不同藥物對關(guān)節(jié)炎大鼠模型的病理學(xué)形態(tài)及血液流變學(xué)影響的觀察

張 海，吳勤麗，廖旭慧，陶勇玲，歐陽露

0 引言

關(guān)節(jié)炎是指發(fā)生在關(guān)節(jié)及其周圍組織的炎性疾病，常見類型有類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、感染性關(guān)節(jié)炎及創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)炎等，不同關(guān)節(jié)炎的致病因素、臨床表現(xiàn)、治療及轉(zhuǎn)歸均不一樣［1］，目前針對關(guān)節(jié)炎的防控仍以早發(fā)現(xiàn)早治療為指導(dǎo)思想，治療延誤將會造成關(guān)節(jié)軟骨和骨質(zhì)破壞，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形，嚴(yán)重患者甚至?xí)?dǎo)致殘廢;臨床治療關(guān)節(jié)炎尚無特效藥物，常用的藥物有非甾體類抗炎藥物、糖皮質(zhì)激素、改善病情慢作用抗風(fēng)濕藥物等［2］。本文觀察不同藥物治療關(guān)節(jié)炎的臨床療效，將雷公藤多甙和白藜蘆醇應(yīng)用于關(guān)節(jié)炎大鼠模型的治療中，通過觀察大鼠的病理學(xué)形態(tài)及血液流變學(xué)參數(shù)，探討雷公藤多甙和白藜蘆醇在臨床治療中的應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 材料 選取健康Wistar大鼠40只，雌雄各半，大鼠體質(zhì)量為150～200 g，實驗大鼠購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所，動物合格證號:2012A044，白藜蘆醇購自西安清樂生物科技有限公司，批號:121106，雷公藤多甙片購自浙江普洛康裕天然藥物有限公司，批號:1207125，硫酸氨基葡萄糖片購自新興同仁藥業(yè)有限公司，批號:015217，每組給藥量根據(jù)成人用藥量進(jìn)行換算，大鼠給藥劑量=大鼠體質(zhì)量×(成人用藥量/成人體重)［3］，計算白藜蘆醇給藥量為 30 mg/(kg·d)，雷公藤多甙給藥量為12 mg/(kg·d)，硫酸氨基葡萄糖給藥量為35 mg/(kg·d);采用血流變微循環(huán)儀檢測高切和低切變率下的全血黏度，采用毛細(xì)玻管黏度計檢測血漿黏度，相對黏度采用綜合傳感法檢測，聚集指數(shù)采用比濁法檢測。

1.2 造模與分組 Wistar大鼠50只適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)選取其中的10只作為正常對照組，正常對照組大鼠僅注射0.1 mL的生理鹽水，其余40只大鼠在雙膝關(guān)節(jié)處注射木瓜蛋白酶生理鹽水注射液［4］，每次注射量為0.1 mL，2次/周，連續(xù)注射3周后即成模，40只造模大鼠繼續(xù)喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)將其分為模型組(生理鹽水)、實驗組(白藜蘆醇)、對照組(雷公藤多甙)及陽性藥物組(硫酸氨基葡萄糖)，每組均為10只;5組大鼠分別給予不同藥物，給藥方式均為灌胃，實驗組給予白藜蘆醇30 mg/(kg·d)，對照組給予雷公藤多甙12 mg/(kg·d)，陽性藥物組給予硫酸氨基葡萄糖35 mg/(kg·d)，正常對照組和模型組均給予5 mL生理鹽水灌胃，連續(xù)灌胃給藥1周［5］。

1.3 關(guān)節(jié)腫脹度及關(guān)節(jié)炎指數(shù)觀察 分別于造模前和造模后1、2、3周測量大鼠的左后足墊厚度，關(guān)節(jié)腫脹度(%)=(造模后測量值-造模前測量值)/造模前測量值［6］。采用關(guān)節(jié)炎分?jǐn)?shù)評分法評價非致炎3只肢體關(guān)節(jié)的腫脹程度，并根據(jù)以上的評價情況計算關(guān)節(jié)炎指數(shù)(AI)。關(guān)節(jié)腫脹程度共分為5級，0級表示無紅腫，計1分;Ⅰ級表示趾關(guān)節(jié)處有輕微紅腫，計1分;Ⅱ級表示小趾和足趾關(guān)節(jié)有明顯紅腫，計2分;Ⅲ級表示踝關(guān)節(jié)以下具有不同程度紅腫，計3分;Ⅳ級表示全部足爪部位均發(fā)生紅腫，計4分。AI值為非致炎三只肢體關(guān)節(jié)腫脹等級評分和，總分為12分［7］。

1.4 觀察血液流變學(xué)參數(shù) 給藥3周后，取大鼠股動脈血3～5 mL置于加了肝素的抗凝管中，采用血流變微循環(huán)儀檢測血液流變學(xué)參數(shù)，具體參數(shù)包括血液粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞特性指數(shù)［8］。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計學(xué)軟件對實驗資料進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗，計量資料組間比較采用兩獨立樣本t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血液流變學(xué)參數(shù)比較 各組之間的比較見表1。從表1中可見，實驗組血液流變學(xué)參數(shù)與對照組和模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，實驗組與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，實驗組與陽性藥物組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 兩組各項指標(biāo)變化情況比較(±s)

表1 兩組各項指標(biāo)變化情況比較(±s)

注:與對照組和模型組比較，△P＜0.05;與實驗組比較，*P＜0.05，#P＞0.05;與模型組和正常對照組比較，▲P＜0.05

組別 全血黏度(mPa·s)高切 低切血漿黏度(mPa·s)相對黏度(mPa·s)紅細(xì)胞壓積 紅細(xì)胞聚集指數(shù)正常對照組 12.13±0.79* 4.95±0.54* 1.37±0.19* 1.65±0.25* 45.68±0.45* 2.59±0.14*模型組 20.65±0.63 7.33±0.26 1.91±0.15 2.92±0.17 57.49±0.38 3.96±0.18實驗組 15.24±0.81△ 5.87±0.46△ 1.54±0.13△ 1.89±0.16△ 49.43±0.29△ 2.98±0.17△對照組 18.07±0.32▲ 6.51±0.27▲ 1.77±0.11▲ 2.48±0.21▲ 53.74±0.33▲ 3.42±0.24陽性藥物組 14.93±0.48# 5.62±0.38# 1.52±0.16# 1.92±0.13# 48.97±0.52# 2.88±0.27#

2.2 關(guān)節(jié)腫脹度及關(guān)節(jié)炎指數(shù)比較 各組之間比較見表2。從表2中可見，實驗組關(guān)節(jié)腫脹度及關(guān)節(jié)炎指數(shù)與對照組和模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，實驗組與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，實驗組與陽性藥物組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

表2 兩組關(guān)節(jié)腫脹度及關(guān)節(jié)炎指數(shù)比較

3 討論

中醫(yī)理論認(rèn)為，關(guān)節(jié)炎屬“骨痹”、“歷節(jié)病”的范疇，認(rèn)為其致病因素是由于氣血不足、風(fēng)寒濕邪等侵入骨骼，導(dǎo)致血瘀經(jīng)絡(luò)［9］、氣血運行不暢，終而使風(fēng)寒濕邪毒雜至、合而為痹，中醫(yī)通常將關(guān)節(jié)炎分為肝腎不足型、氣血虛寒型、濕熱下注型及風(fēng)寒濕痹型四類［10］，并根據(jù)不同證型給予不同治療藥物。現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)家認(rèn)為，此病的根本致病因素是正虛與外邪雙重作用的結(jié)果［11］，此病的治療關(guān)鍵要從綜合治療的方向出發(fā)，正虛為脾胃虛弱、氣血不足，外邪為挾濕挾瘀。人體四肢關(guān)節(jié)是脾臟和陽明經(jīng)所主，臨床治療要注重健脾運濕、益氣養(yǎng)血。這些治療方法對于改善病理學(xué)形態(tài)和血流動力學(xué)有積極意義，但對于急性發(fā)作時臨床癥狀的改善則有一定的局限性，這也是中西醫(yī)結(jié)合治療的理論基礎(chǔ)［12］?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，關(guān)節(jié)炎患者多存在血液循環(huán)障礙的癥狀，這些癥狀可從血液流變學(xué)參數(shù)中明顯觀察到。正常情況下，人體血液在體內(nèi)運行暢通，能夠滿足身體組織供氧和養(yǎng)分的需求，但如果血液黏度過高，身體各部位的微循環(huán)受到限制，則不能滿足身體組織供氧和養(yǎng)分的需求，此時可能導(dǎo)致機(jī)體的損害。其中關(guān)節(jié)部位的血液微循環(huán)障礙在關(guān)節(jié)炎發(fā)病中扮演著重要的角色，因此通過觀察血液流變學(xué)參數(shù)的變化，可得知關(guān)節(jié)供氧和養(yǎng)分供給情況，血液流變學(xué)參數(shù)可作為判斷關(guān)節(jié)炎轉(zhuǎn)歸的重要指標(biāo)［13］。

本文將不同藥物應(yīng)用于關(guān)節(jié)炎大鼠模型的治療中，實驗結(jié)果顯示，白藜蘆醇組與雷公藤多甙組和模型組比較，血液流變學(xué)參數(shù)改善更明顯，但與正常對照組比較，其改善效果仍不足，但與陽性藥物組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，由此說明，白藜蘆醇能顯著降低模型大鼠的全血黏度、血漿黏度、聚集指數(shù)等指標(biāo)，這一作用可增加紅細(xì)胞的流動性，從而起到改善關(guān)節(jié)微循環(huán)的作用，對于改善關(guān)節(jié)軟骨的營養(yǎng)狀況、修復(fù)退變軟骨等具有積極意義［14］。關(guān)節(jié)炎的發(fā)病基礎(chǔ)是炎性反應(yīng)，典型的病理特征為粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞等增高，這些炎性反應(yīng)會誘發(fā)血管翳形成，破壞關(guān)節(jié)軟骨和關(guān)節(jié)滑膜，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)不可逆的損傷，因此，無論是西醫(yī)還是中醫(yī)治療關(guān)節(jié)炎均以抗炎性反應(yīng)為治療基礎(chǔ)?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示，白藜蘆醇表現(xiàn)出良好的抗炎、抗菌作用，其可通過減少血小板的黏附和活性，從而達(dá)到抗炎作用，同時其還具有提高機(jī)體免疫力的功效，這些功效對于治療關(guān)節(jié)炎均具有重要臨床價值。

本文觀察模型大鼠的關(guān)節(jié)腫脹度和關(guān)節(jié)炎指數(shù)的實驗結(jié)果顯示，白藜蘆醇組大鼠與雷公藤多甙組和模型組比較，關(guān)節(jié)腫脹度改善情況及關(guān)節(jié)炎指數(shù)均更優(yōu)，但與陽性藥物組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，由此說明，白藜蘆醇能顯著緩解關(guān)節(jié)炎的充血、腫脹等臨床癥狀，這對于減輕患者痛苦和炎性細(xì)胞浸潤具有積極意義，特別是減輕炎性細(xì)胞浸潤，對于提高臨床療效和改善預(yù)后有重要作用。

［1］莫漢有，王麗芳，周潤華，等.青蒿琥酯對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血 IL-17、MMP-3及 MMP-9 的影響［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2011，40(7):628-631.

［2］朱靜，閔月，王麗峰，等.佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠IL-23、IL-17檢測分析［J］.臨床兒科雜志，2011，29(5):477-481.

［3］Komeh-Nkrumah SA，Nanjundaiah SM，Rajaiah R，et al.Topical dermal application of essential oils attenuates the severity of adjuvant arthritis in Lewis rats［J］.Phytotherapy Research，2012，26(1):54-59.

［4］王志文，丁春菊，張愛國，等.麝香烏龍丸對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜病理形態(tài)及血管內(nèi)皮生長因子、內(nèi)皮抑素表達(dá)的影響［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17(19):241-244.

［5］Pragasam SJ，Murunikkara V，Sabina EP，et al.Ameliorative effect of p-coumaric acid，a common dietary phenol，on adjuvant-induced arthritis in rats［J］.Rheumatology International，2013，33(2):325-334.

［6］Lubahn C，Schaller JA，Shewmacker E，et al.Preclinical efficacy of sodium narcistatin to reduce inflammation and joint destruction in rats with adjuvant-induced arthritis［J］.Rheumatology International，2012，32(12):3751-3760.

［7］薛紅霞，孫秀榮，張寧.依托考昔治療骨關(guān)節(jié)炎的療效及安全性研究［J］.實用藥物與臨床，2012，15(3):132-134.

［8］Shahrara S，Pickens SR，Dorfleutner A，et al.IL-17 induces monocyte migration in rheumatoid arthritis［J］.J Immunol，2009，182(6):3884-3891.

［9］趙太平，邱佰房，徐玉東，等.雷公藤治療大鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的效果及其免疫機(jī)制［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2011，32(20):2642-2645.

［10］劉冬梅，楊麗麗，薛紅霞.尪痹片治療膝骨關(guān)節(jié)炎的療效［J］.實用藥物與臨床，2012，15(6):380-381.

［11］劉春景，居來提·賽買提，陳昶，等.新疆地區(qū)114例類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者中醫(yī)證候分布規(guī)律的回顧性研究［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2011，26(3):480-482.

［12］王志中，方勇飛，羅彥，等.322例濕熱痹阻型及寒濕痹阻型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中醫(yī)證型的客觀化研究［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，31(4):466-470.

［13］易劍峰.布洛芬與雙氫青蒿素配伍治療大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的藥效及機(jī)制初探［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17(9):177-180.

［14］董鑫鑫，高書亮，肖誠，等.葛根素衍生物4ac對膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠血液流變學(xué)的影響［J］.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2010，16(4):295-297.