HBV—M與定量PCR法檢測HBV—DNA相關性探析

劉青鶴

【摘要】 目的：探討乙肝病毒DNA（HBV-DNA）與其血清學標志物HBV-M之間的相關性。方法：選取本院收治的乙肝患者183例作為研究對象，采集并分離患者的血清標本，分別采用熒光定量PCR法和酶聯(lián)免疫吸附法對患者的HBV-DNA、HBV-M進行檢測，在不同的HBV-M模式下分析其與HBV-DNA間的關系。結果：在HBsAg（+）+HBeAg（+）+HBcAb（+）的模式下，HBV-DNA的檢測陽性率為97.9%；HBsAg（+）+HBeAg（+）模式下，HBV-DNA的檢測陽性率是100%；兩者比較差異無統(tǒng)計學意義，但這兩種模式下的檢測陽性率都顯著高于其他模式（P<0.05）。結論：乙肝病毒的血清學標志物的模式不同，HBV-DNA的檢測陽性率不同，乙肝患者機體內的病毒含量也有差異，HBV-M和HBV-DNA的檢測分別是乙肝感染的間接證據和直接證據，同時對患者進行這兩項指標的檢測對于乙肝的臨床診斷、病情判定、傳染性的評估具有重要的意義。

【關鍵詞】 HBV-M； HBV-DNA； 熒光定量PCR技術； 相關性

【Abstract】 Objective： To discuss the correlation between hepatitis B virus DNA and HBV-M. Method： Five hundred and forty-nine hepatitis B patients were selected in our hospital. Patients serum samples were collected， its HBV-DNA and HBV-M were detected by using quantitative PCR and enzyme-linked immunosorbent assay. The correlative between HBV-M and HBV-DNA was analyzed. Result： In HBsAg （+） + HBeAg （+） + HBcAb （+） mode， the positive rate of HBV-DNA was 97.9%. In HBsAg （+） + HBeAg （+） mode， the positive rate of HBV-DNA was 100%. The positive rates were not seen significant difference between the two modes， but they were significantly higher than the other modes（P<0.05）. Conclusion： There are some correlations between serological markers of hepatitis B virus and HBV-DNA. HBV-M and HBV-DNA testing are circumstantial evidence and direct evidence of hepatitis B infection， while these two indicators of patient clinical diagnostic testing for hepatitis B， the condition determination， infectious assessment are of great significance.

【Key words】 HBV-M； HBV-DNA； Fluorescence PCR； Correlative analysis

First-authors address：The People's Hospital of Guangfeng County， Guangfeng 334600， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.25.042

乙肝是臨床上常見的感染性疾病，由乙肝病毒引起，作為乙肝的高發(fā)地區(qū)，其對我國人民的健康造成了很大的威脅。乙肝病毒血清標志物HBV-M可以反映人體對乙肝病毒的免疫狀態(tài)，其檢測也是是判斷患者病情、乙肝病毒傳染性的依據之一[1-3]，但無法直接反映乙肝病毒在體內的復制情況，而熒光定量PCR則可以對HBV-DNA進行定量的檢測與分析[4]。本文主要探討HBV-M與HBV-DNA之間的相關性，具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院收治的乙肝患者作為研究對象?；颊呔浥R床診斷確診為乙肝，并排除甲型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎以及庚型肝炎的疊加感染患者[5-7]。共收治患者183例，其中男118例，女65例，患者年齡6～77歲，平均（37.6±2.3）歲。

1.2 方法 空腹采集患者的靜脈血，并離心分離血清，分別采用熒光定量PCR法和酶聯(lián)免疫吸附法對患者的HBV-DNA、HBV-M進行檢測。選擇酶聯(lián)免疫吸附法檢測，嚴格按照ELISA試劑盒上的操作說明檢測患者的HBV-M，并使用酶標儀記錄結果。熒光定量PCR技術檢測：將100 μL的血清標本與等量DNA提取液混合，離心，將上清液去除后再加25 μL處理液，水浴加熱10 min后再次離心，將得到的上清液2 μL置于PCR管中，設置循環(huán)參數，使血清標本進行PCR反應。同時，使用相同的方法處理其他對照品[8]。反應完全之后，以陽性梯度標準品的Ct值作標準曲線并計算HBV-DNA含量[9-11]。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件對數據進行分析，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料采用 字2檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

3 討論

本文分別使用酶聯(lián)免疫吸附法和熒光定量PCR法對HBV-M和HBV-DNA進行檢測，并對不同HBV-M模式下的HBV-DNA檢測陽性率進行比較可見，在HBsAg（+）+HBeAg（+）+HBcAb（+）和HBsAg（+）+HBeAg（+）兩種模式下，患者的HBV-DNA檢測陽性率最高，提示血清HBsAg和HBeAg同時呈陽性的時候，機體內的HBV-DNA復制活躍，患者的病情嚴重，且傳染性高。而在HBsAb（+）+HBeAb（+）+HBcAb（+）、HBsAb（+）+HBcAb（+）、HBcAb（+）等模式下，HBV-DNA的陽性率都不超過10%，甚至為0，傳染性低，說明HBsAb在病毒清除過程中發(fā)揮作用。

乙肝病毒的血清學標志物的模式不同，HBV-DNA的檢測陽性率不同，乙肝患者機體內的病毒含量也有差異，HBV-M和HBV-DNA的檢測分別是乙肝感染的間接證據和直接證據[12]，同時對患者進行這兩項指標的檢測對于乙肝的臨床診斷、病情判定、傳染性的評估具有重要的意義。

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（收稿日期：2014-03-26） （本文編輯：郎威）