不同產(chǎn)地枸杞多糖含量的比較研究

陳麗麗+++張忠山

[摘要] 目的 比較不同產(chǎn)地枸杞多糖的含量。方法 采用熱水浸提法分別提取寧夏、浙江和四川產(chǎn)枸杞中的多糖成分，苯酚-硫酸法測(cè)定枸杞多糖含量。結(jié)果 浙江產(chǎn)枸杞多糖含量0.830%，寧夏產(chǎn)枸杞多糖含量0.769%，四川產(chǎn)枸杞多糖含量0.590%。 結(jié)論 不同產(chǎn)地枸杞多糖含量不同，可能與環(huán)境、采摘時(shí)間及加工過程等有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 枸杞多糖；不同產(chǎn)地；熱水浸提法；苯酚-硫酸法

[中圖分類號(hào)] R917 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2014）26-0071-03

枸杞（Lycium chinense Mill）是雙子葉植物綱茄目枸杞屬植物，藥用部位為其成熟果實(shí)枸杞子。抗旱能力很強(qiáng)，其漿果枸杞子在《神農(nóng)本草經(jīng)》中引為上品，是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥材。枸杞作為藥食同源類植物，具有補(bǔ)腎養(yǎng)肝、清熱涼血及益精明目等功效[1]。它既含有碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂肪、胡蘿卜素、核黃素、鈣、磷、鐵、鋅，還含有多種維生素及玉蜀黍黃素，因而一直受到中外醫(yī)學(xué)與食療專家的高度重視。枸杞主產(chǎn)寧夏、河北、浙江、四川等省。枸杞多糖是從枸杞中提取而得的一種水溶性多糖，經(jīng)研究表明，枸杞多糖是枸杞子調(diào)節(jié)免疫、控制腫瘤生長(zhǎng)和細(xì)胞突變、延緩衰老等的主要活性成分，可改善老年人易疲勞、食欲不振和視力模糊等癥狀，并具有降血脂、抗脂肪肝、抗衰老等作用[2，3]，枸杞多糖對(duì)人體免疫功能低下所致的各種疾病有顯著的療效，已成為保健食品的一種重要功能性添加劑，而且顯示出良好的應(yīng)用前景。但有關(guān)不同產(chǎn)地枸杞多糖含量比較方面的研究不多。本實(shí)驗(yàn)選取具有地域代表性的寧夏枸杞、浙江枸杞和四川枸杞，采用熱水浸提法分別對(duì)枸杞多糖進(jìn)行提取，并采用苯酚-硫酸法對(duì)枸杞多糖的含量進(jìn)行測(cè)定。比較三種不同產(chǎn)地的枸杞中多糖含量的差異，為進(jìn)一步開發(fā)枸杞資源及探討其藥用價(jià)值奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1儀器

DK-S22型電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海申勝生物技術(shù)有限公司）；SC-101型鼓風(fēng)電熱恒溫干燥箱（浙江省嘉興市新滕電器廠制造）；BP-Ⅱ型藥物天平（上海醫(yī)用激光儀器廠）；Spectrumlab 22PC可見分光光度計(jì)（上海楞光技術(shù)有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）。

1.2試劑

無水葡萄糖（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；硫酸（天津化學(xué)試劑有限公司）；無水乙醇（天津化學(xué)試劑有限公司）；枸杞（寧夏、浙江和四川）經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)資源與鑒定教研室陳孔榮老師鑒定為枸杞Lycium chinense Mill。

2 方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1供試品溶液的制備[4-6] 分別取不同產(chǎn)地的陰干的枸杞各20 g，剪碎，精密稱取5 g，加80%乙醇適量，加熱回流提取2次，每次2 h，回收乙醇，藥渣加蒸餾水100 mL，95℃水浴提取3次，每次2 h，合并濾液，濃縮至10 mL，加無水乙醇至溶液乙醇體積分?jǐn)?shù)80%，放置24 h。過濾取沉淀，并離心濾液，取沉淀；合并沉淀，置25 mL容量瓶，加蒸餾水至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.1.2對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品50 mg，置500 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，即得濃度為0.1 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2 最大吸收波長(zhǎng)的確定

精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各1.0 mL，置試管中，補(bǔ)蒸餾水至2 mL，加入1 mL 5 %苯酚溶液，搖勻，迅速加入濃硫酸5 mL，混勻，室溫靜置30 min待其冷卻，以蒸餾水同行試劑空白，在400～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)對(duì)照品和供試品溶液分別進(jìn)行掃描，結(jié)果表明兩者均在490 nm處有最大吸收，故確定490 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制[7-9]

分別精密移取對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置15 mL比色管中，按“2.2”項(xiàng)下方法操作，在490 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度C（mg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y=7.4486X+0.0122，R2=0.9993。表明葡萄糖在（0～0.1） mg/mL濃度范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液1 mL，置于15 mL比色管中，其余操作按“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行，測(cè)定吸光度，平行測(cè)定6次，結(jié)果RSD為1.94%，表明儀器的精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取浙江產(chǎn)枸杞適量，按“2.1.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取1 mL置15 mL比色管中，其余操作按“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行。分別于10、20、30、40、50、60 min后測(cè)定吸光度，結(jié)果RSD為0.16 %，表明枸杞多糖1 h內(nèi)吸光度穩(wěn)定，故含量測(cè)定應(yīng)在顯色后1 h內(nèi)完成。

2.6 加樣回收試驗(yàn)

取已知多糖含量的供試品溶液6份，分別加入適量的葡萄糖對(duì)照品溶液，定容于25 mL容量瓶中，精密移取1 mL置15 mL比色管中，其余操作按“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行，測(cè)定吸光度，計(jì)算加樣回收率，得回收率平均值為99.98%，RSD為4.14%。

2.7多糖的含量測(cè)定[10，11]

分別精密移取三個(gè)產(chǎn)地溶液各1.0 mL，蒸餾水定容于25 mL容量瓶，搖勻后各取1 mL，置于15 mL比色管中，其余操作按“2.2”項(xiàng)中方法進(jìn)行，并在490 nm波長(zhǎng)處于分光光度計(jì)上測(cè)定吸光度，由回歸方程計(jì)算多糖含量。

3討論

枸杞多糖是一種易溶于熱水、稀酸和稀堿溶液并能被乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑析出的蛋白多糖，其提取的方法有熱水浸提、酸浸提和堿浸提等[12]，但酸性或堿性條件易引起糖苷鍵斷裂，因此，大多采用熱水浸提法。水是強(qiáng)極性溶劑，對(duì)植物組織的穿透力強(qiáng)，提取效率高，在生產(chǎn)上使用安全，且此方法提取設(shè)備簡(jiǎn)單、成本低、易操作。endprint

枸杞多糖因其強(qiáng)大的功能活性備受國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注，其提取技術(shù)已成為中醫(yī)藥、保健食品等領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。枸杞多糖的提取也由傳統(tǒng)的提取技術(shù)發(fā)展為超聲波、微波、生物酶、發(fā)酵等輔助提取技術(shù)，但各自仍存在一些問題。此外，枸杞多糖的提取新技術(shù)主要停留在實(shí)驗(yàn)室研究階段，尚需加大研究力度擴(kuò)大規(guī)模到工業(yè)化生產(chǎn)。隨著問題的提出與新技術(shù)的不斷成熟以及多學(xué)科的交叉發(fā)展，相信枸杞多糖的提取技術(shù)必將取得長(zhǎng)足的發(fā)展。

苯酚-硫酸法是測(cè)定多糖的常用方法，利用多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物，再以比色法測(cè)定。此方法簡(jiǎn)單、靈敏度高，重復(fù)性好，實(shí)驗(yàn)時(shí)基本不受蛋白質(zhì)存在的影響，并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定時(shí)間長(zhǎng)。但影響該法顯色的因素較多，對(duì)不同多糖物質(zhì)，其最佳顯色條件不同。苯酚-硫酸法測(cè)定結(jié)果更為準(zhǔn)確合理，可考慮作為枸杞子中多糖含量測(cè)定的首選方法。

現(xiàn)代藥理研究表明，枸杞多糖是枸杞的主要有效成分之一，因此通過枸杞多糖含量檢測(cè)可以對(duì)枸杞質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，藥用植物有效成分的形成、轉(zhuǎn)化與積累，受著環(huán)境條件的影響。不同產(chǎn)地枸杞中所含多糖含量略有差異，其中浙江枸杞多糖含量為0.830%，寧夏枸杞多糖含量為0.769%，四川枸杞多糖含量為0.590%。其原因可能與收獲時(shí)間、干燥方法、貯藏方法、溫度、光照、地理?xiàng)l件、土壤條件、濕度、地貌、水質(zhì)等[10]有關(guān)。環(huán)境是藥用植物生長(zhǎng)發(fā)育和產(chǎn)品質(zhì)量形成的物質(zhì)能量基礎(chǔ)，研究環(huán)境與藥用植物生產(chǎn)的關(guān)系，是調(diào)整藥用植物生產(chǎn)、控制生藥質(zhì)量的理論基礎(chǔ)。浙江枸杞的多糖含量最高，高于藥典收載的寧夏枸杞多糖含量，從而顯示浙江枸杞有較高的藥用價(jià)值，但其是否優(yōu)于寧夏枸杞還有待進(jìn)一步研究。另一方面，藥用植物體內(nèi)有效成分的形成和積累，是植物代謝過程的結(jié)果，并與其生長(zhǎng)、發(fā)育有關(guān)。因此，中藥材采收季節(jié)是影響中藥材質(zhì)量的關(guān)鍵因素，如果不進(jìn)行適時(shí)的采收，勢(shì)必導(dǎo)致中藥材質(zhì)差效低。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 劉錫建，肖穩(wěn)發(fā)，曹儉，等. 枸杞多糖的研究進(jìn)展[J]. 上海工程技術(shù)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，22（4）：299-302.

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[12] 李新虎. 土壤地球化學(xué)環(huán)境對(duì)寧夏枸杞品質(zhì)的制約影響研究[D]. 中國(guó)地質(zhì)大學(xué)，2007.

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枸杞多糖因其強(qiáng)大的功能活性備受國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注，其提取技術(shù)已成為中醫(yī)藥、保健食品等領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。枸杞多糖的提取也由傳統(tǒng)的提取技術(shù)發(fā)展為超聲波、微波、生物酶、發(fā)酵等輔助提取技術(shù)，但各自仍存在一些問題。此外，枸杞多糖的提取新技術(shù)主要停留在實(shí)驗(yàn)室研究階段，尚需加大研究力度擴(kuò)大規(guī)模到工業(yè)化生產(chǎn)。隨著問題的提出與新技術(shù)的不斷成熟以及多學(xué)科的交叉發(fā)展，相信枸杞多糖的提取技術(shù)必將取得長(zhǎng)足的發(fā)展。

苯酚-硫酸法是測(cè)定多糖的常用方法，利用多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物，再以比色法測(cè)定。此方法簡(jiǎn)單、靈敏度高，重復(fù)性好，實(shí)驗(yàn)時(shí)基本不受蛋白質(zhì)存在的影響，并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定時(shí)間長(zhǎng)。但影響該法顯色的因素較多，對(duì)不同多糖物質(zhì)，其最佳顯色條件不同。苯酚-硫酸法測(cè)定結(jié)果更為準(zhǔn)確合理，可考慮作為枸杞子中多糖含量測(cè)定的首選方法。

現(xiàn)代藥理研究表明，枸杞多糖是枸杞的主要有效成分之一，因此通過枸杞多糖含量檢測(cè)可以對(duì)枸杞質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，藥用植物有效成分的形成、轉(zhuǎn)化與積累，受著環(huán)境條件的影響。不同產(chǎn)地枸杞中所含多糖含量略有差異，其中浙江枸杞多糖含量為0.830%，寧夏枸杞多糖含量為0.769%，四川枸杞多糖含量為0.590%。其原因可能與收獲時(shí)間、干燥方法、貯藏方法、溫度、光照、地理?xiàng)l件、土壤條件、濕度、地貌、水質(zhì)等[10]有關(guān)。環(huán)境是藥用植物生長(zhǎng)發(fā)育和產(chǎn)品質(zhì)量形成的物質(zhì)能量基礎(chǔ)，研究環(huán)境與藥用植物生產(chǎn)的關(guān)系，是調(diào)整藥用植物生產(chǎn)、控制生藥質(zhì)量的理論基礎(chǔ)。浙江枸杞的多糖含量最高，高于藥典收載的寧夏枸杞多糖含量，從而顯示浙江枸杞有較高的藥用價(jià)值，但其是否優(yōu)于寧夏枸杞還有待進(jìn)一步研究。另一方面，藥用植物體內(nèi)有效成分的形成和積累，是植物代謝過程的結(jié)果，并與其生長(zhǎng)、發(fā)育有關(guān)。因此，中藥材采收季節(jié)是影響中藥材質(zhì)量的關(guān)鍵因素，如果不進(jìn)行適時(shí)的采收，勢(shì)必導(dǎo)致中藥材質(zhì)差效低。

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[12] 李新虎. 土壤地球化學(xué)環(huán)境對(duì)寧夏枸杞品質(zhì)的制約影響研究[D]. 中國(guó)地質(zhì)大學(xué)，2007.

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枸杞多糖因其強(qiáng)大的功能活性備受國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注，其提取技術(shù)已成為中醫(yī)藥、保健食品等領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。枸杞多糖的提取也由傳統(tǒng)的提取技術(shù)發(fā)展為超聲波、微波、生物酶、發(fā)酵等輔助提取技術(shù)，但各自仍存在一些問題。此外，枸杞多糖的提取新技術(shù)主要停留在實(shí)驗(yàn)室研究階段，尚需加大研究力度擴(kuò)大規(guī)模到工業(yè)化生產(chǎn)。隨著問題的提出與新技術(shù)的不斷成熟以及多學(xué)科的交叉發(fā)展，相信枸杞多糖的提取技術(shù)必將取得長(zhǎng)足的發(fā)展。

苯酚-硫酸法是測(cè)定多糖的常用方法，利用多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物，再以比色法測(cè)定。此方法簡(jiǎn)單、靈敏度高，重復(fù)性好，實(shí)驗(yàn)時(shí)基本不受蛋白質(zhì)存在的影響，并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定時(shí)間長(zhǎng)。但影響該法顯色的因素較多，對(duì)不同多糖物質(zhì)，其最佳顯色條件不同。苯酚-硫酸法測(cè)定結(jié)果更為準(zhǔn)確合理，可考慮作為枸杞子中多糖含量測(cè)定的首選方法。

現(xiàn)代藥理研究表明，枸杞多糖是枸杞的主要有效成分之一，因此通過枸杞多糖含量檢測(cè)可以對(duì)枸杞質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，藥用植物有效成分的形成、轉(zhuǎn)化與積累，受著環(huán)境條件的影響。不同產(chǎn)地枸杞中所含多糖含量略有差異，其中浙江枸杞多糖含量為0.830%，寧夏枸杞多糖含量為0.769%，四川枸杞多糖含量為0.590%。其原因可能與收獲時(shí)間、干燥方法、貯藏方法、溫度、光照、地理?xiàng)l件、土壤條件、濕度、地貌、水質(zhì)等[10]有關(guān)。環(huán)境是藥用植物生長(zhǎng)發(fā)育和產(chǎn)品質(zhì)量形成的物質(zhì)能量基礎(chǔ)，研究環(huán)境與藥用植物生產(chǎn)的關(guān)系，是調(diào)整藥用植物生產(chǎn)、控制生藥質(zhì)量的理論基礎(chǔ)。浙江枸杞的多糖含量最高，高于藥典收載的寧夏枸杞多糖含量，從而顯示浙江枸杞有較高的藥用價(jià)值，但其是否優(yōu)于寧夏枸杞還有待進(jìn)一步研究。另一方面，藥用植物體內(nèi)有效成分的形成和積累，是植物代謝過程的結(jié)果，并與其生長(zhǎng)、發(fā)育有關(guān)。因此，中藥材采收季節(jié)是影響中藥材質(zhì)量的關(guān)鍵因素，如果不進(jìn)行適時(shí)的采收，勢(shì)必導(dǎo)致中藥材質(zhì)差效低。

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