DREB轉(zhuǎn)錄因子及其在植物抗逆育種中的應(yīng)用進(jìn)展

2014-10-23 05:12:22牛偉博

江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年8期

牛偉博

摘要：DREB（干旱應(yīng)答元件結(jié)合蛋白）轉(zhuǎn)錄因子是AP2/EREBP的一個(gè)亞族。由于其過量表達(dá)能夠提高植物抗旱、耐鹽、耐低溫、抗凍甚至抵抗重金屬等逆境脅迫的能力，因此DREB轉(zhuǎn)錄因子基因被作為應(yīng)用基因工程途徑進(jìn)行植物抗逆性狀改良的理想候選基因。本文主要綜述了DREB轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)、功能以及近年來國(guó)內(nèi)外新的DREB轉(zhuǎn)錄因子基因的發(fā)現(xiàn)及其在培育抗逆性轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用，以期為植物抗逆分子育種改良提供參考。

關(guān)鍵詞：DREB；轉(zhuǎn)錄因子；逆境脅迫；轉(zhuǎn)基因植物

中圖分類號(hào)：Q943.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2014）08-0017-04

干旱、低溫、高鹽等非生物逆境脅迫是農(nóng)業(yè)、林業(yè)、草業(yè)生產(chǎn)中嚴(yán)重的自然災(zāi)害，世界每年因此造成巨大損失。這些非生物逆境脅迫能夠引起植物一系列的相關(guān)響應(yīng)，比如響應(yīng)不同脅迫導(dǎo)致一些轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)節(jié)相關(guān)下游基因的大量表達(dá)，通過操縱轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)去提高植物應(yīng)對(duì)逆境脅迫的能力^[1]。因此，為了解決糧食危機(jī)，改善生態(tài)環(huán)境，植物基因工程被廣泛應(yīng)用到農(nóng)作物以及森林樹木，實(shí)現(xiàn)了農(nóng)作物和林木的優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)，改良其經(jīng)濟(jì)性狀，加速優(yōu)良新品種的培育^[2-3]。

轉(zhuǎn)錄因子（transcription factor，TF），又稱反式作用因子，是一群能與真核基因啟動(dòng)子區(qū)域中的順式作用元件發(fā)生特異性結(jié)合，從而保證目的基因以特定的強(qiáng)度在特定的時(shí)間與空間表達(dá)的DNA結(jié)合蛋白質(zhì)。當(dāng)植物受到逆境脅迫時(shí)，細(xì)胞膜上具有各種不同信號(hào)的受體分子（其中包括感受水分、溫度、鹽度的受體分子），這些受體分子感知逆境信號(hào)后，使逆境信號(hào)沿著“膜蛋白受體-IP3（1，4，5-肌醇三磷酸）、Ca2+等第二信使分子-蛋白激酶-轉(zhuǎn)錄因子-抗逆基因”途徑在植物細(xì)胞內(nèi)逐級(jí)傳遞^[4]。與逆境相關(guān)、編碼產(chǎn)物參與信號(hào)傳遞途徑和基因表達(dá)調(diào)控過程的轉(zhuǎn)錄因子主要包括五個(gè)家族：MYB（v-myb avian myeloblastosis viral oncogene homolog）、bZIP（basic leucine zipper）、WRKY（因含有高度保守的核心氨基酸序列WRKYGQK而命名）、AP2/EREBP（APETALA2/ethylene-responsive element binding proteins）和NAC（因其N端為保守的大約150個(gè)氨基酸NAC結(jié)構(gòu)域命名）^[5]。其中，DREB（dehydration responsive element binding protein，干旱應(yīng)答元件結(jié)合蛋白）轉(zhuǎn)錄因子是AP2/EREBP的一個(gè)亞族，主要功能是調(diào)節(jié)植物對(duì)逆境脅迫等的應(yīng)答反應(yīng)。

DREB轉(zhuǎn)錄因子作為干旱、低溫、高鹽脅迫應(yīng)答的主要成分，可與下游基因啟動(dòng)子中的CRT/DRE（C-repeat/dehydration responsive element）順式作用元件相結(jié)合，調(diào)節(jié)一系列依賴該順式作用元件的抗逆功能基因的表達(dá)，進(jìn)而引起脯氨酸、可溶性糖、葉綠素等含量的提高，從而增強(qiáng)植物對(duì)于干旱、低溫以及高鹽等逆境的抗性^[2]。本文主要綜述DREB轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)、功能，以及近幾年來國(guó)內(nèi)外對(duì)DREB轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展，并對(duì)DREB轉(zhuǎn)錄因子在農(nóng)業(yè)、林業(yè)、草業(yè)培育抗逆轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用進(jìn)行概括。

1 DREB轉(zhuǎn)錄因子

1.1 DREB轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)

自1997年Stockinger^[6]首次從擬南芥cDNA文庫中分離到編碼DREB蛋白的CBF1基因以來，已經(jīng)從各種草本植物中克隆出大量的DREB類基因，近年來，又在木本植物相繼克隆出DREB類基因。目前從NCBI（National Center for Biotechnology Information）上可以檢索到的DREB基因的mRNA 共有368條。從蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析，DREB轉(zhuǎn)錄因子一般由4個(gè)獨(dú)立功能區(qū)域組成，包括：（1）DNA 結(jié)合域（DNA binding domain）；（2）轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)（transcription regulation domain）；（3）核定位信號(hào)區(qū)（nuclear localization signal，NLS）；（4）寡聚化位點(diǎn)（oligomerization domain）。

DREB轉(zhuǎn)錄因子家族中的AP2結(jié)構(gòu)域高度保守，而N端和C端的相似性比較低。AP2結(jié)構(gòu)域由60個(gè)氨基酸組成，有VRG和RAYD兩個(gè)保守區(qū)。VRG含有20個(gè)氨基酸，大多為堿性氨基酸，有助于和DNA的結(jié)合；RAYD由40個(gè)氨基酸組成，其可以通過影響VRG 區(qū)的構(gòu)象或通過與其他蛋白的相互作用來調(diào)節(jié)AP2結(jié)構(gòu)域與DNA 的結(jié)合。AP2結(jié)構(gòu)域的第14位為纈氨酸（Valine，V），第19位為谷氨酸（Glutamic，E），這兩個(gè)位點(diǎn)非常保守，是與DRE作用元件相互結(jié)合的關(guān)鍵位點(diǎn)^[7]。DREB轉(zhuǎn)錄因子的二級(jí)結(jié)構(gòu)具有典型的結(jié)構(gòu)特征：堿性氨基酸富集于N端，是核定為信號(hào)區(qū)；而酸性氨基酸富集于C端，為轉(zhuǎn)錄激活區(qū)。

1.2 DREB轉(zhuǎn)錄因子的功能

近年來通過對(duì)DREB類轉(zhuǎn)錄因子功能的深入研究，發(fā)現(xiàn)DREB在干旱脅迫等逆境環(huán)境下具有重要作用，同時(shí)一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子可以調(diào)控多個(gè)與抗逆性有關(guān)基因的表達(dá)，這相對(duì)于單純使用下游某種單一功能基因來改變植物的抗逆能力具有顯著的優(yōu)點(diǎn)。從表1可以看出，不同植物克隆到的DREB基因在逆境下的表達(dá)特性主要集中在抗旱、耐低溫、抗凍和耐鹽等方面，甚至還具有抗Na2CO3、NaHCO3以及重金屬^[8]（銅、鎘）等能力，表明DREB基因主要參與植物對(duì)逆境脅迫的應(yīng)答。

2 DREB轉(zhuǎn)錄因子在培育抗逆性轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用

與傳統(tǒng)的植物育種方法相比，基因工程技術(shù)具有時(shí)間短、效率高、提高植物抗逆性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)，DREB類轉(zhuǎn)錄因子在植物逆境脅迫中發(fā)揮著重要作用。DREB類轉(zhuǎn)錄因子基因的表達(dá)可以同時(shí)調(diào)控下游多個(gè)相關(guān)抗逆基因的表達(dá)，使植物抵抗逆境環(huán)境的綜合能力得到提高。自從擬南芥CBF1基因^[6]發(fā)現(xiàn)之后，大量的DREB基因首先從草本植物中被分離和鑒定，并且在草本植物抗逆性轉(zhuǎn)化中得到了普遍應(yīng)用。由于木本植物壽命長(zhǎng)、體型高大等特點(diǎn)，為了抵御外界不同自然環(huán)境的侵害，形成了比草本植物更為復(fù)雜的抗逆分子機(jī)制。但隨著近年來分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展，越來越多的DREB類轉(zhuǎn)錄因子基因同樣從木本植物中篩選出來并進(jìn)一步得到轉(zhuǎn)化植株。

2.1 DREB轉(zhuǎn)錄因子基因在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用

在農(nóng)作物中發(fā)現(xiàn)的DREB類轉(zhuǎn)錄因子基因很多，謝登雷等^[25]利用電子克隆和 RT-PCR 方法從高粱（Sorghum bicolor）中克隆到SbDREB2基因，通過氨基酸序列分析，該基因編碼的蛋白在 82～145 區(qū)含有DREB類轉(zhuǎn)錄因子家族特有的AP2保守結(jié)構(gòu)域，與玉米DREB2A、水稻 DREB1蛋白相似度分別為 84%和69%。Real-time PCR分析結(jié)果顯示， SbDREB2 基因在高粱根、莖、葉中均能表達(dá)，并且在根中的表達(dá)量為莖中表達(dá)量的2.5倍，屬于組成型表達(dá)。受干旱、高鹽以及脫落酸（abscisic acid，ABA）的強(qiáng)烈誘導(dǎo)，但幾乎不受低溫的影響。Lucas等^[26]在野生二粒小麥（Triticum dicoccoides）中克隆得到TdicDRF1基因，Real-time PCR 表達(dá)特征性顯示，在干旱脅迫條件下，該基因在小麥根中的表達(dá)量顯著增加，然而在葉中的表達(dá)量幾乎沒有變化，說明了該基因的組織特異性表達(dá)。劉曉穎等^[27]從白菜（Brassica pekinensis）中分離得到BpDREB1基因，進(jìn)化樹分析結(jié)果表明，BpDREB1屬于DREB 亞家族中A1亞族，該基因受低溫、干旱誘導(dǎo)表達(dá)，但幾乎不受高鹽處理的影響，擬南芥經(jīng)低溫誘導(dǎo)后，過量表達(dá)BpDREB1 基因，體內(nèi)的可溶性糖和脯氨酸含量顯著升高，以更好地適應(yīng)脅迫環(huán)境。

DREB基因在農(nóng)業(yè)育種中的應(yīng)用普遍，利用OsDREB2A基因提高水稻（Oryza sativa）TNG67的抗性，在誘導(dǎo)型啟動(dòng)子4ABRC的作用下，分別通過干旱脅迫和鹽脅迫，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因水稻的存活率明顯高于非轉(zhuǎn)基因水稻和轉(zhuǎn)空載體的水稻，并且OsDREB2A受ABA的強(qiáng)烈誘導(dǎo)^[19]，說明OsDREB2A基因在逆境條件下保護(hù)水稻細(xì)胞。周永斌等^[28]研究了不同干旱脅迫下轉(zhuǎn)W16基因（一種DREB類基因）小麥基因表達(dá)特性及其抗旱機(jī)制，通過RT-PCR結(jié)果顯示，在正常灌溉條件下，W16基因在野生型小麥中有微弱表達(dá)，隨著脅迫增強(qiáng)，表達(dá)量增加，在干旱脅迫12 h 表達(dá)量達(dá)到峰值，接著隨著脅迫加劇，表達(dá)量下降，呈“上升—峰值—下降”的特點(diǎn)，而轉(zhuǎn)W16基因小麥在Ubiquitin 啟動(dòng)子作用下，W16基因表達(dá)恒定且維持在較高的水平；抗性生理生化分析結(jié)果表明，在不同的干旱脅迫條件下，轉(zhuǎn)基因植株的葉綠素含量、脯氨酸含量、可溶性糖含量、水分利用效率的變化均高于受體對(duì)照，尤其在重度干旱脅迫下更加高于受體對(duì)照。DREB類轉(zhuǎn)錄因子基因也在大麥^[12]、番茄^[15]、馬鈴薯^[16]、煙草^[23]等農(nóng)作物育種中得到應(yīng)用。

2.2 DREB轉(zhuǎn)錄因子基因在林業(yè)中的應(yīng)用

近年來，DREB類轉(zhuǎn)錄因子基因在林木中被相繼分離和鑒定，成為DREB類轉(zhuǎn)錄因子的一個(gè)研究熱點(diǎn)。翟俊峰等^[29]首次從銀中楊（Populus albaxp）中克隆得到PaDREB基因，Real-time PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，干旱、高鹽、低溫以及ABA均能誘導(dǎo)PaDREB基因的表達(dá)。并且經(jīng)過同源性比較和系統(tǒng)發(fā)育分析證實(shí)該基因與月季DREB2C基因具有較高的同源性。陳金煥等^[30]從胡楊（Populus euphratica）中分離得到PeDREB3和PeDREB4 2個(gè)編碼DREB類蛋白的基因，這2個(gè)基因在胡楊的根、莖、葉中均有表達(dá)。序列分析結(jié)果顯示，PeDREB3和PeDREB4含有非典型的AP2/ERF結(jié)構(gòu)域，并且利用改進(jìn)的酵母單雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)其能夠在酵母中激活下游報(bào)告基因的表達(dá)。Tang等^[20]從麻風(fēng)樹（Jatropha curcas）分離得到JcDREB基因，通過序列分析和酵母單雜交顯示，JcDREB屬于DREB類轉(zhuǎn)錄因子A6亞族基因。通過Real-time PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，干旱、高鹽、低溫均能誘導(dǎo)JcDREB基因的表達(dá)，而不受ABA的誘導(dǎo)。在擬南芥中過量表達(dá)JcDREB基因能夠顯著提高擬南芥的耐鹽和抗凍性。

目前DREB類轉(zhuǎn)錄因子已經(jīng)在林木育種中得到應(yīng)用。楊春霞等^[31]以美洲黑楊雜種（Populus×Euramericana cv.）優(yōu)良無性系南林895楊為轉(zhuǎn)基因受體材料，利用農(nóng)桿菌GV3101介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化DREB1C基因，得到轉(zhuǎn)基因抗性植株。通過抗性試驗(yàn)，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因植株的抗旱、耐鹽性能均高于非轉(zhuǎn)基因植株。 Li等[2，18]利用FaDREB1、FaDREB2基因提高構(gòu)樹抵抗逆境的能力。在CaMV35S（cauliflower mosaic virus 35S）啟動(dòng)子的誘導(dǎo)下，和野生型植株相比，轉(zhuǎn)FaDREB1、FaDREB2基因構(gòu)樹具有更強(qiáng)的抵御干旱和鹽害的能力。在干旱脅迫13 d或者250 mmol/L NaCl處理15 d，所有的野生型植株死亡，然而過量表達(dá)FaDREB1、FaDREB2基因的轉(zhuǎn)基因植株存活了下來。轉(zhuǎn)基因構(gòu)樹在干旱處理和高鹽處理?xiàng)l件下，其葉片含水量、葉綠素含量、脯氨酸含量以及可溶性糖含量的積累均高于野生構(gòu)樹，說明轉(zhuǎn)基因植株具有更好的抗性。并且在正常的生長(zhǎng)條件下，CaMV35S啟動(dòng)子并沒有引起植株生長(zhǎng)的延滯和矮化。目前DREB類轉(zhuǎn)錄因子基因也在蘋果^[22]、胡楊^[24]等林木育種中得到應(yīng)用。

2.3 DREB轉(zhuǎn)錄因子基因在草業(yè)中的應(yīng)用

謝健等^[32]從紫花苜蓿（Medicago sativa L.）中分離得到DREB1 轉(zhuǎn)錄因子基因，分別對(duì)其編碼蛋白的理化性質(zhì)、二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示，紫花苜蓿共編碼218個(gè)氨基酸，該蛋白質(zhì)屬于AP2家族，為親水蛋白且沒有信號(hào)肽。Peng等^[21]基于羊草（Leymus chinensis）的高通量測(cè)序結(jié)果，克隆得到一個(gè)新的基因LcDREB3a，受干旱、高鹽和ABA的誘導(dǎo)。并且通過將LcDREB3a轉(zhuǎn)入擬南芥驗(yàn)證該基因的功能，結(jié)果顯示，和非轉(zhuǎn)基因擬南芥相比，過量表達(dá)LcDREB3a基因并沒有引起植株生長(zhǎng)延滯，并且轉(zhuǎn)基因植株具有更強(qiáng)的抵抗干旱和鹽害的能力，該基因能夠提高植物適應(yīng)逆境的能力。Wang等^[23]采用RACE技術(shù)從檸條（Caragana korshinskii）中分離到CkDREB基因，該基因全長(zhǎng)1 743 bp，編碼345個(gè)氨基酸，干旱、高鹽、低溫均能誘導(dǎo)該基因的表達(dá)，外源性的ABA也能提高CkDREB基因的表達(dá)。通過在煙草中過量表達(dá)該基因，在正常條件下能夠顯著提高煙草的抗鹽和抵抗?jié)B透脅迫的能力，并且能夠誘導(dǎo)下游目標(biāo)基因的表達(dá)，這些結(jié)果說明CkDREB基因在檸條抗逆中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。

目前，也有關(guān)于DREB轉(zhuǎn)錄因子在牧草育種中應(yīng)用的報(bào)道。 Zhou等^[17]利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)得到轉(zhuǎn)PeDREB2a基因百脈根（Lotus corniculatus）植株，干旱和低鹽條件均引起轉(zhuǎn)基因植株和野生型植株的生長(zhǎng)延滯，但是對(duì)野生型植株來說這種生長(zhǎng)延滯更為明顯，說明過量表達(dá)PeDREB2a基因能夠提高百脈根抵抗干旱和低鹽的能力。同時(shí)DREB轉(zhuǎn)錄因子基因也在結(jié)縷草^[33]、狼尾草^[34]等牧草中得到應(yīng)用。

3 展望

DREB類轉(zhuǎn)錄因子在植物逆境信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中占據(jù)著重要的位置。國(guó)內(nèi)外已對(duì)DREB轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)，在逆境脅迫下的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑以及培育轉(zhuǎn)基因抗逆植物進(jìn)行了大量研究。通過揭示DREB轉(zhuǎn)錄因子在植物逆境脅迫應(yīng)答過程中的作用機(jī)制，導(dǎo)入或者改良轉(zhuǎn)錄因子來調(diào)節(jié)下游多個(gè)抗逆功能基因綜合發(fā)揮作用，進(jìn)而達(dá)到提高植物抵抗逆境的能力。但目前仍然存在著許多問題有待進(jìn)一步研究，如植物的抗逆性是許多基因相互疊加的綜合效果，形成了極為復(fù)雜的基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，這些調(diào)控網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)有待進(jìn)一步深入研究。DREB轉(zhuǎn)錄因子基因作為提高植物響應(yīng)干旱、高鹽、低溫的重要候選基因，近期又有報(bào)道一些DREB基因能夠增強(qiáng)植物的耐熱性^[35-36]和抵御重金屬的能力，因此分離和鑒定更多的、新的DREB基因是非常有用的，這對(duì)于深入研究植物的抗逆機(jī)制以及進(jìn)行抗逆農(nóng)作物、林木、牧草新品種的培育具有重要意義。

參考文獻(xiàn)：

[1]Xu Z S，Chen M，Li L C，et al. Functions and application of the AP2/ERF transcription factor family in crop improvement[J]. Journal of Integrative Plant Biology，2011，53（7）：570-585.

[2]Li M R，Li Y，Li H Q，et al. Ectopic expression of FaDREB2 enhances osmotic tolerance in paper mulberry[J]. Journal of Integrative Plant Biology，2011，53（12）：951-960.

[3]Mallikarjuna G，Mallikarjuna K，Reddy M K，et al. Expression of OsDREB2A transcription factor confers enhanced dehydration and salt stress tolerance in rice（Oryza sativa L.）[J]. Biotechnology Letters，2011，33（8）：1689-1697.

[4]劉杰，馬欣，董鳳麗，等. DREB/CBF基因響應(yīng)植物抗冷途徑的研究進(jìn)展[J]. 林業(yè)科技，2013，38（3）：34-39.

[5]姚曉華. 植物抗寒相關(guān)功能與調(diào)控基因研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2013，29（27）：141-147.

[6]Stockinger E J，Gilmour S J，Thomashow M F. Arabidopsis thaliana CBF1 encodes an AP2 domain-containing transcriptional activator that binds to the C-repeat/DRE，a cis-acting DNA regulatory element that stimulates transcription in response to low temperature and water deficit[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，1997，94（3）：1035-1040.

[7]馮軍，鄭彩霞. DREB轉(zhuǎn)錄因子在植物非生物脅迫中的作用及應(yīng)用研究[J]. 植物生理學(xué)報(bào)，2011，47（5）：437-442.

[8]王玉成，楊傳平，劉桂豐. DREB 基因的抗逆生理與分子機(jī)制研究[C]//東北三省及內(nèi)蒙古地區(qū)遺傳學(xué)研究進(jìn)展學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編. 北京：中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)，2009：52.

[9]Liu S X，Wang X L，Wang H W，et al. Genome-Wide analysis of ZmDREB genes and their association with natural variation in drought tolerance at seedling stage of Zea mays L.[J]. PLoS Genetics，2013，9（9）：1003790.

[10]de Paiva Rolla A A，Carvalho J F C，F(xiàn)uganti-Pagliarini R，et al. Phenotyping soybean plants transformed with rd29A：AtDREB1A for drought tolerance in the greenhouse and field[J]. Transgenic Research，2013，23（1）：75-87.

[11]Kai Z X S H Y. Isolation and characterization of Dehydration-Responsive Element-Binding factor 2C（MsDREB2C） from Malus sieversii Roem[J]. Plant & Cell Physiology，2013，54（10）：585-594.

[12]Kovalchuk N，Jia W，Eini O，et al. Optimization of TaDREB3 gene expression in transgenic barley using cold-inducible promoters[J]. Plant Biotechnology Journal，2013，11（6）：659-670.

[13]Bouaziz D，Pirrello J，Charfeddine M，et al. Overexpression of StDREB1 transcription factor increases tolerance to salt in transgenic potato plants[J]. Molecular Biotechnology，2013，54（3）：803-817.

[14]Jin X F，Xue Y，Wang R，et al. Transcription factor OsAP21 gene increases salt/drought tolerance in transgenic Arabidopsis thaliana[J]. Molecular Biology Reports，2013，40（2）：1743-1752.

[15]Li J，Sima W，Ouyang B，et al. Tomato SlDREB gene restricts leaf expansion and internode elongation by downregulating key genes for gibberellin biosynthesis[J]. Journal of Experimental Botany，2012，63（18）：6407-6420.

[16]Bouaziz D，Pirrello J，Ben A H，et al. Ectopic expression of dehydration responsive element binding proteins（StDREB2）confers higher tolerance to salt stress in potato[J]. Plant Physiology and Biochemistry，2012，60（11）：98-108.

[17]Zhou M L，Ma J T，Zhao Y M，et al. Improvement of drought and salt tolerance in Arabidopsis and Lotus corniculatus by overexpression of a novel DREB transcription factor from Populus euphratica[J]. Gene，2012，506（1）：10-17.

[18]Li M R，Li Y，Li H Q，et al. Improvement of paper mulberry tolerance to abiotic stresses by ectopic expression of tall fescue FaDREB1[J]. Tree Physiology，2012，32（1）：104-113.

[19]Cui M，Zhang W J，Zhang Q，et al. Induced over-expression of the transcription factor OsDREB2A improves drought tolerance in rice[J]. Plant Physiology and Biochemistry，2011，49（12）：1384-1391.

[20]Tang M J，Liu X F，Deng H P，et al. Over-expression of JcDREB，a putative AP2/EREBP domain-containing transcription factor gene in woody biodiesel plant Jatropha curcas，enhances salt and freezing tolerance in transgenic Arabidopsis thaliana[J]. Plant Science，2011，181（6）：623-631.

[21]Peng X J，Ma X Y，F(xiàn)an W H，et al. Improved drought and salt tolerance of Arabidopsis thaliana by transgenic expression of a novel DREB gene from Leymus chinensis[J]. Plant Cell Reports，2011，30（8）：1493-1502.

[22]Wisniewski M，Norelli J，Bassett C，et al. Ectopic expression of a novel peach（Prunus persica）CBF transcription factor in apple（Malus domestica）results in short-day induced dormancy and increased cold hardiness[J]. Planta，2011，233（5）：971-983.

[23]Wang X E，Chen X F，Liu Y，et al. CkDREB gene in Caragana korshinskii is involved in the regulation of stress response to multiple abiotic stresses as an AP2/EREBP transcription factor[J]. Molecular Biology Reports，2011，38（4）：2801-2811.

[24]Chen J H，Xia X L，Yin W L. Expression profiling and functional characterization of a DREB2-type gene from Populus euphratica[J]. Biochemical and Biophysical Research Communications，2009，378（3）：483-487.

[25]謝登雷，崔江慧，常金華. 高粱中SbDREB2基因的克隆與表達(dá)分析[J]. 作物學(xué)報(bào)，2013，39（8）：1352-1359.

[26]Lucas S，Durmaz E，Akp I I，et al. The drought response displayed by a DRE-binding protein from Triticum dicoccoides[J]. Plant Physiology and Biochemistry，2011，49（3）：346-351.

[27]劉曉穎，陳麗媛，張競(jìng)秋，等. 白菜脫水應(yīng)答轉(zhuǎn)錄因子BpDREB1基因的克隆及功能研究[J]. 作物學(xué)報(bào)，2013，39（2）：230-237.

[28]周永斌，閔東紅，徐兆師，等. 不同水分脅迫下轉(zhuǎn)W16小麥回交株系基因表達(dá)特性及其抗旱機(jī)制[J]. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)，2012，20（11）：1271-1281.

[29]翟俊峰，王法微，王南，等. 銀中楊DREB基因的克隆及表達(dá)[J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2012，40（6）：79-85.

[30]陳金煥，葉楚玉，夏新莉，等. 胡楊中兩個(gè)新DREB類基因的克隆、序列分析及轉(zhuǎn)錄激活功能研究[J]. 北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，32（5）：27-33.

[31]楊春霞，李火根，程強(qiáng)，等. 南林895楊抗旱耐鹽基因DREB1C的轉(zhuǎn)化[J]. 林業(yè)科學(xué)，2009，45（2）：17-21.

[32]謝健，王嘯，冉雪琴，等. 紫花苜蓿DREB1轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆及序列分析[J]. 畜牧與獸醫(yī)，2013，45（7）：45-49.

[33]Lee Y E，Yang S H，Bae T W，et al. Effects of field-grown genetically modified Zoysia grass on bacterial community structure[J]. Journal of Microbiology and Biotechnology，2011，21（4）：333-340.

[34]王憑青，李志中，晁躍輝，等. 擬南芥轉(zhuǎn)錄因子CBF1基因雜交狼尾草的轉(zhuǎn)化[J]. 重慶大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2007，30（10）：134-137.

[35]Qin F，Kakimoto M，Sakuma Y，et al. Regulation and functional analysis of ZmDREB2A in response to drought and heat stresses in Zea mays L.[J]. The Plant Journal，2007，50（1）：54-69.

[36]Hong B，Ma C，Yang Y J，et al. Over-expression of AtDREB1A in chrysanthemum enhances tolerance to heat stress[J]. Plant Molecular Biology，2009，70（3）：231-240.