液相色譜分析卡那霉素與慶大霉素C組分

賽默飛

卡那霉素分析

氨基糖苷類抗生素（Aminoglycosides）是由氨基糖與氨基環(huán)醇通過(guò)氧橋連接而成的苷類抗生素，它是抗生素中很重要的一類。研究表明：此類藥物可影響細(xì)菌蛋白質(zhì)合成的全過(guò)程，妨礙初始復(fù)合物的合成，誘導(dǎo)細(xì)菌合成錯(cuò)誤蛋白以及阻抑已合成蛋白的釋放，從而導(dǎo)致細(xì)菌死亡。由于氨基糖苷類抗生素?zé)o紫外吸收，在普通C18色譜柱上保留較弱，所以對(duì)于此類抗生素的分析一直是個(gè)難點(diǎn)，本文使用UPLC結(jié)合CAD檢測(cè)器分析卡那霉素，方法靈敏度和準(zhǔn)確性高，穩(wěn)定性好。

色譜柱：Waters BEH C18，1.7μm，2.1×100 mm，P/N：186002352；

流動(dòng)相：100 mM TFA/H2O-MeOH（97：3）；

檢測(cè)方式：Corona Ultra電霧式檢測(cè)器，霧化器溫度：25℃；氣體（N2）壓力：35.0 psi；數(shù)據(jù)采集頻率：10Hz；

流速：0.2 mL/min；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：3μL。

按照供試品溶液制備項(xiàng)下制得以下3種卡那霉素注射液供試品溶液，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量結(jié)果見(jiàn)表1，測(cè)定圖譜見(jiàn)圖1、圖2.

本實(shí)驗(yàn)采用UPLC-CAD對(duì)卡那霉素含量進(jìn)行測(cè)定，實(shí)驗(yàn)精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性都較好，方法準(zhǔn)確度良好，靈敏度高。供試品溶液中卡那霉素與卡那霉素B分離度大于2.0，該方法完全可以用于其有關(guān)物質(zhì)卡那霉素B的測(cè)定。CAD動(dòng)態(tài)范圍較寬，本方法不進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換直接計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y=52782x+19538，R值0.998（0.3μg～3μg）。電霧式檢測(cè)器設(shè)置參數(shù)少，穩(wěn)定性較好，受環(huán)境影響小。該檢測(cè)器在測(cè)定氨基糖苷類物質(zhì)上具有較高推廣應(yīng)用的價(jià)值。

慶大霉素C組分分析

慶大霉素是為數(shù)不多的熱穩(wěn)定性的抗生素，在人用藥和獸藥領(lǐng)域均大范圍應(yīng)用。這是一種常見(jiàn)氨基糖苷類抗生素，主要用于治療細(xì)菌感染，尤其是革蘭氏陰性菌引起的感染。慶大霉素能與細(xì)菌核糖體30s亞基結(jié)合，阻斷細(xì)菌蛋白質(zhì)合成。慶大霉素的主要成分包括四個(gè)組分，統(tǒng)稱慶大霉素C組分，2010版中國(guó)藥典使用ELSD測(cè)定，本文使用CAD檢測(cè)器分析慶大霉素C組分，分離度較高，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性較ELSD有較大提高。圖3、圖4為測(cè)定譜圖。表2、表3為分析結(jié)果。

色譜柱：Acclaim 120 C18，5μm，4.6×150mm，P/N：059149；

流動(dòng)相：100mmol/L TFA/H2OMeOH（92：8）；

檢測(cè)方式：Corona Ultra電霧式檢測(cè)器，霧化器溫度：25℃；氣體（N2）壓力：35.0 psi；數(shù)據(jù)采集頻率：5 Hz；

流速：0.6 mL/min；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：10μL。

該樣品C組分合格，符合C 1 25%～50%，C1a 15%～40%，（c2+c2a）% 20%～50%藥典規(guī)定。

本實(shí)驗(yàn)采用HPLC-CAD檢測(cè)器對(duì)慶大霉素C組分進(jìn)行測(cè)定，實(shí)驗(yàn)精密度、重復(fù)性、線性都較好。與蒸發(fā)光散射測(cè)定方法比較，不取對(duì)數(shù)線性相關(guān)系數(shù)就可以達(dá)0.999，從而計(jì)算結(jié)果不用進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，較ELSD檢測(cè)大大簡(jiǎn)化了含量計(jì)算過(guò)程。對(duì)照品和供試品溶液色譜圖中C2和C2a之間的峰為小諾霉素峰，它們?nèi)齻€(gè)之間的分離度大于2.0，由于該化合物為慶大霉素C組分中的次要成分，所以未對(duì)其進(jìn)行分析。CAD檢測(cè)器操作簡(jiǎn)單，設(shè)置參數(shù)少，穩(wěn)定性較好，受環(huán)境影響因素少。該檢測(cè)器在測(cè)定氨基糖苷類物質(zhì)上具有較高推廣應(yīng)用的價(jià)值。endprint