不同方法提取四數(shù)九里香揮發(fā)油氣質(zhì)聯(lián)用分析

龔志強(qiáng)，談遠(yuǎn)鋒，黃 敏，劉晨旭

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)a.賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院;b.醫(yī)藥會(huì)展中心，中國(guó)南寧 530001)

四數(shù)九里香Murraya tetramera Huang為蕓香科九里香屬植物，以干燥樹葉入藥，全年均可采收.主產(chǎn)于云南、廣西、貴州、福建、臺(tái)灣等亞洲熱帶及亞熱帶地區(qū)［1］.其味辛、微苦，性微溫，具有祛風(fēng)解表、行氣、活血散痛、抗炎、解熱之功效［2］.可治胃痛、風(fēng)濕痹痛，外用則可治牙痛、跌撲腫痛、蟲蛇咬傷等［3］.著名胃藥三九胃泰的主要組成即為四數(shù)九里香［4］.對(duì)四數(shù)九里香化學(xué)成分的研究已有文獻(xiàn)報(bào)告，陳家源等［5］用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油并確認(rèn)了其中37個(gè)組分，牙啟康等［6］運(yùn)用硅膠層析色譜分離了其中的5個(gè)化合物，張柯媛等［7］選用補(bǔ)骨脂素作為指標(biāo)成為建立其定性定量方法.研究表明四數(shù)九里香揮發(fā)油有顯著的抗炎和鎮(zhèn)痛作用［8］，為進(jìn)一步全面真實(shí)地反映四數(shù)九里香揮發(fā)油的化學(xué)成分，本文分別采用水蒸氣蒸餾、超臨界CO2流體萃取及超聲波溶劑萃取3種方法提取四數(shù)九里香揮發(fā)油化學(xué)成分并進(jìn)行了分析和比較.

1 儀器與材料

7890A/5975C氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC/MS，美國(guó)Agilent公司);HL-5+1L/50-Ⅱ AQ型超臨界CO2萃取裝置(杭州華黎泵業(yè)有限公司);DHG-9240A型電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱(上海精密試驗(yàn)設(shè)備有限公司);無(wú)水乙醇(分析純);無(wú)水硫酸鈉(分析純).四數(shù)九里香(2011年5月采于廣西龍州縣)經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)劉壽養(yǎng)副教授鑒定為Murraya tetramera Huang.

2 方法與結(jié)果

2.1 四數(shù)九里香揮發(fā)油的提取

2.1.1 水蒸氣蒸餾提取 根據(jù)2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄 XD［5］，取20 g粗粉(過(guò)750 μm篩)加500 mL蒸餾水，蒸餾時(shí)間5 h，得到淡黃色薄荷香氣味透明液體，收油率3.23%.餾出液用無(wú)水乙醚萃取后，用無(wú)水硫酸鈉干燥備用.

2.1.2 超臨界CO2流體萃取 以四數(shù)九里香干燥莖葉粉為實(shí)驗(yàn)材料，采用正交實(shí)驗(yàn)篩選超臨界CO2萃取最優(yōu)方案，即萃取溫度40℃，壓力25 MPa，萃取時(shí)間45 min，將200 g干燥莖葉粉末投入裝置萃取3次，得黃色濃郁薄荷香氣味透明液體，收油率約5.11%.餾出液用無(wú)水乙醚萃取后，用無(wú)水硫酸鈉干燥備用.

2.1.3 超聲波溶劑萃取法 取5 g干葉粗粉(過(guò)750 μm篩)，加入50 mL石油醚，超聲30 min，過(guò)濾得到濾液.濾液用無(wú)水乙醚萃取后，用無(wú)水硫酸鈉干燥備用.

2.2 氣相色譜質(zhì)譜分析條件

2.2.1 色譜條件 石英毛細(xì)管柱HP-5MS毛細(xì)管柱(30 m×25 μm×0.25 μm);載氣:高純He;進(jìn)樣口溫度:250℃;分流比:40∶1，進(jìn)樣量:1 μL.程序升溫:60℃ ～250℃;初始溫度60℃(保留1 min)，以10℃·min－1速率升溫至80℃(保留1 min);以2℃·min－1速率升溫至145℃(保留1 min);以25℃·min－1速率升溫250℃(保留1 min).

2.2.2 質(zhì)譜條件 EI離子源，能量70 eV，離子源溫度230℃，倍增電壓1.933 kV，掃描質(zhì)量范圍m/z為33～800.

2.3 揮發(fā)性成分鑒定

按上述實(shí)驗(yàn)條件，用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)四數(shù)九里香揮發(fā)油進(jìn)行分析，采用安捷倫GC-MS化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，以峰面積歸一法測(cè)得揮發(fā)性物質(zhì)各組分相對(duì)含量，3種方法提取的揮發(fā)油總離子流圖見圖1.對(duì)總離子流圖中各峰經(jīng)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)(NST08)，及配合人工譜圖解析，并查對(duì)有關(guān)數(shù)據(jù)文獻(xiàn)，從基峰相對(duì)豐度等幾個(gè)方面進(jìn)行直觀比較，鑒定3種方法提取揮發(fā)油化學(xué)組分如下表1.

圖1 不同提取方法提取揮發(fā)油總離子圖Fig.1 Supercritical extraction(A)，water distillation extraction(B)，and ultrasound extraction total ion flow graph

表1 不同提取方法得到的揮發(fā)油化學(xué)成分對(duì)比Tab.1 Component analysis of extracts from different extraction methods

3 討論

超臨界CO2流體萃取法提取四數(shù)九里香揮發(fā)油鑒定了其中的38種成分.其中相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高的是薄荷酮(38.17%)、異薄荷酮(12.34%)、胡椒酮(10.90%)和 β-水芹烯(9.75%).水蒸氣蒸餾法提取四數(shù)九里香揮發(fā)油鑒定了其中的33種成分.其中胡椒酮(17.40%)、薄荷酮(20.51%)、異薄荷酮(6.94%)、β-水芹烯(11.59%)、萜品烯(13.38%).超聲波溶劑萃取法提取四數(shù)九里香揮發(fā)油鑒定了其中的12種成分.其中相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高的是薄荷酮(43.45%)、異薄荷酮(16.31%)、胡椒酮(9.97%)、側(cè)柏烯(11.40%)、β-水芹烯(9.35%).

對(duì)比3種提取方法得到的揮發(fā)油組分及其相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)差異較大，質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高均為薄荷酮，可用于四數(shù)九里香質(zhì)量控制指標(biāo)［10.其中SFE和超聲波溶劑萃取法的異薄荷酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)都相比SD高.而SD中胡椒酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)明顯高于SFE和超聲波溶劑萃取法，SD操作簡(jiǎn)便，成本低.SFE得到揮發(fā)的化學(xué)成分更加詳細(xì)真實(shí)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致［5，因萃取溫度低，對(duì)于低沸點(diǎn)的易揮發(fā)性化合物組分不易損失，其中脂肪族化合物種類及質(zhì)量分?jǐn)?shù)明顯多于水蒸汽蒸餾法和超聲提取法的揮發(fā)油，可能是由于SD溫度高、受熱時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)部分熱敏性組分產(chǎn)生了破壞［11，超聲波提取技術(shù)操作簡(jiǎn)便，耗時(shí)少，無(wú)需加熱，可是對(duì)溶劑選擇、超聲功率、提取時(shí)間等未進(jìn)行考察［12，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定的影響.采用3種不同方法提取得到的四數(shù)九里香揮發(fā)性化合物數(shù)據(jù)，為其進(jìn)一步的開發(fā)和利用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù).

［1］中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯部委員會(huì).中國(guó)植物志［M］.北京:科學(xué)技術(shù)出版社，1997:145-146.

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