3種冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)體表結(jié)構(gòu)的掃描電鏡觀察

卜艷珍+王美心+趙鵬飛+張路平

摘要：首次應(yīng)用掃描電鏡技術(shù)對(duì)冠狀冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)（Coronocyclus coronatus）、大唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)（C. labiatus）和小唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)（C. labratus）的體表結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行觀察和比較。結(jié)果表明，3種線(xiàn)蟲(chóng)的形態(tài)特征存在明顯差異。冠狀冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)外葉冠由22個(gè)小葉組成；4個(gè)亞中乳突起自口領(lǐng)基部，向口領(lǐng)頂部延伸呈隆起狀；雄蟲(chóng)生殖錐背唇上有1對(duì)卵圓形結(jié)構(gòu)的附屬物，中部相融合，上面分布著許多剛毛狀突起；雌蟲(chóng)尾部直。大唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)外葉冠小葉19個(gè)；口領(lǐng)內(nèi)上緣在背腹面和側(cè)面向內(nèi)延伸形成4個(gè)大的唇形結(jié)構(gòu)，每個(gè)唇片的基部中央伸出1個(gè)亞中乳突；雄蟲(chóng)生殖錐背唇上約分布著10個(gè)大小不等的圓錐形附屬物；雌蟲(chóng)尾部稍彎向背側(cè)。小唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)外葉冠小葉18個(gè)；口領(lǐng)內(nèi)上緣在背腹面和側(cè)面向內(nèi)延伸形成4個(gè)小的唇形結(jié)構(gòu)，每個(gè)唇片的基部中央伸出1個(gè)亞中乳突；雄蟲(chóng)生殖錐背唇上有1個(gè)兩端呈卵圓的月牙形附屬物；雌蟲(chóng)尾部直。

關(guān)鍵詞：冠狀冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)；大唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)；小唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)；體表結(jié)構(gòu)；掃描電鏡

中圖分類(lèi)號(hào)：Q959.17；S432.4+5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2014）08-0214-04

冠環(huán)屬（Coronocyclus）線(xiàn)蟲(chóng)隸屬于圓線(xiàn)目（Strongylida）圓線(xiàn)科（Strongylidae）盅口亞科（Cyathostominae），是馬屬動(dòng)物腸道內(nèi)感染率較高的寄生圓線(xiàn)蟲(chóng)，往往造成宿主消瘦、貧血甚至死亡^[1-5]。1986年，德國(guó)學(xué)者Hartwich對(duì)盅口族（Cyathostominea）線(xiàn)蟲(chóng)進(jìn)行了分類(lèi)修訂，根據(jù)角質(zhì)支環(huán)與口囊壁前端完全分開(kāi)這一特征建立了一個(gè)新屬——冠環(huán)屬（Coronocyclus），并將盅口屬（Cyathostomum）的4個(gè)種移入該屬，即冠狀冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)（C. coronatus）、大唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)（C. labiatus）、小唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)（C. labratus）和箭狀冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)（C. sagittatus）^[6]。隨后，Dvojnos等又發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新種，命名為尤氏冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)（C. ulambajari）^[7]。近幾年來(lái)，筆者對(duì)河南省驢腸道寄生線(xiàn)蟲(chóng)的感染情況進(jìn)行了調(diào)查，僅采集到冠狀冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)、大唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)和小唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)3種冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)。盡管?chē)?guó)內(nèi)外學(xué)者在光鏡下已經(jīng)對(duì)這3種線(xiàn)蟲(chóng)作了詳細(xì)的描述^[8-10]，但是尚未見(jiàn)掃描電鏡的相關(guān)報(bào)道。由于掃描電鏡技術(shù)可以更直觀、更清晰地觀察到線(xiàn)蟲(chóng)的體表結(jié)構(gòu)特征，因此被廣泛應(yīng)用于線(xiàn)蟲(chóng)的分類(lèi)鑒定^[11-14]。本研究首次應(yīng)用掃描電鏡技術(shù)對(duì)冠環(huán)屬3種線(xiàn)蟲(chóng)的體表特征進(jìn)行觀察和比較，不僅可以為線(xiàn)蟲(chóng)的分類(lèi)鑒定提供更多、更具體的形態(tài)學(xué)依據(jù)，同時(shí)還可以為馬屬動(dòng)物線(xiàn)蟲(chóng)病的診斷和防治提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

采自河南省驢腸道內(nèi)的線(xiàn)蟲(chóng)標(biāo)本經(jīng)過(guò)處理后，固定保存于70%乙醇中。固定標(biāo)本先用乳酸苯酚溶液（2份甘油、1份苯酚飽和溶液、1份乳酸、1份水）透明，然后在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)學(xué)初步鑒定，種類(lèi)鑒定主要采用張路平等提出的分類(lèi)系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)[8-9，15]。標(biāo)本保存于河南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院。

挑選冠環(huán)屬3種線(xiàn)蟲(chóng)雌雄蟲(chóng)體各5頭，用于掃描電鏡觀察。先用0.1 mol/L磷酸緩沖液（pH值 7.2）充分漂洗干凈，再用2.5%戊二醛固定3 h，經(jīng)磷酸緩沖液漂洗后，放入1%鋨酸固定1.5 h，再經(jīng)磷酸緩沖液漂洗，各級(jí)乙醇梯度脫水，醋酸異戊酯置換，CO2臨界點(diǎn)干燥，噴金鍍膜后，在S-570掃描電鏡下觀察和拍照（工作電壓15 kV）。

2 結(jié)果與分析

2.1 冠狀冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)

口領(lǐng)顯著，頭部頂面觀呈圓形。4個(gè)亞中乳突起自口領(lǐng)基部向頂部延伸呈隆起狀，到達(dá)口領(lǐng)頂部后，突出口領(lǐng)之上呈子彈形（圖1-1、圖1-2、圖1-3），乳突長(zhǎng)9.7～11.8 μm（10.9 μm）。口領(lǐng)頂端兩側(cè)各有1個(gè)頭感器，頭感器小，稍微隆起，中間有一裂縫（圖1-4）。口孔較大，近似圓形，直徑為39.4～41.3 μm（40.2 μm）?？诳字?chē)h(huán)繞著1圈外葉冠，由22個(gè)小葉組成，小葉長(zhǎng)18.3～26.1 μm（22.5 μm），基部寬3.4～4.6 μm（4.1 μm），小葉末端鈍圓，有的伸向口孔，有的向外翻卷。外葉冠的起始部位低于口領(lǐng)表面（圖1-2、圖1-3）。

雄蟲(chóng)（n=5）：體長(zhǎng)7.45～8.51 mm（7.92 mm），最大體寬341.3～392.5 μm（370.2 μm）。尾部具有發(fā)達(dá)的交合傘，由1個(gè)較長(zhǎng)的背葉和2個(gè)卵圓形的側(cè)葉組成，背葉和側(cè)葉分界明顯（圖1-5、圖1-6）。生殖錐短，由腹唇和背唇組成，兩唇之間的橫裂即為泄殖孔。背唇上有1對(duì)卵圓形結(jié)構(gòu)的附屬物，中部相融合，上面分布著許多剛毛狀突起（圖1-7）。

雌蟲(chóng)（n=5）：體長(zhǎng)8.90～10.09 mm（10.01 mm），最大體寬372.4～453.2 μm（411.7 μm）。尾部直，尾尖呈指形。陰門(mén)卵圓形，靠近肛門(mén)。肛門(mén)橫裂，呈月牙形（圖1-8、圖1-9）。陰門(mén)距肛門(mén)110.2～120.4 μm（116.3 μm），肛門(mén)距尾端174.2～194.1 μm（183.5 μm）。

2.2 大唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)

口領(lǐng)顯著， 頭部頂面觀呈圓形?？陬I(lǐng)內(nèi)上緣在背腹面和側(cè)面向內(nèi)延伸形成4個(gè)大的唇形結(jié)構(gòu)，每個(gè)唇片的基部中央伸出1個(gè)亞中乳突，亞中乳突的大部分與唇片結(jié)合在一起，只有頂部游離在唇片的外面（圖2-1、圖2-2、圖2-3），乳突長(zhǎng)6.1～7.2 μm（6.8 μm）?？陬I(lǐng)頂端兩側(cè)各有1個(gè)頭感器，頭感器小，稍微隆起，中間有一裂縫（圖2-3）?？诳纵^大，近似圓形，直徑41.5～46.8 μm（44.3 μm）?？诳字?chē)h(huán)繞著1外葉冠，由19個(gè)小葉組成，小葉長(zhǎng)26.7～29.3 μm（27.4 μm），基部寬4.2～5.3 μm（4.7 μm），小葉末端鈍圓，向外翻卷。外葉冠的起始部位低于口領(lǐng)的表面（圖2-3、圖2-4）。endprint

雄蟲(chóng)（n=5）：體長(zhǎng)7.65～8.19 mm（7.94 mm），最大體寬312.6～428.3 μm（364.7 μm）。尾部具有發(fā)達(dá)的交合傘，背葉較寬闊，稍長(zhǎng)于側(cè)葉，背葉和側(cè)葉分界不明顯（圖2-5、圖2-6）。生殖錐短，卵圓形，由腹唇和背唇組成，兩唇之間的橫裂即為泄殖孔。背唇上分布著約10個(gè)大小不等的圓錐形附屬物（圖2-7）。

雌蟲(chóng)（n=5）：體長(zhǎng)9.76～11.23 mm（10.54 mm），最大體寬413.6～542.3 μm（486.7 μm）。尾部粗壯，稍彎向背側(cè)，尾尖呈指形。陰門(mén)卵圓形，靠近肛門(mén)。肛門(mén)橫裂，呈月牙形（圖2-8、圖2-9）。陰門(mén)距肛門(mén)105.3～116.4 μm（112.1 μm），肛門(mén)距尾端131.7～162.5 μm（143.9 μm）。

2.3 小唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)

口領(lǐng)顯著，頭部頂面觀呈圓形。口領(lǐng)內(nèi)上緣在背腹面和側(cè)面向內(nèi)延伸形成4個(gè)小的唇形結(jié)構(gòu)，每個(gè)唇片的基部中央伸出1個(gè)亞中乳突，亞中乳突僅基部與唇片結(jié)合在一起，其他大部分游離在唇片的外面（圖3-1、圖3-2、圖3-3），乳突長(zhǎng)5.9～6.8 μm（6.3 μm）?？陬I(lǐng)頂端兩側(cè)各有1個(gè)頭感器，頭感器小，稍微隆起，中間有一裂縫（圖3-2）。口孔稍小，近似圓形，直徑為32.6～35.5 μm（34.7 μm）。口孔周?chē)h(huán)繞著1圈外葉冠，由18個(gè)小葉組成，小葉長(zhǎng)11.4～19.6 μm（16.3 μm），基部寬2.4～4.3 μm（3.5 μm），小葉末端鈍圓，有的伸向口孔，有的向外翻卷。外葉冠的起始部位低于口領(lǐng)表面（圖3-1、圖3-2）。

雄蟲(chóng)（n=5）：體長(zhǎng)5.67～6.78 mm（6.54 mm），最大體寬238.4～297.1 μm（254.8 μm）。尾部具有發(fā)達(dá)的交合傘，由1個(gè)稍長(zhǎng)的背葉和2個(gè)卵圓形的側(cè)葉組成，背葉和側(cè)葉分界明顯（圖3-4、圖3-5）。生殖錐短小，由腹唇和背唇組成，兩唇之間的橫裂即為泄殖孔。背唇上有1個(gè)月牙狀的附屬物，兩端呈卵圓形（圖3-6、圖3-7）。

[CM（24]雌蟲(chóng)（n=5）：體長(zhǎng)6.96～7.92 mm（7.68 mm），最大體寬294.8～345.3 μm（328.2 μm）。尾部直，尾尖呈指形。陰門(mén)卵圓形，靠近肛門(mén)。肛門(mén)橫裂，呈月牙形（圖3-8、圖3-9）。陰門(mén)距肛門(mén)64.2～87.1 μm（76.4 μm），肛門(mén)距尾端86.3～98.2 μm（92.5 μm）。

3 結(jié)論與討論

首次采用掃描電鏡對(duì)冠環(huán)屬3種線(xiàn)蟲(chóng)的體表結(jié)構(gòu)進(jìn)行了詳細(xì)的觀察和描述，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3種線(xiàn)蟲(chóng)外部形態(tài)特征具有明顯的差異：（1）冠狀冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)的外葉冠由22個(gè)小葉組成，小葉長(zhǎng)18.3～26.1 μm（22.5 μm），基部寬3.4～4.6 μm（4.1 μm）；大唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)外葉冠小葉為19個(gè)，小葉長(zhǎng) 26.7～29.3 μm（27.4 μm），基部寬4.2～5.3 μm（4.7 μm）；小唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)為18個(gè)小葉，小葉長(zhǎng)11.4～19.6 μm（16.3 μm），基部寬2.4～4.3 μm（3.5 μm）。外葉冠形態(tài)特征的差異是鑒定圓線(xiàn)蟲(chóng)種類(lèi)的重要依據(jù)之一，外葉冠的形狀和數(shù)量在光鏡下有時(shí)難以辨別，但在掃描電鏡下可以觀察得十分清楚。在以往的報(bào)道中，只是對(duì)外葉冠小葉的數(shù)量進(jìn)行了描述^[8-10]，而本研究提供了更多、更具體的形態(tài)特征。（2）冠狀冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)的4個(gè)亞中乳突起自口領(lǐng)基部，向口領(lǐng)頂部延伸呈隆起狀；大唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)口領(lǐng)內(nèi)上緣在背腹面和側(cè)面向內(nèi)延伸形成4個(gè)大的唇形結(jié)構(gòu)；小唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)口領(lǐng)內(nèi)上緣在背腹面和側(cè)面向內(nèi)延伸形成4個(gè)小的唇形結(jié)構(gòu)。從觀察結(jié)果來(lái)看，冠環(huán)屬3種線(xiàn)蟲(chóng)亞中乳突基部的形態(tài)特征明顯不同。大唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)和小唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)的頭部特征比較相似，只是大唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)的口領(lǐng)基部形成4個(gè)特別顯著的唇形隆起，而小唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)形成的唇形隆起小而低，與光鏡下的觀察結(jié)果^[8-10]一致。（3）冠狀冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)雄蟲(chóng)生殖錐背唇上有1對(duì)卵圓形結(jié)構(gòu)的附屬物，中部相融合，上面分布著許多剛毛狀突起；大唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)生殖錐背唇上約有10個(gè)大小不等的圓錐形附屬物；小唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)生殖錐上有1個(gè)兩端呈卵圓的月牙形附屬物。生殖錐一般包埋在雄蟲(chóng)交合傘下面，不易被觀察，而在掃描電鏡下，生殖錐的立體感較強(qiáng)，結(jié)構(gòu)非常清晰。本結(jié)果與Lichtenfels等的描述^[9]稍有不同。在Lichtenfels等的報(bào)道中，大唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)生殖錐上有2對(duì)圓錐形突起，而小唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)生殖錐上有1對(duì)梨形附屬物，中部相融合。筆者認(rèn)為產(chǎn)生這些差異的原因可能有2個(gè)：一是由于地理分布不同造成的種內(nèi)變異；二是由于在光鏡下生殖錐附屬物形態(tài)結(jié)構(gòu)不容易分辨，使得研究者的描述和看法不同。（4）冠狀冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)雌蟲(chóng)尾部直，尾長(zhǎng)174.2～194.1 μm（183.5 μm）；大唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)尾部粗壯，稍彎向背側(cè)，尾長(zhǎng)131.7～162.5 μm（143.9 μm）；小唇片冠環(huán)線(xiàn)蟲(chóng)尾部直，尾長(zhǎng)86.3～98.2 μm（92.5 μm）。3種線(xiàn)蟲(chóng)雌蟲(chóng)尾部形態(tài)與以往的報(bào)道^[8-10]基本一致。本研究結(jié)果進(jìn)一步證明，通過(guò)掃描電鏡能夠清晰、準(zhǔn)確地觀察到線(xiàn)蟲(chóng)的體表結(jié)構(gòu)特征，可以為線(xiàn)蟲(chóng)的分類(lèi)鑒定提供更多、更詳細(xì)的形態(tài)鑒別依據(jù)。

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