渝東北山區(qū)野葛中葛粉與總黃酮含量動態(tài)變化研究

譚小燕 李達斌 林中翔 黃 靜 賈 晗 王立青

1.重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W校，重慶 404020；2.重慶市巫溪縣人民醫(yī)院，重慶 405800；3.四川大學華西藥學院，四川成都 610041

野葛 Pueraria lobata （Willd.）Ohwi為豆科葛屬植物，莖葉可作飼料，根和花可入藥。野葛的干燥塊根為常見中藥，具有解肌退熱、生津止渴、透疹、升陽止瀉、通經(jīng)活絡(luò)、解酒毒的功能[1]。野葛根中富含的黃酮類成分具有多種藥理作用[2-5]，而葛粉又是很好的保健食品，暢銷國內(nèi)外[6-9]。野葛從根、藤到花、葉在工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥方面都有很高的研究利用價值。渝東北山區(qū)野葛資源豐富[10-11]，但從未被開發(fā)利用，因此本研究以渝東北山區(qū)的開縣城口巫溪交界地帶產(chǎn)野葛為樣本，采用組織搗碎水沉淀法和UV法測定一年中每月采收野葛根中葛粉和總黃酮含量，對含量動態(tài)變化進行分析，以期確定最佳采收時期，為該區(qū)野葛根的開發(fā)利用提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

METTLER TOLEDO PL1501-S電子秤 （梅特勒-托利多中國地區(qū)）、電熱恒溫鼓風干燥箱DHG-9140A型（上海一恒科技有限公司）、高速中藥粉碎機HX-500A型（浙江省永康市溪岸五金藥具廠）、低速自動離心機 LD25-2、U-2800 分光光度計（UV2300）、特殊減壓抽濾裝置（四川大學華西藥學院天然藥物系自主設(shè)計）、水、95%乙醇（分析純）、葛根素對照品（批號：110753-200912，中國藥品生物制品檢定所）。

試驗樣本采自重慶開縣譚家鄉(xiāng)。從2011年6月～2012年 5月，每月 9日（或前后 2日）選取生長年限一致，粗細相近的野葛根采挖，然后洗凈泥沙，切成2～3 mm薄片，自然干燥。

1.2 方法

文獻報道一般利用組織搗碎水沉淀法[12]或酶解-蒽酮比色法[13]測定葛根中葛粉含量，而且酶解-蒽酮比色法是最常用的淀粉含量測定方法。但因本實驗?zāi)康脑谟谕ㄟ^測定野葛中葛粉含量，從而確定野葛的最佳采集時間，再用于提取葛粉的工藝中，為與提取工藝相結(jié)合，故選取組織搗碎水沉淀法來測定葛粉含量。野葛中總黃酮的含量測定采用UV分光光度法[14-20]。

2 結(jié)果

2.1 野葛葛粉含量測定

將12份試驗樣本各稱取1 kg，粉碎后過40目篩，將藥材用 1∶8倍量冷水（W/V）浸泡 1 h，然后物理攪拌，讓葛粉充分混入水液中，用紗布過濾，將濾渣加入7倍量水，攪拌均勻后再過濾，濾渣再重復清洗1遍，合并3次的濾液膠漿，再用細紗布過濾1遍，去除微粒雜質(zhì)。將葛粉漿液離心或放置沉降，待沉降完全（溶液變澄清）倒掉上清液，再加5倍量清水攪勻葛粉，再沉降，重復3次后得葛粉，將其恒溫40℃減壓干燥葛粉。葛粉干燥后，用電子天平稱重。

根據(jù)試驗結(jié)果表明，1年12個月野葛葛粉含量從 11月～第 2年 2月最高，3、8～10月其次，4～7月最低，具體測定結(jié)果見表1。

表1 每月野葛葛粉含量表

2.2 野葛總黃酮含量測定

2.2.1 標準曲線制備 準確稱取葛根素對照品0.0155 g，用70%乙醇溶解，于100 mL容量瓶中定容，得0.155 mg/mL濃度的葛根素對照品溶液。分別精密吸取該對照品溶液 0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 于 10 mL 容量瓶中，加70%乙醇定容，得系列對照品溶液。用1.0 mL 70%乙醇溶液作空白對照，在250 nm波長處測定吸收度。所得結(jié)果見表2和圖1。

表2 標準曲線制備

圖1 對照品溶液標準曲線

根據(jù)標準曲線求回歸方程為A=74.288C+0.0091，r=0.9999。

2.2.2 供試樣品總黃酮含量測定 將每個月野葛樣本粉碎成粉末，分別精密稱取2 g置250 mL圓底燒瓶中，各加 70%乙醇 100 mL，稱量，恒溫 80℃回流 1.5 h，放冷，再稱量，并加70%乙醇補足減少重量，搖勻，濾過，用移液管精確量取濾液1 mL于25 mL容量瓶，加70%乙醇稀釋定容得待測液，用1.0 mL 70%乙醇溶液作空白對照，在250 nm波長處連續(xù)3次測定吸收度，結(jié)果取3次之平均值，通過標準回歸方程即可計算出待測液濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，然后換算成總黃酮質(zhì)量，最后用質(zhì)量除以稱取的粉末重量可得該月野葛樣本的總黃酮含量。具體含量見表3，根據(jù)數(shù)據(jù)顯示11月～第 2年 3月總黃酮含量高于 9%，8～10月稍高，約6%，4～7月含量較低，在 2%左右。

2.3 全年野葛葛粉和總黃酮含量變化趨勢

根據(jù)“2.1”、“2.2”項下測定的一年中每月在渝東北山區(qū)采集野葛中葛粉和總黃酮含量結(jié)果 （即表1、表3中數(shù)據(jù)）制定葛粉和總黃酮含量隨時間變化的趨勢曲線圖，見圖2。

由圖2可見渝東北山區(qū)野葛的葛粉和總黃酮含量隨季節(jié)變化趨勢基本一致，從10月起開始呈含量上升趨勢，11月份達第一峰值，12月份略有下降，次年1月份達第二峰值，之后含量開始呈下降趨勢，到次年4月份含量降到最低，4～10月一直處于含量低水平時期?？傮w顯示在11月～次年3月期間葛粉和總黃酮含量都相對較高。

表3 野葛各月份總黃酮含量表

圖2 渝東北山區(qū)野葛葛時間粉與總黃酮含量隨時間變化曲線

3 討論

葛粉和總黃酮含量測定方法皆參考文獻報道并結(jié)合實際提取葛粉和總黃酮的工藝而確定，故未再做方法的穩(wěn)定性、重復性等考察。

根據(jù)圖2的渝東北山區(qū)野葛葛粉和總黃酮含量隨季節(jié)變化趨勢曲線顯示在11月～次年3月期間葛粉和總黃酮含量都相對較高。因此認為最佳采集時間為11月～次年3月，采集時間段較長，將有利于野葛的加工生產(chǎn)。

根據(jù)研究測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)渝東北山區(qū)一帶所產(chǎn)野葛葛粉含量變化在8.9%～25.3%，總黃酮含量在2%～12%，總的來看，葛粉含量比粉葛類低，若利用其提取葛粉產(chǎn)率不及粉葛[21]，但總黃酮含量較高，異黃酮類成分豐富，藥用價值更高。如果能對該區(qū)野葛的葛粉和總黃酮進行連續(xù)提取綜合利用，定能提高其利用價值和經(jīng)濟效益。此部分研究不但確定了該區(qū)野葛采收時間段，更為后續(xù)關(guān)于綜合連續(xù)提取野葛葛粉和總黃酮的工藝研究奠定了理論基礎(chǔ)。

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