果以及試劑毒性等因素,本研究采用甲醇0.1%甲酸溶液作為流動相,Acquity Uplc BEH C18色譜柱作為色譜條件。圖2定量離子提取離子色譜圖中4種化合物濃度均為1.0 μg/L。

    質(zhì)譜條件優(yōu)化過程中,首先采用濃度為1.0 mg/L上述4種待測目標(biāo)化合物標(biāo)準溶液分別上機測定。在正離子模式下,進行母離子全掃描。確定分子離子,并對儀器電離電壓、錐孔電壓、碰撞能量等參數(shù)進行優(yōu)化,確定兩個子離子作為定性離子,并選擇其中之一作為定量離子。

    3.2樣品前處理條件優(yōu)化

    氯丙那林和巴氯芬均具有弱堿性,在酸性條件下帶正電,易被水、水溶性溶劑或它們的混合溶劑提取。提取液pH值和有機溶劑比例是影響提取效率的兩大因素。本研究對比了添加濃度為50 μg/kg水平下,3種濃度HCl溶液混合不同比例甲醇的提取效果。圖3為不同提取條件下的平均回收率,當(dāng)提取條件為0.1 mol/L HCl甲醇(4∶1, V/V)時,目標(biāo)化合物的回收率綜合水平較高,均在85%~110%之間。由4種目標(biāo)化合物回收率隨HCl濃度及有機相比例變化趨勢圖可見,4種目標(biāo)化合物在有機相比例為20%~50%范圍內(nèi),回收率均較高,證明添加適量有機溶劑有助于目標(biāo)物提取。當(dāng)有機相比例小于50%時,HCl濃度對3種氯丙那林異構(gòu)體回收率影響較大,回收率隨HCl濃度增大而提高;但在此范圍內(nèi),HCl濃度對巴氯芬回收率影響較小。當(dāng)有機相比例大于50%時,隨著有機相比例增加,目標(biāo)化合物回收率呈下降趨勢。當(dāng)提取液為100%甲醇時,4種目標(biāo)化合物回收率均較低。

    本研究比較了C18柱、HLB柱、MCX柱、WCX柱的不同凈化效果。結(jié)果表明,WCX柱對目標(biāo)化合物保留效果較差,C18柱、HLB凈化后雜質(zhì)較多,基質(zhì)效應(yīng)較大。由于MCX柱是利用陽離子交換作用保留目標(biāo)化合物,待測的4種化合物均為堿性化合物,pKa>7,在酸性條件下帶正電,MCX對其柱具有較好的吸附作用。甲酸和甲醇不能將目標(biāo)化合物洗脫,但能達到洗脫極性和非極性雜質(zhì)的作用,所以選擇甲酸和甲醇作為淋洗溶液。氨化甲醇是MCX柱常用的洗脫溶劑,為保證目標(biāo)化合物完全被洗脫,本研究采用了5% 氨化甲醇溶液,洗脫體積為5.0 mL。綜合以上條件, 選擇0.1 mol/L HCl甲醇(4∶1, V/V)為樣品提取溶液,經(jīng)MCX柱保留后,使用0.2%甲酸和甲醇淋洗雜質(zhì),再用5%氨化甲醇洗脫,洗脫液雜質(zhì)少,并且容易吹干,有很好的凈化和濃縮效果。

    3.3基質(zhì)效應(yīng)考察

    采用提取后添加法定量測定空白基質(zhì)提取液與純?nèi)軇┲型瑵舛确治鑫锏碾x子響應(yīng)強度,通過公式ME(%)=基質(zhì)溶液中分析物峰面積/純?nèi)軇┲蟹治鑫锓迕娣e,分別在3個不同濃度下評價基質(zhì)效應(yīng)。ME<1,基質(zhì)對目標(biāo)化合物的響應(yīng)產(chǎn)生抑制作用;ME>1,基質(zhì)對目標(biāo)化合物的響應(yīng)產(chǎn)生增強作用;ME=1,不存在基質(zhì)效應(yīng)。如圖4所示,樣品基質(zhì)對4種分析物均有一定程度抑制作用,但在3個濃度水平下,ME均在80%~100%范圍內(nèi),表明本研究所建立前處理方法去雜質(zhì)效果較好。因此,可以采用純?nèi)軇?biāo)準溶液進行定量計算。

    3.6實際樣品檢測

    利用本方法對收集的21份飼料實際樣品進行了檢測(包括豬配合飼料5份,小、中、大豬用濃縮飼料6份,肉牛濃縮飼料2份,肉牛精料補充料2份,肉羊?qū)S脻饪s飼料2份,肉羊?qū)S镁涎a充料2份,兔全價配合飼料2份),所有樣品中均未檢出4種目標(biāo)化合物。

    References

    1Yan H Y, Liu S T, Gao M M, Sun N. J. Chromatogr. A, 2013, 1294 : 10-16

    2CAO Ying, HUANG ShiXin, LI DanNi. Chinese Journal of Veterinary Drug, 2007, 41(12): 30-32

    3Vienne J, Bettler B, Franken P, Tafti M. The Journal of Neuroscience., 2010, 30(42): 14194-14204

    4Zhang G J, Fang B H, Liu Y H, Wang X F, Xu L X, Zhang Y P, He L M. J. Chromatogr. B, 2013, 936: 10-17

    5MiksaI R, Poppenga R H. Journal of Analytical Toxicology., 2003, 27(5): 275-283

    6Du X D, Wy Y L, Yang H J, Yang T. J. Chromatogr. A, 2012, 1260: 25-32

    7Wang L Q, He L M, Wang Z, Wang X F, Shu J H,Yang J W, Zhang G K, Zeng Z L. Analyst, 2013, 138(16): 4579-4584

    8Nalluri B N, Sushmitha K, Sunandana B, Babu D P. Journal of Applied Pharmaceutical Science., 2012, 02(07): 111-116

    9YANG Fang, LIU ZhenCai, LIN YongHui, CHEN Jian, PANG GuoFang, CHEN GuoNan. Food Anal. Methods., 2012, 5: 138-147

    10SHEN S H, OUYANG J, Baeyensb W R C, Delanghec J R, YANG Y P. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis., 2005, 38(1): 166-172

    11WANG PeiLong, FAN Li, SU XiaoOu, YE ZhiHua. Chinese J. Anal. Chem., 2012, 40(3): 470-473

    12CAO LiWei, LI Cong, REN Dong. Journal of Jinan University(Natural Science)., 2011, 32(5): 485-488

    13Cao L W, LI C. Acta Chromatographica, 2012, 24(3): 383-397

    14FAN S, MIAO H, ZHAO Y F, CHEN H J, WU Y N. J. Agric. Food Chem., 2012, 60(8): 1898-1905

    15LI JunSuo, QIU YueMing, WANG Chao. Residue Analysis for Veterinary Drug. Shanghai: Shanghai Scientific & Technical Publishers, 2002: 641-644

    16VaccherM P, Lipka E, Bonte J P, Vaccher C. Electrophoresis., 2004, 25: 1111-1120

    本研究比較了C18柱、HLB柱、MCX柱、WCX柱的不同凈化效果。結(jié)果表明,WCX柱對目標(biāo)化合物保留效果較差,C18柱、HLB凈化后雜質(zhì)較多,基質(zhì)效應(yīng)較大。由于MCX柱是利用陽離子交換作用保留目標(biāo)化合物,待測的4種化合物均為堿性化合物,pKa>7,在酸性條件下帶正電,MCX對其柱具有較好的吸附作用。甲酸和甲醇不能將目標(biāo)化合物洗脫,但能達到洗脫極性和非極性雜質(zhì)的作用,所以選擇甲酸和甲醇作為淋洗溶液。氨化甲醇是MCX柱常用的洗脫溶劑,為保證目標(biāo)化合物完全被洗脫,本研究采用了5% 氨化甲醇溶液,洗脫體積為5.0 mL。綜合以上條件, 選擇0.1 mol/L HCl甲醇(4∶1, V/V)為樣品提取溶液,經(jīng)MCX柱保留后,使用0.2%甲酸和甲醇淋洗雜質(zhì),再用5%氨化甲醇洗脫,洗脫液雜質(zhì)少,并且容易吹干,有很好的凈化和濃縮效果。

    3.3基質(zhì)效應(yīng)考察

    采用提取后添加法定量測定空白基質(zhì)提取液與純?nèi)軇┲型瑵舛确治鑫锏碾x子響應(yīng)強度,通過公式ME(%)=基質(zhì)溶液中分析物峰面積/純?nèi)軇┲蟹治鑫锓迕娣e,分別在3個不同濃度下評價基質(zhì)效應(yīng)。ME<1,基質(zhì)對目標(biāo)化合物的響應(yīng)產(chǎn)生抑制作用;ME>1,基質(zhì)對目標(biāo)化合物的響應(yīng)產(chǎn)生增強作用;ME=1,不存在基質(zhì)效應(yīng)。如圖4所示,樣品基質(zhì)對4種分析物均有一定程度抑制作用,但在3個濃度水平下,ME均在80%~100%范圍內(nèi),表明本研究所建立前處理方法去雜質(zhì)效果較好。因此,可以采用純?nèi)軇?biāo)準溶液進行定量計算。

    3.6實際樣品檢測

    利用本方法對收集的21份飼料實際樣品進行了檢測(包括豬配合飼料5份,小、中、大豬用濃縮飼料6份,肉牛濃縮飼料2份,肉牛精料補充料2份,肉羊?qū)S脻饪s飼料2份,肉羊?qū)S镁涎a充料2份,兔全價配合飼料2份),所有樣品中均未檢出4種目標(biāo)化合物。

    References

    1Yan H Y, Liu S T, Gao M M, Sun N. J. Chromatogr. A, 2013, 1294 : 10-16

    2CAO Ying, HUANG ShiXin, LI DanNi. Chinese Journal of Veterinary Drug, 2007, 41(12): 30-32

    3Vienne J, Bettler B, Franken P, Tafti M. The Journal of Neuroscience., 2010, 30(42): 14194-14204

    4Zhang G J, Fang B H, Liu Y H, Wang X F, Xu L X, Zhang Y P, He L M. J. Chromatogr. B, 2013, 936: 10-17

    5MiksaI R, Poppenga R H. Journal of Analytical Toxicology., 2003, 27(5): 275-283

    6Du X D, Wy Y L, Yang H J, Yang T. J. Chromatogr. A, 2012, 1260: 25-32

    7Wang L Q, He L M, Wang Z, Wang X F, Shu J H,Yang J W, Zhang G K, Zeng Z L. Analyst, 2013, 138(16): 4579-4584

    8Nalluri B N, Sushmitha K, Sunandana B, Babu D P. Journal of Applied Pharmaceutical Science., 2012, 02(07): 111-116

    9YANG Fang, LIU ZhenCai, LIN YongHui, CHEN Jian, PANG GuoFang, CHEN GuoNan. Food Anal. Methods., 2012, 5: 138-147

    10SHEN S H, OUYANG J, Baeyensb W R C, Delanghec J R, YANG Y P. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis., 2005, 38(1): 166-172

    11WANG PeiLong, FAN Li, SU XiaoOu, YE ZhiHua. Chinese J. Anal. Chem., 2012, 40(3): 470-473

    12CAO LiWei, LI Cong, REN Dong. Journal of Jinan University(Natural Science)., 2011, 32(5): 485-488

    13Cao L W, LI C. Acta Chromatographica, 2012, 24(3): 383-397

    14FAN S, MIAO H, ZHAO Y F, CHEN H J, WU Y N. J. Agric. Food Chem., 2012, 60(8): 1898-1905

    15LI JunSuo, QIU YueMing, WANG Chao. Residue Analysis for Veterinary Drug. Shanghai: Shanghai Scientific & Technical Publishers, 2002: 641-644

    16VaccherM P, Lipka E, Bonte J P, Vaccher C. Electrophoresis., 2004, 25: 1111-1120

    本研究比較了C18柱、HLB柱、MCX柱、WCX柱的不同凈化效果。結(jié)果表明,WCX柱對目標(biāo)化合物保留效果較差,C18柱、HLB凈化后雜質(zhì)較多,基質(zhì)效應(yīng)較大。由于MCX柱是利用陽離子交換作用保留目標(biāo)化合物,待測的4種化合物均為堿性化合物,pKa>7,在酸性條件下帶正電,MCX對其柱具有較好的吸附作用。甲酸和甲醇不能將目標(biāo)化合物洗脫,但能達到洗脫極性和非極性雜質(zhì)的作用,所以選擇甲酸和甲醇作為淋洗溶液。氨化甲醇是MCX柱常用的洗脫溶劑,為保證目標(biāo)化合物完全被洗脫,本研究采用了5% 氨化甲醇溶液,洗脫體積為5.0 mL。綜合以上條件, 選擇0.1 mol/L HCl甲醇(4∶1, V/V)為樣品提取溶液,經(jīng)MCX柱保留后,使用0.2%甲酸和甲醇淋洗雜質(zhì),再用5%氨化甲醇洗脫,洗脫液雜質(zhì)少,并且容易吹干,有很好的凈化和濃縮效果。

    3.3基質(zhì)效應(yīng)考察

    采用提取后添加法定量測定空白基質(zhì)提取液與純?nèi)軇┲型瑵舛确治鑫锏碾x子響應(yīng)強度,通過公式ME(%)=基質(zhì)溶液中分析物峰面積/純?nèi)軇┲蟹治鑫锓迕娣e,分別在3個不同濃度下評價基質(zhì)效應(yīng)。ME<1,基質(zhì)對目標(biāo)化合物的響應(yīng)產(chǎn)生抑制作用;ME>1,基質(zhì)對目標(biāo)化合物的響應(yīng)產(chǎn)生增強作用;ME=1,不存在基質(zhì)效應(yīng)。如圖4所示,樣品基質(zhì)對4種分析物均有一定程度抑制作用,但在3個濃度水平下,ME均在80%~100%范圍內(nèi),表明本研究所建立前處理方法去雜質(zhì)效果較好。因此,可以采用純?nèi)軇?biāo)準溶液進行定量計算。

    3.6實際樣品檢測

    利用本方法對收集的21份飼料實際樣品進行了檢測(包括豬配合飼料5份,小、中、大豬用濃縮飼料6份,肉牛濃縮飼料2份,肉牛精料補充料2份,肉羊?qū)S脻饪s飼料2份,肉羊?qū)S镁涎a充料2份,兔全價配合飼料2份),所有樣品中均未檢出4種目標(biāo)化合物。

    References

    1Yan H Y, Liu S T, Gao M M, Sun N. J. Chromatogr. A, 2013, 1294 : 10-16

    2CAO Ying, HUANG ShiXin, LI DanNi. Chinese Journal of Veterinary Drug, 2007, 41(12): 30-32

    3Vienne J, Bettler B, Franken P, Tafti M. The Journal of Neuroscience., 2010, 30(42): 14194-14204

    4Zhang G J, Fang B H, Liu Y H, Wang X F, Xu L X, Zhang Y P, He L M. J. Chromatogr. B, 2013, 936: 10-17

    5MiksaI R, Poppenga R H. Journal of Analytical Toxicology., 2003, 27(5): 275-283

    6Du X D, Wy Y L, Yang H J, Yang T. J. Chromatogr. A, 2012, 1260: 25-32

    7Wang L Q, He L M, Wang Z, Wang X F, Shu J H,Yang J W, Zhang G K, Zeng Z L. Analyst, 2013, 138(16): 4579-4584

    8Nalluri B N, Sushmitha K, Sunandana B, Babu D P. Journal of Applied Pharmaceutical Science., 2012, 02(07): 111-116

    9YANG Fang, LIU ZhenCai, LIN YongHui, CHEN Jian, PANG GuoFang, CHEN GuoNan. Food Anal. Methods., 2012, 5: 138-147

    10SHEN S H, OUYANG J, Baeyensb W R C, Delanghec J R, YANG Y P. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis., 2005, 38(1): 166-172

    11WANG PeiLong, FAN Li, SU XiaoOu, YE ZhiHua. Chinese J. Anal. Chem., 2012, 40(3): 470-473

    12CAO LiWei, LI Cong, REN Dong. Journal of Jinan University(Natural Science)., 2011, 32(5): 485-488

    13Cao L W, LI C. Acta Chromatographica, 2012, 24(3): 383-397

    14FAN S, MIAO H, ZHAO Y F, CHEN H J, WU Y N. J. Agric. Food Chem., 2012, 60(8): 1898-1905

    15LI JunSuo, QIU YueMing, WANG Chao. Residue Analysis for Veterinary Drug. Shanghai: Shanghai Scientific & Technical Publishers, 2002: 641-644

    16VaccherM P, Lipka E, Bonte J P, Vaccher C. Electrophoresis., 2004, 25: 1111-1120

    猜你喜歡
    異構(gòu)體飼料
    跨域異構(gòu)體系對抗聯(lián)合仿真試驗平臺
    四種青貯法 飼料新鮮又適口
    高效液相色譜法測定替格瑞洛原料藥中異構(gòu)體的含量
    浙江化工(2022年4期)2022-05-07 08:39:42
    粵海飼料
    簡析旋光異構(gòu)體平面分析和構(gòu)象分析的一致性
    云南化工(2021年8期)2021-12-21 06:37:38
    羊飼料的營養(yǎng)成分及配制
    歐美飼料禁抗實踐與啟示
    廣東飼料(2016年6期)2016-12-01 03:43:27
    我國飼料酶制劑研發(fā)與應(yīng)用實踐
    廣東飼料(2016年2期)2016-12-01 03:43:05
    利奈唑胺原料藥中R型異構(gòu)體的手性HPLC分析
    CPU+GPU異構(gòu)體系混合編程模式研究
    亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲第一青青草原| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 午夜日韩欧美国产| 亚洲精品国产一区二区精华液| av福利片在线| 亚洲一码二码三码区别大吗| 精品乱码久久久久久99久播| 久久久国产欧美日韩av| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 一区二区三区四区激情视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产黄色免费在线视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 欧美成人午夜精品| 搡老熟女国产l中国老女人| 看免费av毛片| 亚洲综合色网址| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 9色porny在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 成年动漫av网址| 一区二区三区四区激情视频| 精品欧美一区二区三区在线| 麻豆国产av国片精品| 十八禁人妻一区二区| 国产福利在线免费观看视频| 欧美激情高清一区二区三区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 欧美精品亚洲一区二区| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产高清国产精品国产三级| 大片电影免费在线观看免费| 一区在线观看完整版| 久久人妻熟女aⅴ| 宅男免费午夜| 日本欧美视频一区| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久人人爽人人片av| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 高潮久久久久久久久久久不卡| 2018国产大陆天天弄谢| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 欧美日韩成人在线一区二区| 男女下面插进去视频免费观看| 国产免费现黄频在线看| 久久天堂一区二区三区四区| 一区福利在线观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 97精品久久久久久久久久精品| 高清欧美精品videossex| av在线播放精品| 国产精品一区二区在线不卡| 午夜激情久久久久久久| 性少妇av在线| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 大香蕉久久成人网| 一级,二级,三级黄色视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲av国产av综合av卡| 国产成人精品久久二区二区91| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲中文av在线| 色94色欧美一区二区| 久久久水蜜桃国产精品网| 99国产精品免费福利视频| 啦啦啦 在线观看视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久天堂一区二区三区四区| 久久av网站| 精品乱码久久久久久99久播| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲成人国产一区在线观看| kizo精华| 亚洲av美国av| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 他把我摸到了高潮在线观看 | 少妇精品久久久久久久| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| av天堂在线播放| 国产日韩欧美在线精品| 午夜福利乱码中文字幕| 午夜福利一区二区在线看| 国产av一区二区精品久久| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 国产99久久九九免费精品| 人人澡人人妻人| xxxhd国产人妻xxx| 丁香六月欧美| 欧美乱码精品一区二区三区| www日本在线高清视频| 精品国产国语对白av| 亚洲国产欧美网| av不卡在线播放| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲精品第二区| 国产日韩欧美视频二区| 欧美日韩亚洲高清精品| 嫩草影视91久久| 国产在线一区二区三区精| 丝袜喷水一区| 国产又爽黄色视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产野战对白在线观看| 黄频高清免费视频| kizo精华| 国产xxxxx性猛交| 免费少妇av软件| 另类亚洲欧美激情| 男女床上黄色一级片免费看| www.999成人在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 男女床上黄色一级片免费看| 女性生殖器流出的白浆| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 男女之事视频高清在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 精品免费久久久久久久清纯 | 国产成人精品久久二区二区免费| 美国免费a级毛片| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产精品国产三级国产专区5o| 丝袜美足系列| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲国产中文字幕在线视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 黄色毛片三级朝国网站| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 欧美国产精品va在线观看不卡| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 999久久久精品免费观看国产| 国产高清视频在线播放一区 | 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲国产欧美在线一区| 老司机福利观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 窝窝影院91人妻| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 九色亚洲精品在线播放| 一区二区三区激情视频| 18禁观看日本| 国产日韩欧美在线精品| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 美女高潮到喷水免费观看| 国产精品九九99| 51午夜福利影视在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲avbb在线观看| 正在播放国产对白刺激| 精品国内亚洲2022精品成人 | 青春草视频在线免费观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 十八禁网站网址无遮挡| 久久精品国产亚洲av高清一级| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲国产av影院在线观看| av网站在线播放免费| xxxhd国产人妻xxx| 精品国产国语对白av| 九色亚洲精品在线播放| 另类精品久久| 波多野结衣av一区二区av| 日韩视频在线欧美| 18禁国产床啪视频网站| 超碰成人久久| 亚洲精品国产av成人精品| 日韩 亚洲 欧美在线| 97在线人人人人妻| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久亚洲国产成人精品v| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久久久久久久久久久大奶| 久久九九热精品免费| 桃花免费在线播放| 91大片在线观看| 亚洲成人手机| 久久国产精品影院| av在线app专区| 久久亚洲国产成人精品v| 香蕉丝袜av| 后天国语完整版免费观看| 亚洲综合色网址| 午夜福利视频精品| 日韩欧美一区视频在线观看| 午夜福利一区二区在线看| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 爱豆传媒免费全集在线观看| xxxhd国产人妻xxx| 一本综合久久免费| 国产亚洲一区二区精品| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲视频免费观看视频| 国产三级黄色录像| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产片内射在线| 91九色精品人成在线观看| 亚洲欧美激情在线| 丁香六月天网| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 天天添夜夜摸| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产精品亚洲av一区麻豆| 成人影院久久| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久热这里只有精品99| 成人亚洲精品一区在线观看| 最新的欧美精品一区二区| 两人在一起打扑克的视频| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 婷婷色av中文字幕| 国产真人三级小视频在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 99精品久久久久人妻精品| 国产高清国产精品国产三级| 丰满少妇做爰视频| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产精品一区二区在线不卡| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 丝袜喷水一区| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲国产欧美网| 国产精品免费视频内射| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久久欧美国产精品| 亚洲一码二码三码区别大吗| 波多野结衣一区麻豆| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 一本久久精品| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产野战对白在线观看| 国产精品九九99| 亚洲av国产av综合av卡| 一级片'在线观看视频| 真人做人爱边吃奶动态| 久久人人爽人人片av| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久性视频一级片| 国产亚洲欧美精品永久| netflix在线观看网站| 久久久久久久大尺度免费视频| 精品乱码久久久久久99久播| 久久精品国产亚洲av高清一级| 成年人黄色毛片网站| 两个人看的免费小视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 精品人妻一区二区三区麻豆| 一个人免费在线观看的高清视频 | 日韩大片免费观看网站| 精品高清国产在线一区| 99热全是精品| 久久久精品免费免费高清| 天堂中文最新版在线下载| 日韩有码中文字幕| 午夜免费鲁丝| 激情视频va一区二区三区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 99国产综合亚洲精品| bbb黄色大片| 窝窝影院91人妻| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 精品视频人人做人人爽| 日本a在线网址| 黄色片一级片一级黄色片| 国产精品偷伦视频观看了| 女警被强在线播放| 国产成人av激情在线播放| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲精品自拍成人| 桃花免费在线播放| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 在线观看www视频免费| 久久av网站| 一区二区三区精品91| svipshipincom国产片| 国产精品久久久久久精品电影小说| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲av美国av| 免费人妻精品一区二区三区视频| 精品一区在线观看国产| 亚洲熟女毛片儿| 国产av一区二区精品久久| 国产成人精品无人区| 国产区一区二久久| 一区二区三区四区激情视频| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产av一区二区精品久久| 精品久久久精品久久久| 色婷婷久久久亚洲欧美| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 十八禁网站网址无遮挡| 亚洲一区二区三区欧美精品| 一级片'在线观看视频| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲精品一区蜜桃| 视频区欧美日本亚洲| 国产成人av教育| 午夜91福利影院| 欧美+亚洲+日韩+国产| 大香蕉久久网| 成人黄色视频免费在线看| 高清在线国产一区| 欧美人与性动交α欧美软件| av在线app专区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产男女内射视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 精品一区二区三卡| 天天操日日干夜夜撸| 男女高潮啪啪啪动态图| 久久人人爽人人片av| 精品一品国产午夜福利视频| 中文字幕人妻丝袜制服| 久久久久视频综合| 国产精品熟女久久久久浪| 在线观看一区二区三区激情| 99国产综合亚洲精品| 老司机午夜福利在线观看视频 | 精品久久久久久电影网| 丝袜美足系列| 亚洲少妇的诱惑av| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲成国产人片在线观看| 老司机亚洲免费影院| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 一级片免费观看大全| 欧美精品av麻豆av| 国产成人欧美| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 免费观看a级毛片全部| 亚洲精品国产色婷婷电影| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久av网站| 香蕉国产在线看| 亚洲精品av麻豆狂野| 97在线人人人人妻| 久久精品国产亚洲av高清一级| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 国产一级毛片在线| 午夜福利,免费看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久久精品94久久精品| 国产精品一区二区精品视频观看| 美女中出高潮动态图| a级毛片在线看网站| 欧美另类亚洲清纯唯美| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产野战对白在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 91麻豆av在线| 女性被躁到高潮视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 欧美xxⅹ黑人| 久久久久视频综合| 欧美性长视频在线观看| 精品人妻1区二区| 成在线人永久免费视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 欧美大码av| 性色av一级| 在线精品无人区一区二区三| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 一级毛片女人18水好多| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产免费av片在线观看野外av| 狠狠狠狠99中文字幕| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 在线 av 中文字幕| 男女无遮挡免费网站观看| 中亚洲国语对白在线视频| 欧美精品av麻豆av| 午夜两性在线视频| 十八禁网站网址无遮挡| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲精品第二区| 国产精品二区激情视频| 亚洲人成电影观看| 91大片在线观看| 老司机靠b影院| 亚洲中文av在线| 99精品久久久久人妻精品| 国产成人a∨麻豆精品| 国产在线一区二区三区精| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 色综合欧美亚洲国产小说| a级毛片黄视频| 欧美午夜高清在线| 在线观看一区二区三区| 亚洲成人国产一区在线观看| 十八禁人妻一区二区| 久久久久久久久免费视频了| 老汉色∧v一级毛片| 长腿黑丝高跟| 99久久精品国产亚洲精品| 日韩欧美三级三区| 久久精品91无色码中文字幕| 高潮久久久久久久久久久不卡| 不卡一级毛片| 国产精品,欧美在线| 给我免费播放毛片高清在线观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 午夜福利在线在线| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲avbb在线观看| 在线a可以看的网站| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲欧美激情综合另类| 特级一级黄色大片| 一区福利在线观看| 亚洲五月婷婷丁香| 成人精品一区二区免费| 精品久久久久久,| 又大又爽又粗| 91老司机精品| 国产三级黄色录像| 日韩大码丰满熟妇| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲国产看品久久| 久99久视频精品免费| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产一区二区激情短视频| 成人三级做爰电影| 最好的美女福利视频网| 一级片免费观看大全| 久久久久久久久中文| 午夜福利欧美成人| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 久热爱精品视频在线9| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 在线a可以看的网站| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 午夜久久久久精精品| 国产男靠女视频免费网站| 成年人黄色毛片网站| www日本在线高清视频| 国产午夜精品久久久久久| 国产激情久久老熟女| 成人国产一区最新在线观看| 中国美女看黄片| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 九色成人免费人妻av| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久久久久久精品吃奶| 精品高清国产在线一区| 国产高清激情床上av| 亚洲欧美激情综合另类| 色哟哟哟哟哟哟| 久久亚洲真实| 久久精品国产综合久久久| 免费电影在线观看免费观看| 女人被狂操c到高潮| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲精华国产精华精| 欧美高清成人免费视频www| 1024香蕉在线观看| 欧美一级毛片孕妇| 麻豆久久精品国产亚洲av| 夜夜爽天天搞| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 伦理电影免费视频| 亚洲成人精品中文字幕电影| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 欧美不卡视频在线免费观看 | 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| av国产免费在线观看| 久久久久性生活片| 色哟哟哟哟哟哟| 1024视频免费在线观看| 不卡av一区二区三区| 亚洲熟妇熟女久久| 精品久久久久久久久久久久久| 精品久久久久久,| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲精品在线美女| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 欧美性猛交黑人性爽| 国产精品一区二区免费欧美| 99re在线观看精品视频| 免费在线观看亚洲国产| 欧美一区二区精品小视频在线| 俺也久久电影网| 欧美激情久久久久久爽电影| 精品国产乱码久久久久久男人| 看黄色毛片网站| 亚洲熟妇熟女久久| 精品一区二区三区av网在线观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 精品日产1卡2卡| av天堂在线播放| 99精品久久久久人妻精品| 熟女电影av网| 欧美黑人巨大hd| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久久中文字幕一级| 精品高清国产在线一区| 床上黄色一级片| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 宅男免费午夜| 日本在线视频免费播放| 亚洲国产精品sss在线观看| 99久久国产精品久久久| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 成年人黄色毛片网站| 欧美三级亚洲精品| 十八禁人妻一区二区| 亚洲色图av天堂| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 极品教师在线免费播放| 中文字幕久久专区| 亚洲18禁久久av| 制服人妻中文乱码| 国产av一区二区精品久久| 欧美中文综合在线视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 成人亚洲精品av一区二区| 精品久久久久久,| 欧美色欧美亚洲另类二区| 波多野结衣高清无吗| 国产日本99.免费观看| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 久久午夜亚洲精品久久| 午夜两性在线视频| a在线观看视频网站| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 免费搜索国产男女视频| 757午夜福利合集在线观看| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲午夜理论影院| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 香蕉av资源在线| www.熟女人妻精品国产| 窝窝影院91人妻| 色综合亚洲欧美另类图片| √禁漫天堂资源中文www| 国产一区二区在线观看日韩 | 欧美激情久久久久久爽电影| 国产黄色小视频在线观看| 欧美乱色亚洲激情| 久久中文字幕人妻熟女| 搡老熟女国产l中国老女人| 香蕉丝袜av| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲无线在线观看| 国产1区2区3区精品| 午夜福利免费观看在线| 99国产精品99久久久久| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 黄色视频不卡| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲人成77777在线视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 一个人免费在线观看的高清视频| 在线观看舔阴道视频| 午夜亚洲福利在线播放| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 99国产精品一区二区蜜桃av| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲午夜理论影院| 久久中文字幕人妻熟女| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产精品99久久99久久久不卡| 1024视频免费在线观看| 亚洲中文字幕日韩| tocl精华| ponron亚洲| 午夜老司机福利片| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲成a人片在线一区二区| 少妇人妻一区二区三区视频| 校园春色视频在线观看| 两个人免费观看高清视频| 国产av一区在线观看免费| 亚洲男人天堂网一区| 免费观看精品视频网站| 亚洲av电影在线进入| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 久久久水蜜桃国产精品网| 成人欧美大片| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲专区字幕在线| av视频在线观看入口| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 精品久久久久久久末码| 身体一侧抽搐| 美女 人体艺术 gogo| 精华霜和精华液先用哪个| 正在播放国产对白刺激| 久久久久久久久久黄片| 国产精品电影一区二区三区| 嫩草影院精品99| 超碰成人久久| 日本 欧美在线| 老汉色∧v一级毛片|