血培養(yǎng)瓶法在無菌體液病原菌培養(yǎng)中的應(yīng)用

殷 琳，喻 華，黃湘寧，喬 寧，張 凱，劉 鑫 （四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院／四川省人民醫(yī)院檢驗科，成都 610072）

全自動血培養(yǎng)儀廣泛應(yīng)用于臨床，為血液感染提供了方便快速的檢測方法［1］，需氧厭氧配對血培養(yǎng)瓶的使用更是提高了血液感染的陽性率。而無菌體液包括胸腹水、腦脊液、穿刺液等標本通常采用傳統(tǒng)培養(yǎng)方法，如血平板、麥康凱或巧克力平板培養(yǎng)，病原菌檢出率較低。為了提高無菌體液病原菌檢出率，為臨床診斷提供更有效的信息，對近半年本院臨床住院患者321例無菌體液標本采用雙瓶血培養(yǎng)瓶增菌和直接接種兩種培養(yǎng)方法，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料來源 321份標本為本院住院患者無菌體液標本。其中胸腔積液138份，腹水105份，腦脊液48份，其他部位穿刺液30份。

1.2 儀器與試劑 血培養(yǎng)采用Bact／ALERT 3D培養(yǎng)儀，細菌鑒定使用VITEK2全自動細菌鑒定儀，細菌鑒定卡，需氧厭氧血培養(yǎng)瓶系法國生物梅里埃公司產(chǎn)品。血平板、麥康凱平板、巧克力平板系鄭州安圖公司提供。

1.3 方法

1.3.1 血培養(yǎng)瓶增菌法 臨床醫(yī)生按照血培養(yǎng)采集標準操作規(guī)程，采集無菌體液標本5～10mL分別注入需氧厭氧血培養(yǎng)瓶內(nèi)，充分混勻，立即送檢實驗室，置Bact／ALERT 3D血培養(yǎng)箱培養(yǎng)。當血培養(yǎng)瓶報陽時將培養(yǎng)瓶取出，直接涂片并立刻轉(zhuǎn)種血平板、巧克力平板置35℃CO2孵箱中培養(yǎng)，于18～24h后對菌落進行涂片染色、鑒定及藥敏試驗，如5d未報陽視為陰性，報告無細菌生長。

1.3.2 直接接種法 無菌體液標本同時送檢實驗室，混勻后用接種環(huán)直接接種血平板、麥康凱和巧克力平板，置35℃CO2孵箱中培養(yǎng)。接種后18～24h如有細菌生長，對菌落進行涂片染色、鑒定及藥敏試驗，如48h無菌生長視為陰性，報告無細菌生長。

1.4 觀察指標 參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》［2］及相關(guān)文獻報道［3－5］，通過常規(guī)及生化等檢驗數(shù)據(jù)以及患者臨床診斷綜合分析，將符合細菌感染診斷結(jié)果且培養(yǎng)出細菌的患者判定為真陽性（TP），不符合細菌感染而培養(yǎng)出細菌的標本為假陽性（FP），符合細菌感染而未培養(yǎng)出細菌的標本為假陰性（FN），不符合細菌感染而未培養(yǎng)出細菌的標本為真陰性（TN），統(tǒng)計兩種方法的TP、FP、FN、TN，并計算兩種方法的敏感性、準確性及陰性、陽性符合率結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；以α＝0.05為檢驗水準，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩種方法分離細菌陽性率比較 321份標本通過雙瓶血培養(yǎng)法有108份培養(yǎng)出細菌，陽性率為33.6%，通過直接接種法55份標本培養(yǎng)出細菌，陽性率為17.1%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），詳見表1。

表1 兩種方法分離細菌陽性率比較［n（%）］

2.2 兩種方法細菌檢出時間比較 血培養(yǎng)增菌后80%細菌在24～48h內(nèi)檢出，而直接接種法90%細菌在24h檢出，檢出時間直接接種法更具優(yōu)勢。見表2。

表2 兩種方法檢出時間比較［n（%）］

2.3 不同方法敏感性符合率比較 血培養(yǎng)瓶法的敏感性為89.7%，陰性符合率為95.3%，直接接種法分別為43.2%和76.3%，而陽性符合率直接法略高于血培養(yǎng)瓶法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 不同方法敏感性符合率比較

2.4 培養(yǎng)瓶法和直接接種法細菌分布情況 321份標本中，大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和屎腸球菌在兩種方法的檢出率最高而陽性符合率較為一致。草綠色鏈球菌、厭氧菌和真菌在血培養(yǎng)瓶法中真陽性例數(shù)明顯高于直接法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），而凝固酶陰性葡萄球菌、棒狀桿菌、微球菌在血培養(yǎng)瓶法中的假陽性例數(shù)明顯高于直接法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。詳見表4。

表4 血培養(yǎng)瓶法和直接接種法細菌分布情況（n）

3 討 論

血液培養(yǎng)瓶營養(yǎng)成分豐富，較固體平板培養(yǎng)基更適于病原菌生長［6］，同時因含有樹脂、藥用炭等吸附抗菌藥物成分，能提高病原菌檢出率，除常見菌更易生長外，苛氧菌也生長良好。本研究研究顯示，雙瓶血培養(yǎng)增菌細菌陽性率為33.6%，而直接接種法細菌陽性率為17.1%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與王升和張紅升［7］報道結(jié)果一致。血培養(yǎng)瓶對各種無菌體液細菌檢出率高，主要原因有以下幾點：（1）血培養(yǎng)瓶營養(yǎng)成分豐富，添加吸附抗菌藥物的物質(zhì)可以提高病原菌檢出率；（2）直接接種法接種標本量較少，而血培養(yǎng)瓶注入5～10mL體液，使標本量增加；（3）血培養(yǎng)法培養(yǎng)時間為5d，且注入需氧厭氧血培養(yǎng)瓶，有利于厭氧菌、苛氧菌、真菌及生長緩慢病原菌的檢出。

血培養(yǎng)增菌法80%病原菌在24～48h內(nèi)檢出，而直接接種法90%病原菌在24h就能生長，直接接種法在縮短檢出時間上更具優(yōu)勢，但卻容易出現(xiàn)漏檢。屎腸球菌、大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌在兩種方法中檢出率最高且陽性符合率較一致。經(jīng)統(tǒng)計分析，凝固酶陰性葡萄球菌、草綠色鏈球菌、棒桿菌、微球菌、厭氧菌和真菌在兩種方法中的差異明顯，這可能與鏈球菌對營養(yǎng)條件要求高，血培養(yǎng)瓶法更利于其生長有關(guān)。但延長直接接種法培養(yǎng)時間是否能提高鏈球菌檢出率還有待進一步研究。通過方法學(xué)評價，血培養(yǎng)法的敏感性和陰性符合率高于直接接種法，而陽性符合率略低于直接接種法，這與體液標本注入血培養(yǎng)瓶容易二次污染而致假陽性結(jié)果有關(guān)。而通過臨床資料分析發(fā)現(xiàn)，造成假陽性的主要菌株為凝固酶陰性葡萄球菌、棒桿菌和微球菌，這也是造成血培養(yǎng)瓶增菌法陽性符合率低的原因之一。與血培養(yǎng)相似，體液采集過程中也存在污染問題，因此應(yīng)嚴格注意無菌操作，采集后無需離心處理，直接注入培養(yǎng)瓶，減少污染環(huán)節(jié)［8－9］。另外，厭氧菌和真菌在血培養(yǎng)瓶法中真陽性例數(shù)明顯高于直接法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），這與臨床未對無菌體液進行厭氧培養(yǎng)而導(dǎo)致厭氧菌檢出率低有關(guān)，而真菌生長緩慢，需要延長培養(yǎng)時間提高其陽性率，血培養(yǎng)法因雙瓶培養(yǎng)和延長培養(yǎng)時間為5d可以防止其漏檢。在標本量允許的情況下，體液標本應(yīng)同時選用需氧瓶和厭氧瓶，縮短兼性厭氧菌報陽時間，懷疑真菌感染時，首選需氧瓶。同時需注意的是，雖然腦脊液檢出率仍為血培養(yǎng)瓶增菌法高于直接接種法，但有資料說明血培養(yǎng)瓶增菌不合適腦脊液標本，因為其中含有的聚茴香胺硫酸鈉對淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌有毒性［10］。

綜上所述，血培養(yǎng)瓶增菌法的敏感性明顯高于直接接種法，應(yīng)用于無菌體液培養(yǎng)可提高病原菌檢出率，與直接接種法同時培養(yǎng)可縮短檢出時間并防止漏檢，特別是對鏈球菌群、厭氧菌和真菌的檢出具有顯著優(yōu)勢，但需加強臨床溝通，加強無菌體液采集環(huán)節(jié)的規(guī)劃化管理，減少污染概率。

［1］梅凌英.無菌體液培養(yǎng)使用血瓶增菌和直接接種法探討［J］.中國保健營養(yǎng)：下旬刊，2013，23（2）：520.

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［4］徐丹，高旭紅，蔣莉，等.胸腹腔積液CRP與生化指標測定的臨床意義［J］.中國實驗診斷學(xué)，2009，13（9）：1229－1230.

［5］呂中全，李爽，李昊淼.應(yīng)用UF－100全自動尿沉渣分析儀檢測漿膜腔積液的作用和意義［J］.實用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26（2）：308－310.

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［7］王升，張紅升.無菌體液細菌培養(yǎng)的新方法探討［J］.實用醫(yī)技雜志，2007，14（22）：3025－3026.

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［10］張秀珍，朱德妹.臨床微生物檢驗問與答［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：32.