黃曲霉毒素B1的常見檢測方法分析

高磊

摘要：文章首先針對黃曲霉毒素的相關(guān)概念以及其自身特性展開了深入的分析，而后進一步就當(dāng)前常見的幾種行之有效的黃曲霉毒素檢測方面進行了說明和比對，對于深入了解黃曲霉毒素以及其檢測方法有著一定的積極意義。

關(guān)鍵詞：黃曲霉毒素 檢測 方法

中圖分類號：S476 文獻標識碼：A 文章編號：1672-5336（2014）16-0035-02

霉毒素（Aflatoxin，AFT）是由Aspergillus flavus，Aspergillus nomius，Aspergillus parasiticus等多種真菌產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物。其最早出現(xiàn)在1960年，在英格蘭東南部導(dǎo)致大量火雞死亡。當(dāng)時因為病因不明，被定義為火雞X病，并且在其后兩年，從飼料中分離出黃曲霉所產(chǎn)生的熒光代謝物質(zhì)，并且進一步確定此為導(dǎo)致火雞死亡的原因。該發(fā)現(xiàn)一經(jīng)證明，即將其命名為黃曲霉毒素，并且隨之引發(fā)了轟動。從此，黃曲霉毒素以及其相關(guān)衍生物成為人類食品安全的重點關(guān)注方向。

1 黃曲霉毒素相關(guān)研究發(fā)展

黃曲霉能夠存在于4-50℃環(huán)境中，并且與25-40℃環(huán)境下尤為活躍，黃曲霉毒素的形成維度則通常不低于5-12℃，并且通常不超過45℃，在這個溫度值域中，以20-30℃作為其形成的最佳環(huán)境，并且當(dāng)溫度低于 10℃時，則不會產(chǎn)生黃曲霉毒素。黃曲霉相對而言對于濕度、含氧量和酸堿性的要求相對寬泛，在極為干旱以及缺氧的情況下同樣可以滋生，并且廣泛存在與pH2-9的環(huán)境中，且以pH2.5-6為最佳生成條件。在黃曲霉毒素家族中，黃曲霉毒素B1具有加強的毒性，并且污染頻率也居于首位，是當(dāng)前已知的各種真菌毒素中最穩(wěn)定的一種，直接威脅到食品安全，因此諸多國家都規(guī)定出黃曲霉毒素在食品中的限制，并且對此展開了嚴格控制。

相關(guān)研究表明，黃曲霉毒素B1在霉變的花生、谷物、果仁和大米中較為多見，并且對于人畜的肝臟損傷十分嚴重。最早于1960年出現(xiàn)的火雞事件中，同樣發(fā)現(xiàn)火雞的肝臟存在出血現(xiàn)象，其對生物體健康的危害不容忽視。有鑒于此，世界各國以及國際組織紛紛出臺相應(yīng)的控制標準用以確保食品安全。當(dāng)前重點關(guān)注的，主要是黃曲霉毒素B1以及其在生物體內(nèi)經(jīng)過羥化而衍生成的代謝物M1。我國在食品中真菌毒素限量GB2761規(guī)則的2005版和2011版中，分別規(guī)定了花生、玉米、大米、植物油、豆類、發(fā)酵食品以及乳制品中的黃曲霉毒素B1以及其衍生物M1的限定值，而從國際環(huán)境中看，歐盟在2010年同樣頒布了（EU）No.165/2010號法規(guī)，其中明確規(guī)定了谷物、油籽等相關(guān)產(chǎn)品的黃曲霉毒素最高限量，同時這一法規(guī)本身也是對于（EU）No.1881/2006的一次修訂。

就目前的情況看，我國的食品安全狀況并不樂觀，僅2010年，我國出口產(chǎn)品就被歐盟通報多次。一方面我國國內(nèi)的食品安全也需要得到更多重視，另一方面食品的國際市場則需要進一步拓展，因此，必須認真對待黃曲霉毒素B1的檢測工作。

2 常見黃曲霉毒素B1檢測方法分析

考慮到黃曲霉毒素B1對于當(dāng)前我國食品安全以及經(jīng)濟發(fā)展的威脅問題，需要面向此種物質(zhì)展開具有一定針對性的檢測，力求能夠準確獲取到此種物質(zhì)的存在狀況。結(jié)合當(dāng)前檢測技術(shù)的發(fā)展看，主要存在于黃曲霉毒素B1檢測領(lǐng)域的方法存在如下幾種。

2.1 薄層層析法（TLC）

現(xiàn)行國家標準《食品中黃曲霉毒素的測定》（GB/T5009.22—1996），以及美國藥典等均提及此種檢測方法。其工作原理為將樣品通過提取、柱層析、洗脫、濃縮、薄層分離一系列處理之后，在365nm紫外燈下，相應(yīng)的物質(zhì)會呈現(xiàn)出不同的熒光色，從而實現(xiàn)對于物質(zhì)的測定。此種方法原理簡單且成本較低，但是操作步驟繁瑣，并且對操作人員存在傷害。更為主要的問題在于靈敏度較差。

2.2 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法是當(dāng)前在黃曲霉毒素定量檢測方面有著相當(dāng)應(yīng)用廣度的方法。此種方法將樣品中的黃曲霉毒素B1經(jīng)柱層析分離后，通過測量色譜峰的面積實現(xiàn)定量檢測。高效液相色譜法在實際應(yīng)用過程中表現(xiàn)出靈敏、準確并且重復(fù)性好等多方面優(yōu)點，并且適合食品中的四種黃曲霉毒素含量的檢測。除此以外，此種方法在該領(lǐng)域中受到較大范圍內(nèi)接受和歡迎的原因，還包括其本身存在極強的分析自動化的潛力，這對于此種方法的未來發(fā)展必然存在極為重要的推進作用。

2.3 免疫化學(xué)分析方法

免疫化學(xué)分析方法是一種利用具有高度專一性的單克隆抗體或多克隆抗體設(shè)計的黃曲霉毒素的免疫分析方法，并且已經(jīng)成為了當(dāng)前最為常用的黃曲霉毒素B1檢測方法。從本質(zhì)上看，免疫化學(xué)分析方法是一個技術(shù)簇，其本身包括有括放射免疫分析方法（Radio immuno assay，RIA），酶聯(lián)免疫吸附測定法（Enzyme-linked of Immunosorbent Assay，ELISA）和免疫層析法（Immunoaflinity Column Assay，ICA），這幾種方法均可用于對黃曲霉毒素進行定量檢測，但是不同技術(shù)會呈現(xiàn)出不同的特征和適用性。以酶聯(lián)免疫吸附測定法ELISA為例，其檢測本質(zhì)是將抗體抗原反應(yīng)的特異性和酶與底物顯色反應(yīng)的高效催化作用實現(xiàn)有機結(jié)合，從而達到對于黃曲霉毒素B1實現(xiàn)檢測的目標。此種方法靈敏度較高，最低能夠檢出0.02ug/kg的含量，并且特異性強，檢測結(jié)果穩(wěn)定，實驗過程中不需要接觸樣本，相對而言比較適合批量樣品的檢測工作。

3 結(jié)語

隨著相關(guān)檢測技術(shù)等方面的不算成熟與發(fā)展，尤其是免疫學(xué)以及分子生物學(xué)突飛猛進的具體狀況，對于黃曲霉毒素B1的檢測方法也在發(fā)生著日新月異的變化。一安全性和準確性作為代表需求的技術(shù)層出不同，必然對于食品安全的進一步控制和人民身體健康保證的提升有著顯著地積極意義。

參考文獻

[1]孫秀蘭，張銀志，湯堅，等.金標免疫層析試條檢測樣品中黃曲霉毒素B1 的誤差分析[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2007，35（7）.

[2]Velky J T.An automated，handheld biosensor for aflatoxin[J].Biosensors & Bioelectronics，2000，14.